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    過(guò)氧化氫生物傳感器的研究新進(jìn)展

    2017-08-09 09:55:03尚書(shū)勇傅小紅
    化學(xué)傳感器 2017年1期
    關(guān)鍵詞:原理圖過(guò)氧化氫納米材料

    劉 婷,路 靜,魏 敏,徐 坤,尚書(shū)勇,傅小紅

    (成都師范學(xué)院,四川成都611130)

    過(guò)氧化氫生物傳感器的研究新進(jìn)展

    劉 婷,路 靜,魏 敏,徐 坤,尚書(shū)勇,傅小紅*

    (成都師范學(xué)院,四川成都611130)

    過(guò)氧化氫在各個(gè)領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用,然而過(guò)氧化氫在致癌、加速衰老或誘發(fā)心血管疾病等方面有一定的毒性作用,因此,建立一種快速、靈敏、高效、穩(wěn)定的方法來(lái)測(cè)定過(guò)氧化氫具有重要的意義。由此文章綜述了在有酶和無(wú)酶對(duì)比條件下過(guò)氧化氫生物傳感器的發(fā)展歷程及作用原理。

    過(guò)氧化氫傳感器;有酶;無(wú)酶

    0 引言

    近年,食品安全問(wèn)題備受關(guān)注,過(guò)氧化氫具有高效殺菌,易分解,低殘留,漂白效果好的特點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于食品生產(chǎn)加工[1]。過(guò)氧化氫也是一種重要的化工原料,被應(yīng)用于紡織行業(yè),造紙工業(yè),化工,電子產(chǎn)品,環(huán)境領(lǐng)域等,用途廣泛[2]。但是過(guò)氧化氫在致癌、加速衰老或誘發(fā)心血管疾病等方面有一定的毒性作用[3]。由于過(guò)氧化氫具有易分解,低殘留及其他因素的影響,使得過(guò)氧化氫檢測(cè)的靈敏度不高,準(zhǔn)確度差,因此實(shí)現(xiàn)建立一種穩(wěn)定、靈敏、快速、高效的方法來(lái)測(cè)定過(guò)氧化氫具有重要的意義。

    目前常用于測(cè)定過(guò)氧化氫的方法有化學(xué)滴定法、色譜法、分光光度法、熒光光度法、電化學(xué)分析法[4]。因電化學(xué)分析法具有靈敏度高,選擇性好,操作簡(jiǎn)便和響應(yīng)快等特點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于過(guò)氧化氫測(cè)定的研究中[5-7]。電化學(xué)生物傳感器是電化學(xué)分析方法中發(fā)展起來(lái)的一種新型檢測(cè)技術(shù)。生物傳感器通過(guò)利用生物特異性識(shí)別過(guò)程來(lái)對(duì)待測(cè)物實(shí)現(xiàn)檢驗(yàn)[8-9],由敏感元件和轉(zhuǎn)換元件兩大模塊組成,通常以生物活性物質(zhì)作為敏感元件,如酶,抗原,抗體,細(xì)胞,組織等,敏感元件與待測(cè)物產(chǎn)生物理、化學(xué)變化被轉(zhuǎn)換元件捕獲,將其轉(zhuǎn)化為電信號(hào)、光信號(hào)或磁信號(hào)等。生物傳感器作用原理如下圖1所示。

    圖1 生物傳感器作用原理圖Fig.1 Principle diagram ofbiosensor

    電化學(xué)生物傳感器[10]是基于電化學(xué)分析方法中發(fā)展起來(lái)的一種新型檢測(cè)技術(shù),根據(jù)所用電子傳遞劑的不同,主要經(jīng)歷了三個(gè)階段,第一代以自然物質(zhì)(如氧氣)作為電子傳輸媒介;第二代以小分子的人造電子傳遞媒介 (如鐵氰化物、二茂鐵);第三代以酶與電極之間的直接電子轉(zhuǎn)移。根據(jù)各階段傳感器特點(diǎn)比較,第三代無(wú)需引入媒介體,與氧氣及其他電子受體無(wú)關(guān),固定化相對(duì)簡(jiǎn)單,無(wú)外加毒性物質(zhì)的優(yōu)勢(shì),也是現(xiàn)階段學(xué)者研究的重中之重。

