兩種氟苯尼考制劑產(chǎn)品比較藥動學(xué)研究

（中牧實業(yè)股份有限公司北京100070）

兩種氟苯尼考制劑產(chǎn)品比較藥動學(xué)研究

萬進，牛志強，徐瑞華，朱光山

（中牧實業(yè)股份有限公司北京100070）

健康杜長大豬16頭（體重為18±1kg）隨機分為A、B兩組，以20mg/kg劑量單次灌服兩種氟苯尼考制劑（20%氟苯尼考粉和2%氟苯尼考預(yù)混劑），并于給藥后不同時間點從前腔靜脈采血，采用已建立的高效液相色譜法（HPLC）進行血藥濃度測定，利用WinNonlin軟件的非房室模型擬合其血藥濃度-時間數(shù)據(jù)。方法學(xué)研究表明本實驗建立的HPLC方法專屬性良好，在目標峰附近無雜質(zhì)干擾，線性良好，線性范圍為0.03～10μg/mL，相關(guān)系數(shù)為0.9994。20%氟苯尼考粉主要藥動學(xué)參數(shù)為：Tmax=1.13± 0.64h，Cmax=9.61±2.65μg/mL，T1/2=3.84±1.56h，MRT=4.65±0.70h，AUC=52.56±16.99 h*μg/mL；2%氟苯尼考預(yù)混劑主要藥動學(xué)參數(shù)為：Tmax=1.31±0.37h，Cmax=8.30±2.17μg/mL，T1/2=3.39± 0.35h，MRT=4.93±0.74h，AUC=49.84±17.54 h*μg/mL。比較藥動學(xué)結(jié)果表明20%氟苯尼考粉相對于2%氟苯尼考預(yù)混劑的相對生物利用度為105.45%。經(jīng)T檢驗和方差分析，二者主要藥動學(xué)參數(shù)無顯著差異，在豬體內(nèi)可視為有相似的藥動學(xué)過程，但前者在飲水灌服給藥時能在更短的時間吸收分布、達到血藥峰濃度，且血藥峰濃度略高于2%氟苯尼考預(yù)混劑，故20%氟苯尼考粉起效更快、效果稍好于2%氟苯尼考預(yù)混劑。

氟苯尼考制劑、豬、口服、比較藥動學(xué)

氟苯尼考是上世紀八十年代后期成功研制的一種新的獸醫(yī)專用酰胺醇類廣譜抗菌藥，對大部分革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有強效，多用于敏感細菌所致的豬、雞及魚的細菌性疾病，尤其對呼吸系統(tǒng)感染和腸道感染療效顯著。其抗菌機理為作用于細菌70s核糖體的50s亞基，抑制轉(zhuǎn)肽酶，使肽酶的增長受阻，抑制了肽鏈的形成，從而阻止蛋白質(zhì)的合成，達到抗菌作用[1]。本藥口服吸收迅速、分布廣泛，半衰期長，血藥濃度高且持續(xù)時間長[2]。

目前市面上制劑類型眾多，有粉劑、預(yù)混劑和注射劑。為比較不同劑型氟苯尼考制劑在豬體內(nèi)的藥動學(xué)，中牧南京動物藥業(yè)有限公司與華中農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)藥理學(xué)與毒理學(xué)課題組根據(jù)農(nóng)業(yè)部《獸用化學(xué)藥物臨床藥代動力學(xué)試驗指導(dǎo)原則》[3]，對市售兩種類型氟苯尼考產(chǎn)品進行了豬口服比較藥動學(xué)的研究，以檢驗氟苯尼考制劑不同工藝在豬體內(nèi)藥代動力學(xué)參數(shù)，從而不斷改進產(chǎn)品質(zhì)量，滿足養(yǎng)殖業(yè)需求。

1 實驗材料

1.1 藥品

氟苯尼考標準品，批號：k0301305，規(guī)格：100mg，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

20%氟苯尼考粉（氟欣泰），批號：16072101，中牧南京動物藥業(yè)有限公司。

2%氟苯尼考預(yù)混劑，市售。

1.2 試劑與耗材

甲醇，色譜純，批號：16015079，賽默飛世爾科技（中國）有限公司。

乙腈，色譜純，批號：16065015，賽默飛世爾科技（中國）有限公司。

乙酸乙酯，分析純，批號：20160321，國藥集團股份有限公司。

1.3 儀器設(shè)備

高效液相色譜儀，美國waters公司(waters2695)。電子天平，感量0.00001g，Shimadzu，日本島津公司。旋渦混合器，XW-80A，海門市其林貝爾公司。

氮吹儀，N-EVAPTM112，Organomation Associates,Inc。

高速冷凍離心機，HITACHI CR21GⅢ，日本日立公司。

超純水機，Milli-Q，美國Millipore公司。

電熱干燥箱，DGX-9243B-1，上海?，攲嶒炘O(shè)備有限公司。

超聲波儀，KQ3200型，昆山市超聲儀器有限公司。

振蕩器，THZ-H-1，Tokyo Rikakikai Co.Ltd.

