小電導(dǎo)鈣激活鉀通道SK2在容量超負(fù)荷心力衰竭大鼠竇房結(jié)表達(dá)的改變

倪雅娟,張京文,白鴻遠(yuǎn),楊國(guó)棟,馬愛(ài)群*

(1西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科,西安 710004;2西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科;*通訊作者,E-mail:yuxi1128-@163.com)

小電導(dǎo)鈣激活鉀通道SK2在容量超負(fù)荷心力衰竭大鼠竇房結(jié)表達(dá)的改變

倪雅娟1,張京文2,白鴻遠(yuǎn)1,楊國(guó)棟2,馬愛(ài)群2*

(1西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科,西安 710004;2西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科;*通訊作者,E-mail:yuxi1128-@163.com)

目的 觀察小電導(dǎo)鈣激活鉀通道SK2通道在心力衰竭(HF)大鼠竇房結(jié)組織中表達(dá)的改變。 方法 以腹主動(dòng)脈-下腔靜脈穿刺造瘺術(shù)建立容量超負(fù)荷心力衰竭大鼠模型(n=7),假手術(shù)對(duì)照組(SO)大鼠切開(kāi)腹腔,穿刺腹主動(dòng)脈,但不造成腹主動(dòng)脈-下腔靜脈之間的瘺(n=7)。于術(shù)后8周通過(guò)超聲心動(dòng)圖測(cè)定左心室射血分?jǐn)?shù)(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左心室短軸縮短率(left ventricular fraction shortening,LVFS)、左心室收縮末內(nèi)徑(left ventricular end-systolic diameter,LVEDs)、左心室舒張末內(nèi)徑(left ventrieular end-diastolic diameter,LVEDd),并于取材時(shí)測(cè)定心臟質(zhì)量/體質(zhì)量(heart weight/body weight)，評(píng)價(jià)心臟結(jié)構(gòu)與功能改變。分離大鼠竇房結(jié)細(xì)胞以免疫熒光染色法觀察SK2通道蛋白的表達(dá),同時(shí)取材竇房結(jié)組織,提取組織蛋白,行Western blot測(cè)定比較心衰大鼠竇房結(jié)組織SK2通道表達(dá)的改變情況。 結(jié)果 超聲心動(dòng)圖結(jié)果顯示,心力衰竭大鼠心臟收縮功能與舒張功能明顯減低[LVEDd(mm):SO 5.91±0.36vsHF 11.15±0.91,P<0.01;LVEDs(mm):SO 2.89±0.28vsHF 7.89±0.70,P<0.01;LVEF(%):SO 87.10±1.63vsHF 62.10±2.57,P<0.01;LVFS(%):SO 51.27±2.03vsHF 30.05±1.66,P<0.01],心臟質(zhì)量/體質(zhì)量明顯增大(SO 244.19±36.87vsHF 593.21±28.72,P<0.01)。單細(xì)胞免疫熒光染色結(jié)果示SK2通道表達(dá)于兩組大鼠竇房結(jié)細(xì)胞膜上,Western blot定量分析結(jié)果示心力衰竭組大鼠竇房結(jié)組織SK2通道蛋白表達(dá)水平較假手術(shù)組明顯減低(0.22±0.10vs0.31±0.16,P<0.05)。 結(jié)論 SK2通道在心力衰竭大鼠竇房結(jié)組織中表達(dá)明顯下調(diào)。

小電導(dǎo)鈣激活鉀通道; SK2通道; 心力衰竭; 竇房結(jié); 大鼠

竇房結(jié)是哺乳類(lèi)心臟的正常節(jié)律性沖動(dòng)的發(fā)源地,竇房結(jié)細(xì)胞通過(guò)自發(fā)性舒張期除極化,引起其自主性起搏。一般認(rèn)為竇房結(jié)的起搏和傳導(dǎo)功能是在多種離子電流的共同參與下形成,如延遲整流鉀電流、背景鈉電流、超極化激活內(nèi)向電流等[1]。心力衰竭時(shí)竇房結(jié)發(fā)生重構(gòu),主要為功能重構(gòu)[2],其本質(zhì)為竇房結(jié)離子通道重構(gòu),致竇房結(jié)動(dòng)作電位(APD)延長(zhǎng)[3,4],研究發(fā)現(xiàn),竇房結(jié)功能不全主要是因?yàn)楦]房結(jié)離子通道重構(gòu)致,包括鉀通道、鈣通道、鈉通道、超極化激活陽(yáng)離子通道等通道重構(gòu),但具體機(jī)制仍不十分清楚。

