• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    葛根素和丹參酮ⅡA對維甲酸誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松大鼠生殖系統(tǒng)的修復(fù)作用

    2017-08-08 08:51:10雒志恒祁珊珊馮自立吳婕王永吉
    中國骨質(zhì)疏松雜志 2017年6期
    關(guān)鍵詞:模型

    雒志恒 祁珊珊 馮自立 吳婕 王永吉

    陜西理工大學(xué)維生素D生理與應(yīng)用研究所,陜西 漢中 723001

    絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(postmenopausal osteoporosis,PMOP),通常因女性絕經(jīng)后卵巢功能衰退,體內(nèi)雌激素水平急劇下降,導(dǎo)致破骨細(xì)胞活動度增加、骨轉(zhuǎn)化率升高而表現(xiàn)出全身骨量減少、骨密度降低、骨脆性增加的一種骨代謝疾病[1]。在維甲酸誘導(dǎo)的大鼠骨質(zhì)疏松癥模型中,維甲酸造成生殖系統(tǒng)損傷引起體內(nèi)雌激素水平降低導(dǎo)致骨質(zhì)疏松,與人類PMOP具有良好的相似性[2,3]。由于雌激素降低引起骨質(zhì)疏松的同時也對生殖系統(tǒng)引起生理改變而造成一定損傷[4],通過傳統(tǒng)的雌激素治療會導(dǎo)致子宮內(nèi)膜增生,卵巢增生甚至引發(fā)生殖系統(tǒng)癌變,存在一定風(fēng)險性,因此使用植物雌激素治療PMOP便得到廣大研究者的青睞。本研究使用葛根素與丹參酮ⅡA在對骨質(zhì)疏松癥進(jìn)行治療的同時觀察其是否對生殖系統(tǒng)存在修復(fù)作用,并對葛根素與丹參酮ⅡA這兩種植物雌激素對生殖系統(tǒng)的修復(fù)作用進(jìn)行比較,為絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松患者的生殖系統(tǒng)修復(fù)與治療提供參考。

    1 材料和方法

    1.1 實驗材料

    1.1.1 實驗動物:50只健康雌性SD大鼠(SPF級,由第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供,許可證號:SCXK-(軍)2012-0007)12周齡,體重200~220 g。

    1.1.2 主要試劑:維甲酸,含量99.4%,購于北京貝麗萊斯生物化學(xué)有限公司。葛根素98%、丹參酮ⅡA 10%,購于北京鼎國昌盛生物技術(shù)公司。苯甲酸雌二醇注射液4 mg/2 mL 購于赤峰博恩藥業(yè)公司。大鼠雌二醇Elisa(96T)試劑盒,購于上海西唐生物科技有限公司。

    1.1.3 主要儀器:尼康倒置熒光顯微鏡(Nikon Ti-S)、酶標(biāo)儀(BioTek)、分析天平(TB-214北京賽托利斯儀器有限公司)、小動物麻醉機(美國MATRX)。

    1.2 實驗動物分組與給藥

    50只雌性大鼠隨機分為正常組、模型組、葛根素組、丹參酮ⅡA組、苯甲酸雌二醇陽性對照組,每組10只,分籠飼養(yǎng),自由飲水、攝食。適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w后開始骨質(zhì)疏松建模。除正常組外,其余各組每日給予維甲酸80 mg/(kg·d)灌胃,建模21 d[5,6],正常組每日給予等量蒸餾水灌胃。建模21 d后開始給藥,葛根素組每日按50 mg/(kg· d)、丹參酮ⅡA組每日按200 mg/(kg·d)灌胃,雌二醇組每日按40 μg/(kg·d)腹腔注射,連續(xù)給藥70 d。

    1.3 組織樣品采集與指標(biāo)測定

    1.3.1 血清樣品采集:給藥結(jié)束后分別記錄各組大鼠體重,每只使用小動物麻醉機調(diào)節(jié)麻醉氣體(異氟烷)流量500~700 mL/min麻醉后稱重、眼眶靜脈采血5 mL,3000 r/min 4℃離心6 min,取上清置于- 80 ℃冰箱凍存,以備后用。

    1.3.2 生殖系統(tǒng)(子宮、陰道、卵巢)采集及臟器指數(shù)測定:CO2窒息法處死大鼠后用手術(shù)剪從大鼠腹腔正中剪開,迅速找到子宮及卵巢并分離周圍脂肪組織,連陰道一并迅速取出,剔除周圍結(jié)締組織后,PBS沖洗2次,用無塵無菌紙將PBS吸干,置于分析天平上稱重,記錄數(shù)據(jù)計算臟器指數(shù)[7]。記錄后將組織置于4%多聚甲醛中固定24h,備用。