電子秤，TCS-150，永康市江南衡器廠。

1.4 溶液配制

氟苯尼考標準儲備液：精確稱取10 mg氟苯尼考標準品于10 mL的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成1 mg/mL的標準儲備液，保存在-20℃?zhèn)溆谩?/p>

氟苯尼考標準工作液：準確量取適量標準儲備液用甲醇稀釋成適宜濃度的氟苯尼考標準工作液。置2-8℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 試驗動物和飼料

16頭公母各半的60日齡體重為（18±1）kg的健康杜長大豬（杜洛克×長白×大白），從華中農(nóng)業(yè)大學(xué)種豬場購買后在華中農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗場地飼養(yǎng)適應(yīng)環(huán)境1周。適應(yīng)環(huán)境期間的飼養(yǎng)環(huán)境溫度為18～25℃，相對濕度為50～65%，自由飲水，飼養(yǎng)期間飼喂未添加任何藥物的飼料。飼料由武漢市春龍實驗動物飼料機械經(jīng)營部加工生產(chǎn)，配方為玉米粉：53%；豆粕：24%；三等粉：8%；麩皮：8%；魚粉：4%；鹽：1%；預(yù)粉料：2%。

2 試驗方法

2.1 高效液相色譜法(HPLC)的檢測條件

色譜柱：C18(Dim：250×4.6 mm，ID：5 μm)；柱溫：30℃；進樣體積：20 μL；流動相：水/乙腈（68/32，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：224 nm。

2.2 標準曲線的繪制

精密量取氟苯尼考標準工作液適量配制成濃度為0.03、0.05、0.1、0.5、0.8、1、5和10 μg/mL的系列標準溶液，利用建立的HPLC方法進行定量測定，每個濃度重復(fù)測定三次，利用平均峰面積與相應(yīng)濃度作線性回歸，計算回歸方程及相關(guān)系數(shù)。

2.3 樣品前處理

取0.5 mL血漿于10 mL EP管中，加1.5 mL乙酸乙酯，渦旋5 min，4 000 r/min離心10 min，取上層乙酸乙酯上清液，重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，氮氣吹干，殘留物用0.25 mL的初始流動相溶解，渦旋5 min，12 000 r/min離心5 min，過0.22 μm濾膜，上樣進行測定。

2.4 HPLC方法考察

圖8 給出了各個算法的同步誤差性能與信標節(jié)點和普通接收節(jié)點同步過程中消息總數(shù)的關(guān)系[12].從圖中可以看出,對于每種算法,隨著消息總數(shù)的增加,算法的同步誤差都在減小,但是不同算法的誤差下降幅度是不一樣的.CB-Sync算法在消息總數(shù)小于20時,較其他算法有較好的同步性能;在消息總數(shù)大于25時,CB-Sync算法與其他算法的同步誤差性能接近.換言之,CB-Sync較CCS-Sync,DA-Sync,D-Sync算法可以以更少的能量消耗得到更高的同步精度.

對所建HPLC方法的專屬性、檢測限和定量限、準確度和精密度、穩(wěn)定性進行實驗和考察。

2.5 藥動學(xué)試驗

選取適應(yīng)環(huán)境的健康杜長大豬16頭，隨機分成2組、每組8頭，禁食12 h后分別按20 mg/kg劑量（溶解和混懸于140 mL1%羧甲基纖維素鈉）單次灌服20%氟欣泰可溶粉和2%氟苯尼考預(yù)混劑，并于給藥后于0.083、0.25、0.51、1.5、2、4、6、8、12、18、24 h從前腔靜脈采血5 mL，分離血漿、提取、按建立的HPLC方法進行血藥濃度的測定。試驗期間飼喂不含任何藥物的飼料，自由飲水。根據(jù)試驗中測得的每頭豬的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)，繪制每組的平均藥時曲線。

2.6 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析

利用WinNonlin非房室模型處理血藥濃度-時間數(shù)據(jù)，然后利用SPSS方差分析比較藥動學(xué)參數(shù)的差異。

3 .結(jié)果

3.1 所建HPLC方法色譜圖

3.2 標準工作曲線及線性范圍

氟苯尼考標準溶液在0.03～10 μg/mL范圍內(nèi)，各濃度與其響應(yīng)值（峰面積）成線性相關(guān)，對濃度(X)與峰面積（Y）進行線性回歸，得出氟苯尼考線性方程為：y=21.641x-413.66，相關(guān)系數(shù)r=0.9994。HPLC檢測方法在豬血漿的最低檢測限為0.05 μg/mL，定量限為0.1 μg/mL。