    目前,可將過(guò)氧化氫電化學(xué)生物傳感器細(xì)分為酶過(guò)氧化氫生物傳感器和無(wú)酶過(guò)氧化氫生物傳感器,因此將從酶過(guò)氧化氫生物傳感器和無(wú)酶過(guò)氧化氫生物傳感器兩個(gè)方面進(jìn)行展開(kāi)。

    1 酶過(guò)氧化氫生物傳感器

    酶生物傳感器[11]是以酶作為敏感元件的電化學(xué)生物傳感器。酶生物傳感器的基本結(jié)構(gòu)單元由敏感元件(固定化酶膜)和轉(zhuǎn)換元件(基體電極)組成。當(dāng)酶膜上發(fā)生酶促反應(yīng)時(shí),基體電極捕捉反應(yīng)產(chǎn)生的電活性物質(zhì)將化學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào),從而實(shí)現(xiàn)檢測(cè)。

    目前,發(fā)現(xiàn)辣根過(guò)氧化物酶、葡萄糖氧化酶、醋氨酸酶、細(xì)胞色素C過(guò)氧化物酶、超氧化物歧化酶、黃嘿嶺氧化酶、微過(guò)氧化物酶等少數(shù)物質(zhì)能在合適的電極上進(jìn)行直接電催化[12]。固定化酶主要有辣根過(guò)氧化物酶(HRP)、血紅蛋白(Hb)及過(guò)氧化氫酶(Cat)[13]。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),目前酶過(guò)氧化氫生物傳感器常見(jiàn)的種類有基于殼聚糖,明膠,納米材料,硫堇及幾種復(fù)合材料的酶過(guò)氧化氫生物傳感器。

    1.1 基于殼聚糖酶過(guò)氧化氫生物傳感器研究進(jìn)展

    夏文水等[14-15]指出殼聚糖是一種多孔網(wǎng)狀天然高分子材料,具有良好的生物相容性、成膜性,分子中的羥基和氨基能形成活潑界面,其對(duì)蛋白質(zhì)具有顯著的親合力,能夠吸附酶并以離子鍵、氫鍵及范德華力的形式與載體結(jié)合,并用吸附—交聯(lián)法以提高其穩(wěn)定性,最常用的交聯(lián)劑是甲醛和戊二醛。文中也指出這種固定化酶具有活性高、回收率高和耐貯藏等優(yōu)勢(shì)并且殼聚糖無(wú)毒無(wú)害無(wú)污染。

    孫妮等[16]制得殼聚糖-硅溶膠復(fù)合膜固載甲苯胺藍(lán)及納米金的新型電流型過(guò)氧化氫生物傳感器,其構(gòu)建原理圖如圖2所示,該研究表明在最佳實(shí)驗(yàn)條件下,H2O2濃度在7.0×10-7~2.3×10-3mol/L范圍內(nèi),還原峰電流呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,檢測(cè)下限為2.4×10-7mol/L(信噪比3),響應(yīng)電流靈敏度較高,線性范圍寬,檢測(cè)下限低,選擇性良好。

    圖2 殼聚糖-硅溶膠復(fù)合膜固載甲苯胺藍(lán)及納米金的新型電流型過(guò)氧化氫生物傳感器的構(gòu)建原理圖Fig.2 Construction principle diagram ofa novelamperometric hydrogen peroxide biosensor based on TBand GNPsaswellassilica sol-gel/CS film as immobilizationmatrix