    1.3.3 血清雌二醇含量測定:使用大鼠ELISA試劑盒(96T),采用競爭結(jié)合法,每只大鼠血清做2個復(fù)孔,其余操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。反應(yīng)完畢后使用BioTek酶標(biāo)儀進(jìn)行OD值讀數(shù),檢測采用終點動力學(xué)法,450 nm光波長測定。將所得OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程由Elisa計算軟件計算出E2含量。

    1.3.4 組織形態(tài)學(xué)觀察:取已固定好的各組子宮、陰道組織經(jīng)酒精梯度脫水,二甲苯透明,石蠟包埋,5~7 μm切片,HE染色。置于尼康倒置熒光顯微鏡下進(jìn)行40、100、200倍觀察,每張切片分別取3~5個視野拍照。

    1.3.5 形態(tài)計量學(xué)測定:將 HE 染色切片置于 10倍鏡下,隨機選擇6個視野,應(yīng)用 Image-Pro Plus 顯微測量系統(tǒng),進(jìn)行子宮、陰道形態(tài)計量學(xué)相關(guān)參數(shù)的測定,分別測定子宮上皮厚度、子宮腔徑、子宮肌層厚度、管徑厚度,統(tǒng)計子宮腺體個數(shù),以及對陰道上皮厚度、陰道壁厚度進(jìn)行測量。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

    2 結(jié)果

    2.1 葛根素與丹參酮ⅡA對骨質(zhì)疏松大鼠生殖系統(tǒng)臟器指數(shù)的影響

    通過各組臟器指數(shù)比較發(fā)現(xiàn),模型組較正常組顯著降低(P<0.05),提示維甲酸在造成骨質(zhì)疏松癥的同時對生殖系統(tǒng)也有較大損傷作用。其中,丹參酮組較模型組臟器指數(shù)顯著升高(P<0.01)差異極顯著。葛根素組較模型組有所升高但差異不顯著(P>0.05)。此外,葛根素組與丹參酮組雖較模型組均有升高,但都低于陽性對照雌二醇組。雌二醇組與模型組相比差異極顯著(P<0.01)(見圖1)。

    圖1 各組生殖系統(tǒng)臟器指數(shù)比較與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01Fig.1 Comparison of organ index of reproductive system between each group(*Compared with the Model group, P<0.05,** Compared with the Model group, P<0.01)

    2.2 血清雌二醇檢測結(jié)果

    通過分析血清Elisa檢測結(jié)果,模型組較正常組顯著降低(P<0.05)。提示,維甲酸對大鼠生殖系統(tǒng)損傷較大,導(dǎo)致血清E2水平顯著降低。葛根素組較模型組有所升高,差異顯著(P<0.05),丹參酮組E2恢復(fù)水平較模型組顯著升高(P<0.05),植物雌激素兩組E2水平均低于雌二醇陽性藥物組。提示,兩種植物雌激素均能有效增加大鼠體內(nèi)雌二醇水平。丹參酮組與葛根素組相比,兩者差異不顯著(P>0.05)但丹參酮組E2水平稍高于葛根素組。提示,丹參酮藥效優(yōu)于葛根素。見圖2。

    圖2 各組血清E2含量與模型組比較,*P<0.05Fig.2 Serum E2 levels in each group(*compared with the Model group, P<0.05)

    2.3 組織病理學(xué)分析結(jié)果

    2.3.1 子宮組織病理學(xué)分析:通過分析HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn),正常組子宮斷面全層結(jié)構(gòu)正常,子宮上皮為單層柱狀上皮,排列均一較為致密,固有層較厚,血管較為豐富,視野中可見多個單管狀子宮腺體。模型組子宮出現(xiàn)萎縮形態(tài),4倍鏡視野下可見子宮斷面全貌,管徑厚度較正常組明顯減少,腔徑增加,子宮單層柱狀上皮較正常組明顯變薄,排列不規(guī)則、薄厚不均一。雌二醇組子宮出現(xiàn)向腔內(nèi)增生現(xiàn)象,上皮厚度明顯增加顏色較深,柱狀上皮細(xì)胞排列致密,管徑厚度明顯增加,腔內(nèi)有較多脫落細(xì)胞。葛根素組與丹參酮組子宮斷面全層形態(tài)較模型組有所改善,子宮管徑厚度有所增加,上皮厚度有所增加,但程度均小于雌二醇組(見圖3)。