3.3 豬灌服20%氟欣泰和2%氟苯尼考預(yù)混劑后各采血點血藥濃度（見表1）

圖1 氟苯尼考的液相色譜圖：A：溶劑；B：空白血漿；C：氟苯尼考標準品(0.1μg/mL)；D：空白血漿添加氟苯尼考標準品(0.1 μg/mL)

表1

圖2 豬口服20%氟欣泰和2%氟苯尼考預(yù)混劑(20mg/kg)的血藥濃度-時間曲線(Mean±SD，n=8）

豬口服20%氟欣泰和2%氟苯尼考預(yù)混劑(20mg/kg)的血藥濃度-時間曲線(Mean±SD，n=8）

3.4 經(jīng)WinNonlin軟件非房室模型處理血藥濃度-時間后得到的主要藥代動力學(xué)參數(shù)（見表2）

表2

經(jīng)上述所得藥動學(xué)參數(shù)分析，得知20%氟欣泰可溶粉相對于2%氟苯尼考預(yù)混劑的相對生物利用度為105.45%

4 .討論

4.1 方法和主要藥動學(xué)參數(shù)的特點

本試驗在建立豬血漿中氟苯尼考濃度的測定方法時根據(jù)以往研究對流動相進行了優(yōu)化。當(dāng)選擇0.1%氨水作為水相時，氟苯尼考出峰太早且峰型不對稱。用超純水作水相氟苯尼考保留時間在7.79min左右，且峰型對稱性良好，溶劑、空白血漿在氟苯尼考保留時間附近未見干擾峰出現(xiàn)。

4.2 對主要藥動學(xué)參數(shù)和血藥濃度的分析

藥動學(xué)研究顯示2%氟苯尼考預(yù)混劑的MRT和T1/2與仆仕金報道相似[4]，Tmax與研究報道的氟苯尼考粉相似[5]，略小于仆仕金報道。20%氟欣泰可溶粉主要藥動學(xué)參數(shù)與2%氟苯尼考預(yù)混劑基本相似。對重要藥代動力學(xué)參數(shù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，采用SPSS軟件對兩制劑的Tmax、Cmax和AUC進行均值一致性t檢驗分析，得到的|t|值分別為0.716、1.075和0.482，均小于t0.05=2.1318，在95%的置信區(qū)間內(nèi)不存在顯著性差異。從藥時曲線得知，在給藥18h后氟苯尼考血藥濃度為0.33±0.20μg/mL，該濃度對大部分敏感菌有較強抑制效果。其中氟苯尼考對胸膜肺炎放線桿菌的最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）分別為0.50μg/mL和1.0μg/mL[6]，在20%氟欣泰灌服8h和12h時，其血藥濃度分別為2.04±0.90μg/mL和0.67± 0.46μg/mL，故20%氟欣泰給藥一次后，其對胸膜肺炎放線桿菌的抑殺效果持續(xù)時間達8～12h，對豬場這一重要致病菌有很好的防控作用。

4.3養(yǎng)殖場推薦用藥方案

基于對兩種氟苯尼考制劑的比較藥動學(xué)20%氟欣泰可溶粉和2%氟苯尼考預(yù)混劑在豬體內(nèi)存在相似的內(nèi)服藥動學(xué)，但前者在飲水灌服給藥后15分鐘已很好的吸收分布（血藥濃度達到6.42± 2.59μg/mL）、在更短的時間達到血藥峰濃度，且血藥峰濃度略高于氟苯尼考預(yù)混劑，故在相同投藥（飲水）條件下，氟欣泰起效更快、效果更好。■

[1]Shen J,Hu D,Wang X,Coats JR.Bioavaflabflity and pharmacokinetics of florfenicol in broiler chickens[J]．Vet Pharmacol Ther., 2003,26:337-34l．

[2]蔣紅霞，曾振靈，陳杖榴,等。豬饑餓和喂飼后內(nèi)服氟甲礬霉素的藥動學(xué)比較[J]．華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2000，21(4)：68-69．

[3]農(nóng)業(yè)部.獸用化學(xué)藥物臨床藥代動力學(xué)試驗指導(dǎo)原則[S].北京：農(nóng)業(yè)部第1247號公告，2009

[4]王雅琴，仆仕金,等．10%氟欣泰和2%紐弗羅預(yù)混劑在豬的比較藥動學(xué)研究[C]．學(xué)術(shù)討論會，2013，S85 R96．

[5]劉帥帥，楊剛，趙永達，方秋華，黃顯會．氟苯尼考顆粒與氟苯尼考粉在豬體內(nèi)的藥物動力學(xué)比較[J]。華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2012，33（2）：235-238．

[6]董靜.豬肌注氟苯尼考的藥動學(xué)-藥效學(xué)研究[D]．武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008：33．

10.3969/j.issn.1008-4754.2017.05.049