    1.2 基于明膠酶過(guò)氧化氫生物傳感器研究進(jìn)展

    魏坤銳等[17]指出明膠分子鏈上有大量的活性基團(tuán)(如羧基,氨基及羥基),是一種無(wú)抗原性,生物相容性好,可生物降解的天然高分子材料具有組織相容性、低抗原性、可降解性等優(yōu)良特性,為固定化酶的優(yōu)良載體。楊寅等[18]對(duì)多孔明膠固定化酶進(jìn)行研究,研究指出多孔明膠支架具有三維孔洞結(jié)構(gòu)、且生物相容性好,固定化過(guò)氧化氫酶活力回收率達(dá)到51.1%,熱穩(wěn)定性、貯藏穩(wěn)定性都較游離酶有一定程度的提高,并且重復(fù)操作10次后活力仍保持在60%以上,但是其相對(duì)于基于殼聚糖的酶過(guò)氧化氫生物傳感器優(yōu)勢(shì)不夠明顯,可以將其與其他材料共用不斷改進(jìn),發(fā)揮其優(yōu)勢(shì)。

    1.3 基于納米材料酶過(guò)氧化氫生物傳感器研究進(jìn)展

    納米材料[19]其導(dǎo)電性能好,化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,質(zhì)量密度小,粒徑小比表面積大,具有良好的生物相容性,加速電子傳遞、增加電流響應(yīng)、提高檢測(cè)的靈敏度和線性范圍。楊海朋等[20]指出納米材料有碳納米管,石墨烯,納米金(銀),納米棒、納米線,納米陣列(如鉑納米陣列,導(dǎo)電聚苯胺納米管陣列等),片狀,層狀納米材料(如層狀雙氫氧化物黏土,二氧化鈦納米片)。

    圖3 基于辣根過(guò)氧化物酶/納米金/辣根過(guò)氧化物酶/多壁納米碳管修飾的過(guò)氧化氫生物傳感器構(gòu)建原理圖Fig.3 Construction principle diagram ofhydrogen peroxide biosensorbased on horseradish peroxidase/nano gold/ horseradish peroxidase/multiwalled carbon nanotubes

    張凌燕等[21]基于辣根過(guò)氧化物酶/納米金/辣根過(guò)氧化物酶/多壁納米碳管修飾的過(guò)氧化氫生物傳感器,其構(gòu)建原理圖如圖3所示,研究表明在無(wú)電子媒介體時(shí),該傳感器對(duì)H2O2仍能具有良好的催化活性,放大了電信號(hào),提高了該酶?jìng)鞲衅鞯撵`敏度及穩(wěn)定性,在H2O2濃度為1.0×10-6~1.0×10-3mol/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)線性響應(yīng),線性方程y=0.1915x+48.957,r=0.9964。翟牧牧等[22]基于血紅蛋白-石墨烯構(gòu)建的過(guò)氧化氫傳感器,在H2O2濃度為1.0×10-7~3.5×10-4mol/L,呈現(xiàn)線性關(guān)系 (r= 0.996),檢測(cè)限為3.64×10-8mol/L(S/N=3),靈敏度為30.61μA(mmol/L)-1cm-2,該傳感器對(duì)H2O2的響應(yīng)迅速,具有較寬的線性范圍,靈敏度高并且在重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和選擇性方面表現(xiàn)良好。

    基于納米材料的酶過(guò)氧化氫生物傳感器在測(cè)定過(guò)氧化氫方面具有明顯的優(yōu)勢(shì),制備該種的傳感器時(shí)重點(diǎn)是防止膜的掉落,因此,制備的膜需要均一,濃度需要適當(dāng),否則很容易引起膜的掉落,導(dǎo)致穩(wěn)定性和重現(xiàn)性達(dá)不到滿意的效果。

    1.4 基于硫堇酶過(guò)氧化氫生物傳感器研究進(jìn)展

    陳賢光等[23]指出硫堇是一種吩嗪類陽(yáng)離子染料小分子,結(jié)構(gòu)與亞甲基藍(lán)相似,具有良好的電化學(xué)活性和靜電吸附作用力,從而被廣泛使用作為一種良好的電子媒介體,硫堇分子結(jié)構(gòu)中含有與納米金形成共價(jià)鍵的硫原子和氮原子,且為正電荷,存在強(qiáng)烈的相互作用力。高風(fēng)仙等[24]基于聚硫堇和納米金共修飾的過(guò)氧化氫生物傳感器,其構(gòu)建原理圖如圖4所示,在5.2×10-7~2.0×10-3mol/L范圍內(nèi),響應(yīng)電流與H2O2濃度成線性關(guān)系(r=0.9975),檢出限為1.7×10-7mol/L(S/N=3)。該傳感器增加了酶的吸附量,靈敏度高、穩(wěn)定性好,對(duì)H2O2表現(xiàn)出良好的響應(yīng)特性。