    2.3.2 陰道組織病理學(xué)分析:組織學(xué)觀察顯示,正常組陰道上皮為復(fù)層扁平上皮,上皮較厚,可見呈深紅色的完全角化細(xì)胞,固有層較厚,毛細(xì)血管豐富。模型組陰道復(fù)層扁平上皮及陰道壁厚度較正常組明顯減小。葛根素組及丹參酮組陰道上皮厚度、陰道壁厚度均較模型組有所增加,視野可見紅色角化上皮細(xì)胞。其中,丹參酮組陰道形態(tài)較葛根素組恢復(fù)良好,上皮及管壁生長較厚。雌二醇組陰道上皮厚度較各組均顯著增加,上皮細(xì)胞排列致密,形狀不規(guī)則。植物雌激素兩組雖較模型組上皮厚度及陰道壁厚度有所恢復(fù),上皮細(xì)胞形態(tài)較為規(guī)則,但整體水平均低于雌二醇組(見圖4)。

    2.4 形態(tài)計量結(jié)果

    2.4.1 子宮形態(tài)計量結(jié)果:通過統(tǒng)計各組子宮形態(tài)計量值發(fā)現(xiàn),模型組子宮各項指標(biāo)均較正常組顯著減少,差異極顯著(P<0.01),子宮腔徑顯著擴大(P<0.01)。葛根素組子宮管徑較模型組顯著升高(P<0.01),子宮腔徑較模型組顯著減少(P<0.01),子宮肌層厚度、腺體數(shù)量較模型組顯著升高(P<0.05),子宮上皮厚度較模型組有所增加但差異不顯著(P>0.05)。丹參酮組子宮腺體數(shù)量較模型組有所改善但差異不顯著(P>0.05),其余各項指標(biāo)均較模型組差異極顯著(P<0.01)。通過丹參酮組與葛根素組對比發(fā)現(xiàn),丹參酮組子宮管徑、上皮厚度、肌層厚度、均大于葛根素組,其中子宮管徑差異顯著(P<0,05)(見表1)。

    圖3 各組子宮組織結(jié)構(gòu)(HE染色)A:正常組子宮斷面全層40×;B:正常組子宮內(nèi)膜100×;C:模型組子宮斷面全層40×;D:模型組子宮內(nèi)膜100×;E:葛根素組子宮斷面全層40×;F:葛根素組子宮內(nèi)膜100×;G:雌二醇組子宮斷面全層40×;H:雌二醇組子宮內(nèi)膜100×;I:丹參酮組子宮斷面全層40×;J:丹參酮組子宮內(nèi)膜100×;EP:子宮上皮;LP:固有層;▲:子宮腺體Fig.3 The structure of the uterus of each group (H&E staining)A: The whole layer of the uterus in control group 40×; B: The endometrium in control group100×;C: The whole layer of the uterine in retinoic acid group 40×; D: The endometrium in retinoic acid group100×; E: The whole layer of the uterine in PUE group 40×; F: The endometrium in PUE group100×; G: The whole layer of the uterus in estradiol group 40×; H: The endometrium in estradiol group 100×; I: The whole layer of the uterus in tanshinone group 40×; J: The endometrium in tanshinone group 100×; EP: Epithelium; LP: lmin propri; ▲: Uterine gland.

    圖4 各組陰道組織結(jié)構(gòu)(HE染色)A:正常組陰道40×;B:正常組陰道100×;C:模型組陰道40×;D:模型組陰道100×;E:葛根素組陰道40×;F:葛根素組陰道100×;G:雌二醇組陰道40×;H:雌二醇組陰道100×;I:丹參酮組陰道40×;J:丹參酮組陰道100×;EP:陰道上皮Fig.4 The structure of the vagina each group (H&E staining)A: The vagina in control group 40×; B: The vagina in control group 100×; C: The vagina in retinoic acid group 40×; D: The vagina in retinoic acid group 100×; E: The vagina in PUE group 40×; F: The vagina in PUE group 100×; G: The vagina in estradiol group 40×; H: The vagina in estradiol group 100×; I: The vagina in tanshinone group 40×; J: The vagina in tanshinone group 100×; EP: Epithelium