    圖4 基于聚硫堇和納米金共修飾的過(guò)氧化氫生物傳感器構(gòu)建原理圖Fig.4 Construction principle diagram ofhydrogen peroxidebiosensorbased on poly(thionine)and Au colloid

    鄧春燕[25]等研究了基于硫堇/CNTs的復(fù)合材料,構(gòu)建了一種新型的HRP/GA-Th/CNTs/GC電極的過(guò)氧化氫傳感器。硫堇分子吸附在CNTs修飾電極表面實(shí)現(xiàn)了CNTs表面氨基(-NH2)功能化,利于HRP的固定。文中也指出硫堇作為電子媒介體有利于電子在電極和HRP活性位點(diǎn)之間的傳遞。其檢出限低(0.3μmol/L),響應(yīng)時(shí)間短(5 s內(nèi)),抗干擾能力強(qiáng),穩(wěn)定性好。比較得知,硫堇優(yōu)勢(shì)明顯,特別是硫堇與其他材料共用的復(fù)合材料,在穩(wěn)定性方面優(yōu)勢(shì)明顯,檢測(cè)限低。

    1.5 基于幾種材料酶過(guò)氧化氫生物傳感器比較

    通過(guò)幾種材料酶?jìng)鞲衅鬟M(jìn)行比較(表1所示),由此可得各種材料各具優(yōu)勢(shì),其中殼聚糖、納米材料及硫堇更具優(yōu)勢(shì),目前研究者研究的新型復(fù)合材料的傳感器各具特色,增強(qiáng)響應(yīng),降低檢出限,但是這并不意味著新型復(fù)合材料的酶?jìng)鞲衅骺隙▋?yōu)于單一材料,修飾在電極上的材料越多,材料之間的生物相容性,材料之間的連接方式都是重中之重。

    表1 基于幾種材料酶過(guò)氧化氫生物傳感器比較Tab.1 Com parison of hydrogen peroxide biosensor based on severalmaterials

    2 無(wú)酶過(guò)氧化氫生物傳感器

    閆種可[26]在基于氧化亞銅納米線的無(wú)酶型傳感器研究中指出無(wú)酶過(guò)氧化氫生物傳感器是通過(guò)修飾在電極表面的載體實(shí)現(xiàn)底物和電極之間電子的交換,電極上不需要生物活性物質(zhì),對(duì)于傳感器的靈敏度、檢測(cè)限及穩(wěn)定重現(xiàn)性表現(xiàn)出一定的優(yōu)勢(shì)。楊云慧等[27]指出雖然酶過(guò)氧化氫生物傳感器有很多的優(yōu)點(diǎn),但制備酶電極的過(guò)程復(fù)雜,且酶是具有活性的生物大分子,容易失活變性,對(duì)外界條件的變化比較敏感,在傳感器的壽命和測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性受到影響,在實(shí)際應(yīng)用中受到一定的限制。因此,無(wú)酶生物傳感器制備及應(yīng)用是現(xiàn)代研究的重點(diǎn)之一。目前,常見(jiàn)的無(wú)酶過(guò)氧化氫生物傳感器有基于金屬及其氧化物納米材料,碳納米材料構(gòu)建的無(wú)酶過(guò)氧化氫生物傳感器。