    組別 子宮管徑(μm)子宮腔徑(μm)子宮上皮厚度(μm)子宮肌層厚度(μm)子宮腺體數(shù)量正常組991.8358±275.6278240.7124±198.807233.97659±5.623866158.5273±48.5328430.0001±3.858612模型組583.0727 ±201.8474**795.1664±514.8004**25.93363±9.365569**100.6479 ±22.34258**20.91667±8.295216**葛根素組856.1824 ±93.98819##252.0668±205.9611##29.3568±17.70335113.0565 ±28.75176#29.0010 ±5.577734#雌二醇組1041.806 ±145.5733##536.4675±206.4699#35.78157±5.080769##185.7924 ±42.59179##35.7000 ±9.569047##丹參酮組957.0978 ±196.0955##▲273.6201±260.7165##31.50211 ±8.348472##188.2642±31.57878## 28.33333 ±3.444803

    注:與正常組比較,*P<0.05,**P<0.01;與模型組比較,#P<0.05,##P<0.01;與葛根素組比較,▲P<0.05

    2.4.2 陰道形態(tài)計量結(jié)果:各組大鼠陰道形態(tài)計量值如表2所示,模型組陰道上皮厚度較正常組減少,差異極顯著(P<0.01),陰道壁厚度顯著減少(P<0.05)。葛根素組陰道上皮厚度較模型組顯著增加(P<0.01),陰道壁厚度有所恢復(fù)但差異不顯著(P>0.05)。丹參酮組陰道上皮厚度較模型組顯著升高(P<0.01),陰道壁厚度較模型組有所增加但差異不顯著(P>0.05)。兩種植物雌激素藥物組指標(biāo)均低于雌二醇陽性對照組。丹參酮組陰道上皮厚度恢復(fù)程度較葛根素組有明顯改善,差異極顯著(P<0.01),見表2。

    表2 各組大鼠陰道形態(tài)計量值±s)Table 2 The measurement of vagina morphometry in±s)

    注:與正常組比較,aP<0.05,aaP<0.01;與模型組比較,bP<0.05,bbP<0.01;與葛根素比較,ccP<0.01)

    3 討論

    PMOP在45歲以上婦女中發(fā)病率為30%,在75歲以上婦女中發(fā)病率約為90%[8]。婦女絕經(jīng)后因卵巢功能衰退,體內(nèi)雌激素含量急劇下降引起骨代謝異常、骨鈣礦鹽丟失、骨密度下降,骨脆性增加,導(dǎo)致骨質(zhì)疏松、骨痛的同時也對生殖系統(tǒng)造成損傷,引起子宮上皮、內(nèi)膜萎縮,局部微循環(huán)受阻,子宮功能減退,免疫力下降而容易受外界病原體侵襲[9]。同樣,由于雌激素的丟失出現(xiàn)陰道上皮萎縮,上皮細(xì)胞糖原減少導(dǎo)致陰道pH值上升,抑菌能力減弱,易遭受病原微生物感染[10]。此類人群易患絕經(jīng)型或老年性陰道炎、宮頸炎,生活質(zhì)量受到嚴(yán)重影響。

    在臨床治療中,通常使用雌二醇、孕激素等來治療骨質(zhì)疏松癥以及絕經(jīng)型陰道炎等,此類激素型藥物能夠直接提高體內(nèi)雌激素水平,刺激成骨細(xì)胞活性,糾正骨代謝異常,緩解生殖系統(tǒng)萎縮[11,12]。但長期使用化學(xué)合成類激素,引發(fā)宮頸癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌等生殖系統(tǒng)癌變以及心血管血栓等的可能性較大,具有一定風(fēng)險性[13]。

    在本試驗中,通過維甲酸誘導(dǎo)建立骨質(zhì)疏松大鼠模型,對維甲酸模型組臟器指數(shù)、血清E2水平、子宮陰道組織學(xué)觀察和形態(tài)計量發(fā)現(xiàn),其各項指標(biāo)均與正常組差異顯著,說明維甲酸在引起骨質(zhì)疏松癥的同時能夠引發(fā)生殖系統(tǒng)損傷,可以較為良好地模擬人類PMOP[14,15]。在本研究中,選用葛根素、丹參酮ⅡA兩種藥物,葛根素為黃酮類化合物,具有雌激素樣作用,能夠有效對骨質(zhì)疏松大鼠起到骨保護作用[16],丹參酮ⅡA屬于丹參中脂溶成分:丹參酮Ⅰ、ⅡB、Ⅴ、Ⅵ、隱丹參酮、異丹參酮多種成分中之一,具有良好的雌激素樣活性[17],二者均有抗骨質(zhì)疏松和促進(jìn)骨形成作用[18]。

    通過檢測發(fā)現(xiàn),葛根素與丹參酮ⅡA均能發(fā)揮其類雌激素樣作用,能夠顯著提升大鼠血清E2水平。此外,兩種植物雌激素均能作用于生殖系統(tǒng),顯著增加子宮上皮厚度、管徑厚度,陰道上皮厚度。能夠提升子宮肌層厚度和腺體數(shù)量,增加生殖系統(tǒng)濕重。通過對比發(fā)現(xiàn),丹參酮ⅡA在提升血清E2水平、子宮管徑、上皮厚度、肌層厚度、陰道上皮厚度方面較模型組均有極顯著差異,程度均優(yōu)于葛根素組,恢復(fù)水平更接近于正常大鼠。但兩組藥物水平均低于陽性藥物苯甲酸雌二醇組,由此說明,植物雌激素作用強度較化學(xué)合成類激素弱、起效時間較長,提示這正是植物雌激素的安全性和長期使用性的優(yōu)勢所在[19,20]。

    鑒于此,葛根素與丹參酮ⅡA在發(fā)揮雌激素樣作用治療骨質(zhì)疏松的同時均能有效改善PMOP所導(dǎo)致的生殖系統(tǒng)損傷,預(yù)測其對老年性陰道炎、宮頸炎、子宮萎縮等具有一定的治療和修復(fù)作用,為絕經(jīng)后生殖系統(tǒng)修復(fù)治療及藥物研發(fā)提供參考和依據(jù)。