    2.1 基于金屬及其氧化物納米材料的無(wú)酶過(guò)氧化氫生物傳感器研究進(jìn)展

    鉑和金是無(wú)酶電化學(xué)傳感器中使用最早的納米金屬電極材料,但是鉑和金屬于貴金屬,含量少,并且兩者都容易受到Cl-影響,影響其催化活性和穩(wěn)定性,因此研究者選用Pd構(gòu)建傳感器,活性高,價(jià)格低廉,含量相對(duì)豐富。張敏等[28]基于Pd納米線的過(guò)氧化氫無(wú)酶?jìng)鞲衅餮芯勘砻?,該傳感器?duì)過(guò)氧化氫具有很好的電化學(xué)催化作用,能夠?qū)^(guò)氧化氫快速響應(yīng),對(duì)過(guò)氧化氫的響應(yīng)范圍1.0×10-5~1.62×10-3mol/L,檢出限為6.0×10-6mol/L,具有較好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。此外,還有基于Ag,Ni,Cu等金屬納米材料及其氧化物納米材料構(gòu)建的無(wú)酶過(guò)氧化氫生物傳感器。王奕琛等[29]基于碳載小尺寸銀納米顆粒的過(guò)氧化氫電化學(xué)傳感器,響應(yīng)時(shí)間為1.8 s,檢出限2.2×10-6mol/L,線性范圍為2×10-5~1.4×10-2mol/L,r=0.997,并且該碳負(fù)載的銀納米粒子表現(xiàn)出高穩(wěn)定性和催化活性。

    圖5 基于含Ni稀土鈣鈦礦LaNiTiO3的過(guò)氧化氫無(wú)酶?jìng)鞲衅鳂?gòu)建原理圖Fig.5 Construction principle diagram ofanonenzymatic sensor forH2O2detection based onrare-earth perovskite LaNiTiO3containing Ni

    王海燕等[30]構(gòu)建基于含Ni稀土鈣鈦礦LaNiTiO3的過(guò)氧化氫無(wú)酶?jìng)鞲衅鳎錁?gòu)建原理圖如圖5所示,該傳感器響應(yīng)時(shí)間短(約2 s),線性范圍寬(2×10-7~8.0×10-3),檢出限低(5×10-8mol/L, S/N=3)靈敏度(957μA(mmol/L)-1cm-2),重現(xiàn)性好和抗干擾能力強(qiáng)。與有酶的過(guò)氧化氫生物傳感器相比,無(wú)酶?jìng)鞲衅骶哂懈玫闹噩F(xiàn)性,并且抗干擾能力強(qiáng),在濃度測(cè)定方面也具有良好的線性,相較于有酶?jìng)鞲衅?,無(wú)酶?jìng)鞲衅鞲邇?yōu)勢(shì)。

    2.2 基于碳納米材料的無(wú)酶過(guò)氧化氫生物傳感器研究進(jìn)展

    碳納米材料可分為碳納米管,石墨烯,碳納米纖維,富勒烯等。目前,研究者都趨向制備復(fù)合材料來(lái)對(duì)過(guò)氧化氫進(jìn)行測(cè)定。李理等[31]基于石墨烯和金納米棒復(fù)合物的過(guò)氧化氫電化學(xué)傳感器,此納米修飾電極對(duì)H2O2的還原具有良好的電催化性能,顯示出了高靈敏度,高穩(wěn)定性和快速響應(yīng)。

    李曉艷[32]基于離子液體功能化碳納米管負(fù)載銀納米粒子的無(wú)酶過(guò)氧化氫傳感器,其構(gòu)建原理圖如圖6所示,研究表明該復(fù)合材料傳感器具有明顯的優(yōu)勢(shì),其在過(guò)氧化氫濃度范圍為1.2×10-8~4.8×10-6mol/L,具有良好的線性,檢測(cè)限為3.9×10-9mol/L,在重現(xiàn)性和穩(wěn)定性的方面,通過(guò)測(cè)定五根相同的傳感器,五次檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為3.3%,用循環(huán)伏安法連續(xù)掃描50圈后,H2O2的還原峰電流為初始響應(yīng)值的94.3%,穩(wěn)定性和重現(xiàn)性表現(xiàn)良好。從中都可以看出碳納米材料在無(wú)酶?jìng)鞲衅鲬?yīng)用方面優(yōu)勢(shì)明顯,濃度范圍寬,穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好,并且在碳納米材料與其他材料共用比復(fù)合材料酶?jìng)鞲衅鞲邇?yōu)勢(shì)。