    猜你喜歡
    模型
    一半模型
    一種去中心化的域名服務(wù)本地化模型
    適用于BDS-3 PPP的隨機模型
    提煉模型 突破難點
    函數(shù)模型及應(yīng)用
    p150Glued在帕金森病模型中的表達(dá)及分布
    函數(shù)模型及應(yīng)用
    重要模型『一線三等角』
    重尾非線性自回歸模型自加權(quán)M-估計的漸近分布
    3D打印中的模型分割與打包
    桃红色精品国产亚洲av| 午夜福利视频1000在线观看 | 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲国产看品久久| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲黑人精品在线| 麻豆国产av国片精品| 首页视频小说图片口味搜索| 制服人妻中文乱码| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 12—13女人毛片做爰片一| 国产野战对白在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 麻豆一二三区av精品| 黑人欧美特级aaaaaa片| 成人亚洲精品av一区二区| 国产麻豆69| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 18禁观看日本| 在线观看免费视频日本深夜| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | e午夜精品久久久久久久| 啦啦啦免费观看视频1| 欧美+亚洲+日韩+国产| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 欧美一级毛片孕妇| 一级作爱视频免费观看| 亚洲黑人精品在线| 一个人免费在线观看的高清视频| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 丝袜美足系列| 国产精品 欧美亚洲| 女警被强在线播放| 免费搜索国产男女视频| 亚洲中文av在线| 90打野战视频偷拍视频| 丰满的人妻完整版| 欧美日本亚洲视频在线播放| 不卡一级毛片| 在线观看舔阴道视频| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 日本三级黄在线观看| 国产国语露脸激情在线看| 在线观看午夜福利视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 免费看a级黄色片| 变态另类丝袜制服| 久久久久亚洲av毛片大全| 亚洲av五月六月丁香网| 热re99久久国产66热| 亚洲国产精品久久男人天堂| 99久久综合精品五月天人人| 桃色一区二区三区在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 日本免费a在线| 日韩av在线大香蕉| 99久久精品国产亚洲精品| 国产精品一区二区在线不卡| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 久久婷婷成人综合色麻豆| 久久久久久人人人人人| 美国免费a级毛片| 丝袜美足系列| 免费观看精品视频网站| 国产精品久久电影中文字幕| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 午夜福利在线观看吧| 69av精品久久久久久| 免费高清在线观看日韩| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产一卡二卡三卡精品| 男人舔女人下体高潮全视频| av在线播放免费不卡| 91成人精品电影| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 国产av在哪里看| 久久久久久人人人人人| 老汉色∧v一级毛片| 精品不卡国产一区二区三区| 日本黄色视频三级网站网址| 91字幕亚洲| 亚洲自拍偷在线| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 午夜免费观看网址| 久久亚洲精品不卡| 午夜福利高清视频| 免费无遮挡裸体视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 99国产精品99久久久久| av天堂久久9| 校园春色视频在线观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 波多野结衣一区麻豆| 1024视频免费在线观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产三级黄色录像| 欧美激情极品国产一区二区三区| 午夜免费观看网址| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久亚洲精品不卡| 午夜免费观看网址| av天堂在线播放| 嫩草影视91久久| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 午夜精品国产一区二区电影| 久久香蕉精品热| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲av片天天在线观看| 黄色丝袜av网址大全| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲人成电影免费在线| 国产亚洲av嫩草精品影院| 1024视频免费在线观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 亚洲九九香蕉| 免费高清在线观看日韩| 久久久久久大精品| 亚洲中文av在线| 国产一区二区激情短视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 精品乱码久久久久久99久播| 88av欧美| 午夜福利,免费看| 国产免费av片在线观看野外av| 国产又爽黄色视频| 成人三级黄色视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| 91成人精品电影| 日韩免费av在线播放| 麻豆久久精品国产亚洲av| 欧美激情久久久久久爽电影 | 中文字幕精品免费在线观看视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 久久久久久大精品| 免费看美女性在线毛片视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 视频在线观看一区二区三区| av在线天堂中文字幕| av视频免费观看在线观看| 一a级毛片在线观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 少妇被粗大的猛进出69影院| 黄片小视频在线播放| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 日韩av在线大香蕉| 午夜福利免费观看在线| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 久久久久久久午夜电影| 国产成人精品无人区| 一级,二级,三级黄色视频| 欧美在线一区亚洲| av超薄肉色丝袜交足视频| 人成视频在线观看免费观看| 午夜福利视频1000在线观看 | 亚洲一区中文字幕在线| 一区二区三区高清视频在线| 久久人人精品亚洲av| 岛国视频午夜一区免费看| 69av精品久久久久久| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产99久久九九免费精品| 九色亚洲精品在线播放| 欧美av亚洲av综合av国产av| 美女高潮到喷水免费观看| 国产成人精品无人区| 69精品国产乱码久久久| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产精品乱码一区二三区的特点 | av网站免费在线观看视频| 亚洲五月婷婷丁香| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 成人18禁在线播放| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 黑丝袜美女国产一区| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲欧美激情综合另类| 多毛熟女@视频| 在线国产一区二区在线| 日本黄色视频三级网站网址| 午夜福利18| 免费高清视频大片| a级毛片在线看网站| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 女人被狂操c到高潮| 9色porny在线观看| 精品久久久精品久久久| 欧美日韩黄片免| 亚洲国产看品久久| 天堂动漫精品| 大型av网站在线播放| 国产精品 国内视频| 一级作爱视频免费观看| 天堂影院成人在线观看| 不卡av一区二区三区| 精品国产亚洲在线| 99国产精品免费福利视频| 午夜福利在线观看吧| 久久久国产成人精品二区| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 欧美性长视频在线观看| 国产精品综合久久久久久久免费 | or卡值多少钱| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产精品国产高清国产av| 最好的美女福利视频网| 亚洲成人国产一区在线观看| 香蕉丝袜av| 国产熟女午夜一区二区三区| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产又爽黄色视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 99精品久久久久人妻精品| 久久国产精品人妻蜜桃| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲国产看品久久| 国产伦人伦偷精品视频| 国内精品久久久久久久电影| 怎么达到女性高潮| 97人妻天天添夜夜摸| 婷婷精品国产亚洲av在线| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲av第一区精品v没综合| 一进一出抽搐动态| 一级毛片女人18水好多| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 男女下面插进去视频免费观看| 久久草成人影院| 亚洲国产欧美网| 不卡一级毛片| 老汉色av国产亚洲站长工具| 高清毛片免费观看视频网站| 精品午夜福利视频在线观看一区| 久久精品国产综合久久久| 亚洲一区二区三区色噜噜| 久久精品国产清高在天天线| 一夜夜www| 国产麻豆成人av免费视频| 怎么达到女性高潮| 成人特级黄色片久久久久久久| av中文乱码字幕在线| 国产精品日韩av在线免费观看 | 国产精品国产高清国产av| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 国产野战对白在线观看| 大陆偷拍与自拍| 女人被狂操c到高潮| 搡老熟女国产l中国老女人| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 日韩欧美三级三区| 成人手机av| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久热爱精品视频在线9| av欧美777| 1024视频免费在线观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 不卡一级毛片| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 国产精华一区二区三区| 国产高清videossex| 一级a爱视频在线免费观看| 午夜影院日韩av| 嫩草影院精品99| 国产色视频综合| 精品第一国产精品| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 美女免费视频网站| 国产精品av久久久久免费| 午夜老司机福利片| 91精品国产国语对白视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产亚洲欧美在线一区二区| 99精品久久久久人妻精品| 国产成人免费无遮挡视频| 久久精品国产清高在天天线| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 黄色毛片三级朝国网站| 不卡一级毛片| 久久精品国产清高在天天线| 99riav亚洲国产免费| 搡老熟女国产l中国老女人| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲人成电影免费在线| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 成在线人永久免费视频| 国产区一区二久久| 身体一侧抽搐| 视频在线观看一区二区三区| 免费一级毛片在线播放高清视频 | www.www免费av| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 男女午夜视频在线观看| 欧美日韩乱码在线| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国语自产精品视频在线第100页| 国产欧美日韩一区二区三| av视频在线观看入口| 亚洲情色 制服丝袜| 日韩精品青青久久久久久| 久久精品影院6| 在线观看免费午夜福利视频| 91大片在线观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 狠狠狠狠99中文字幕| 香蕉久久夜色| 他把我摸到了高潮在线观看| 一级片免费观看大全| 久久伊人香网站| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久欧美精品欧美久久欧美| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 日本vs欧美在线观看视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 超碰成人久久| 国产一区在线观看成人免费| 欧美在线一区亚洲| 天堂影院成人在线观看| 亚洲一区二区三区色噜噜| 深夜精品福利| 成人国语在线视频| 国产三级在线视频| 久久性视频一级片| 热re99久久国产66热| 嫩草影视91久久| 亚洲九九香蕉| 欧美丝袜亚洲另类 | www.999成人在线观看| 男人操女人黄网站| 在线国产一区二区在线| av中文乱码字幕在线| 黄频高清免费视频| 日本在线视频免费播放| 丝袜在线中文字幕| 90打野战视频偷拍视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲精品中文字幕在线视频| 波多野结衣一区麻豆| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲片人在线观看| 两性夫妻黄色片| 99精品在免费线老司机午夜| 少妇粗大呻吟视频| 成在线人永久免费视频| 欧美一级毛片孕妇| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲av美国av| 无人区码免费观看不卡| 一本大道久久a久久精品| av在线播放免费不卡| 午夜福利视频1000在线观看 | 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲人成电影免费在线| 看黄色毛片网站| 黄片小视频在线播放| 国产单亲对白刺激| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产区一区二久久| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 日本精品一区二区三区蜜桃| 午夜老司机福利片| 一级黄色大片毛片| 国产精品,欧美在线| 欧美日韩一级在线毛片| 欧美国产精品va在线观看不卡| av在线播放免费不卡| 黄片大片在线免费观看| 在线观看舔阴道视频| 国产91精品成人一区二区三区| 亚洲成a人片在线一区二区| 久久精品91蜜桃| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲在线自拍视频| 男女午夜视频在线观看| 国产成人精品无人区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 一二三四社区在线视频社区8| 欧美一级毛片孕妇| 国产成人欧美| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产片内射在线| 日韩欧美国产一区二区入口| 男人的好看免费观看在线视频 | 日韩欧美三级三区| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲专区国产一区二区| av在线天堂中文字幕| 