    圖6 基于離子液體功能化碳納米管負(fù)載銀納米粒子的無(wú)酶過(guò)氧化氫傳感器構(gòu)建原理圖Fig.6 Construction principle diagram ofNon enzymatic hydrogen peroxide sensor based on ionic liquid functionalized carbon nanotube loaded silvernanoparticles

    2.3 基于幾種材料無(wú)酶過(guò)氧化氫生物傳感器比較

    通過(guò)幾種材料無(wú)酶?jìng)鞲衅鬟M(jìn)行比較(表2所示),從數(shù)據(jù)中可以看出無(wú)酶?jìng)鞲衅髟诜€(wěn)定性方面和抗干擾能力表現(xiàn)突出,優(yōu)于有酶的過(guò)氧化氫傳感器,但是大多數(shù)的無(wú)酶?jìng)鞲衅魉鶞y(cè)的過(guò)氧化氫濃度范圍相對(duì)于有酶?jìng)鞲衅鬏^窄。其中最具優(yōu)勢(shì)的是離子液體功能化碳納米管負(fù)載銀納米粒子的無(wú)酶?jìng)鞲衅?,測(cè)定范圍,穩(wěn)定性,重現(xiàn)性,抗干擾能力都呈現(xiàn)出良好的趨勢(shì)。

    表2 基于幾種材料無(wú)酶過(guò)氧化氫生物傳感器比較Tab.2 Comparison of enzyme freehydrogen peroxide biosensorsbased on severalmaterials

    3 結(jié)語(yǔ)

    隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,對(duì)過(guò)氧化氫的檢測(cè)方法越來(lái)越多,檢測(cè)手段各具優(yōu)勢(shì)。過(guò)氧化氫傳感器可分為有酶和無(wú)酶?jìng)鞲衅?,有酶?jìng)鞲衅骶哂芯€性范圍廣,穩(wěn)定性,重現(xiàn)性好,抗干擾能力較好的特點(diǎn),但是相對(duì)與無(wú)酶?jìng)鞲衅鬟€需要在穩(wěn)定性,重現(xiàn)性,抗干擾能力方面進(jìn)行改善?,F(xiàn)今,研究者廣泛研究的是復(fù)合材料的過(guò)氧化氫傳感器,復(fù)合材料的過(guò)氧化氫傳感器能夠結(jié)合各種材料的優(yōu)勢(shì)使得膜電極上附著的酶含量大大增加,測(cè)得低濃度的過(guò)氧化氫,降低檢出限。目前,無(wú)酶?jìng)鞲衅饕驗(yàn)槠渫怀龅姆€(wěn)定性,重現(xiàn)性,抗干擾能力強(qiáng)的特點(diǎn)受到研究者的喜愛(ài),但是需要改善的是測(cè)定濃度范圍,無(wú)酶?jìng)鞲衅鞯木€性范圍比較窄,有待于提高。因此構(gòu)建一種穩(wěn)定、簡(jiǎn)單、靈敏、快速、高效的過(guò)氧化氫傳感器來(lái)測(cè)定過(guò)氧化氫仍是現(xiàn)今的研究重點(diǎn)。在此,感謝2016年國(guó)家級(jí)創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)基金的支持。

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    Research progressofhydrogen peroxidebiosensor

    Liu Ting,Lu Jing,WeiMin,Xu Kun,Shang Shu-yong,Fu Xiao-hong*
    (Chengdu NormalUniversity,Chengdu 611130,China)

    Hydrogen peroxide iswidely used in various fields.However,hydrogen peroxide has certain carcinogenic or accelerated aging and induced cardiovascular disease.So establishing a sensitive,rapid,efficient and stable method has important significance to the determination of hydrogen peroxide.Thus,this paper reviews the developmentand principleofhydrogen peroxidebiosensor in the presenceofenzymeand enzyme free conditions.

    hydrogen peroxide sensor;enzyme;no enzyme

    2016年國(guó)家級(jí)創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)基金(201614389011)

    *通信聯(lián)系人,Tel:15108315824,E-mail:349821304@qq.com

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