久久热在线av| 亚洲自拍偷在线| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 午夜福利一区二区在线看| 国产精华一区二区三区| 韩国av一区二区三区四区| 国产主播在线观看一区二区| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 黄色视频不卡| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲成人久久性| 麻豆av在线久日| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久这里只有精品19| 亚洲欧美激情在线| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 老汉色av国产亚洲站长工具| 精品欧美一区二区三区在线| 午夜精品国产一区二区电影| 搡老妇女老女人老熟妇| 欧美一级a爱片免费观看看 | 国产精品 欧美亚洲| 97碰自拍视频| 午夜免费激情av| 9热在线视频观看99| 满18在线观看网站| 又黄又粗又硬又大视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 又大又爽又粗| 久热爱精品视频在线9| 午夜福利在线观看吧| 在线观看舔阴道视频| 国产不卡一卡二| 国产欧美日韩一区二区精品| 岛国在线观看网站| 亚洲性夜色夜夜综合| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 精品国产一区二区久久| 国产精品98久久久久久宅男小说| 99在线人妻在线中文字幕| 色综合亚洲欧美另类图片| 青草久久国产| 又黄又爽又免费观看的视频| 长腿黑丝高跟| 国产高清videossex| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 9热在线视频观看99| 制服丝袜大香蕉在线| 亚洲av片天天在线观看| 久久久水蜜桃国产精品网| 欧美国产日韩亚洲一区| 涩涩av久久男人的天堂| 三级毛片av免费| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 满18在线观看网站| 91在线观看av| 男女床上黄色一级片免费看| 国产亚洲欧美精品永久| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产色视频综合| 亚洲av五月六月丁香网| 香蕉丝袜av| 亚洲精品av麻豆狂野| 老汉色av国产亚洲站长工具| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲国产看品久久| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 在线观看66精品国产| 一夜夜www| 无限看片的www在线观看| 精品久久久久久久毛片微露脸| 中文字幕久久专区| 在线永久观看黄色视频| 夜夜夜夜夜久久久久| 成人国产一区最新在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 黄色成人免费大全| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲专区字幕在线| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲激情在线av| www.精华液| 国产不卡一卡二| 老司机福利观看| 啦啦啦免费观看视频1| 99久久精品国产亚洲精品| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲黑人精品在线| av电影中文网址| 久久精品人人爽人人爽视色| 人人澡人人妻人| 在线永久观看黄色视频| 大码成人一级视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 麻豆国产av国片精品| 女同久久另类99精品国产91| 日日干狠狠操夜夜爽| 黑人操中国人逼视频| 长腿黑丝高跟| 精品第一国产精品| 一区福利在线观看| 国产单亲对白刺激| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 欧美国产日韩亚洲一区| 日韩欧美三级三区| 我的亚洲天堂| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 校园春色视频在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 男女下面插进去视频免费观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产精品 欧美亚洲| av欧美777| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 岛国视频午夜一区免费看| 老司机午夜十八禁免费视频| 欧美不卡视频在线免费观看 | 精品第一国产精品| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 欧美成人午夜精品| 国产97色在线日韩免费| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 桃色一区二区三区在线观看| 成人18禁在线播放| 日韩成人在线观看一区二区三区| 亚洲一区高清亚洲精品| 午夜福利一区二区在线看| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲,欧美精品.| 亚洲在线自拍视频| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 丁香六月欧美| 亚洲久久久国产精品| 欧美久久黑人一区二区| 免费高清视频大片| 成人欧美大片| 电影成人av| 欧美+亚洲+日韩+国产| 色尼玛亚洲综合影院| 露出奶头的视频| 国产亚洲av高清不卡| e午夜精品久久久久久久| 久久中文看片网| 欧美乱色亚洲激情| 欧美色视频一区免费| 一a级毛片在线观看| 看片在线看免费视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲少妇的诱惑av| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产伦人伦偷精品视频| 老司机靠b影院| 亚洲精品国产一区二区精华液| 亚洲中文av在线| 亚洲专区国产一区二区| 国产亚洲欧美98| 国产精品二区激情视频| 亚洲一区中文字幕在线| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产欧美日韩一区二区三| 精品久久久精品久久久| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 一级毛片精品| 在线观看午夜福利视频| 无遮挡黄片免费观看| 免费在线观看日本一区| a级毛片在线看网站| 精品人妻1区二区| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲全国av大片| 中文字幕最新亚洲高清| 男女之事视频高清在线观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 在线播放国产精品三级| 国产亚洲精品久久久久5区| 12—13女人毛片做爰片一| 美女扒开内裤让男人捅视频| 免费高清在线观看日韩| 久久久久久免费高清国产稀缺| 色av中文字幕| 久久精品人人爽人人爽视色| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 色综合欧美亚洲国产小说| 午夜福利免费观看在线| 激情视频va一区二区三区| 亚洲av电影不卡..在线观看| or卡值多少钱| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产成人啪精品午夜网站| 99国产综合亚洲精品| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 高清在线国产一区| 搡老妇女老女人老熟妇| 男人舔女人的私密视频| 久久人妻av系列| 最近最新中文字幕大全免费视频| 自线自在国产av| 国产在线精品亚洲第一网站| av视频在线观看入口| av天堂在线播放| 免费观看精品视频网站| 中国美女看黄片| 日本欧美视频一区| 色播在线永久视频| 香蕉国产在线看| 国产免费av片在线观看野外av|