小電導(dǎo)鈣激活鉀通道(small conductance calcium activated potassium channel,SK)于1986年被發(fā)現(xiàn)并正式命名,是一種電導(dǎo)較小(60 pF)的鉀通道,依賴(lài)于細(xì)胞內(nèi)鈣離子激活[5]。SK通道主要有3種亞型：SK1、SK2、SK3[6],研究顯示,SK2通道介導(dǎo)復(fù)極化電流,在心肌細(xì)胞、房室結(jié)復(fù)極化中起重要作用[7-9]。最近的研究發(fā)現(xiàn)SK2通道在竇房結(jié)細(xì)胞動(dòng)作電位的復(fù)極化過(guò)程中也起重要作用,若將其阻斷,竇房結(jié)細(xì)胞動(dòng)作電位時(shí)程延長(zhǎng),起搏頻率減低[10],因此SK2通道在竇房結(jié)APD中起重要作用。然而,通道表達(dá)是其功能的基礎(chǔ),心力衰竭過(guò)程中SK2通道的表達(dá)是否重構(gòu),竇房結(jié)中的表達(dá)情況仍無(wú)研究。本研究通過(guò)建立容量超負(fù)荷大鼠心衰模型,觀察心力衰竭竇房結(jié)組織的小電導(dǎo)鈣激活鉀通道表達(dá)的變化,以探討心力衰竭竇房結(jié)重構(gòu)的分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠,遺傳基本組成為遠(yuǎn)交群大鼠,系雜合的雄性大鼠和Wistar雌性大鼠雜交后育成的一個(gè)白化封閉群大鼠,5周齡,體質(zhì)量140-160 g,購(gòu)于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(陜)2012-003。

1.2 主要試劑與儀器

SK2兔抗大鼠多克隆抗體(以色列Alomone Labs公司),兔抗大鼠GAPDH抗體(美國(guó)Santa Cruz公司)、羊抗兔IgG-FITC(武漢博士德生物工程有限公司),蛋白Marker(加拿大Fermentas公司),Ⅱ型膠原酶(美國(guó)Worthingtong公司),蛋白酶、牛血清白蛋白(美國(guó)Sigma公司),SZ-61型解剖顯微鏡、BX51型熒光生物顯微鏡(Olympus公司),TCS-SP2激光共聚焦顯微鏡(德國(guó)Leica公司),THONOS 2500心臟彩色超聲診斷儀(美國(guó)惠普公司),激光共聚焦顯微鏡(德國(guó)Leica公司),微型凝膠電泳系統(tǒng)、ChemiDoc XRS化學(xué)發(fā)光熒光成像儀(美國(guó)Bio-Rad公司),ECL發(fā)光液(美國(guó)Pierce公司),BCA蛋白定量試劑盒、單去污裂解液(美國(guó)Bio tech公司),蛋白酶抑制劑混合物(cocktail,美國(guó)Roche公司)。

1.3 主要溶液配制

①臺(tái)式液:NaCl 140 mmol/L、KCl 5.4 mmol/L、MgCl2 1.0 mmol/L、CaCl21.8 mmol/L、HEPES 10.0 mmol/L、Glucose 10.0 mmol/L(NaOH調(diào)節(jié)pH值為7.35-7.45);②無(wú)鈣臺(tái)式液:NaCl 140 mmol/L、KCl 5.4 mmol/L、MgCl21.0 mmol/L、HEPES 10.0 mmol/L、Glucose 10.0 mmol/L(NaOH調(diào)節(jié)pH值為7.35-7.45);③竇房結(jié)細(xì)胞消化酶液:30 ml無(wú)鈣臺(tái)式液中加入Ⅱ型膠原酶220 IU/ml,蛋白酶0.03%,BSA 30 mg(0.1%),CaCl20.06 mmol/L(NaOH調(diào)節(jié)pH值為6.8);④心肌細(xì)胞儲(chǔ)存液(Kraftbrabe,KB):KCl 25 mmol/L,KH2PO410.0 mmol/L, MgCl23.0 mmol/L,?；撬?20.0 mmol/L,L-谷氨酸80.0 mmol/L,EGTA 0.5 mmol/L, HEPES 10.0 mmol/L, Glucose 10.0 mmol/L,KOH調(diào)節(jié)pH值為7.35-7.45。免疫熒光、Western blot所需液體配制方法同本課題組既往報(bào)道[11]。

1.4 容量超負(fù)荷心力衰竭大鼠模型的建立及評(píng)價(jià)

SD大鼠隨機(jī)分為心衰組(heart failure,HF;n=14)和假手術(shù)組(sham operation,SO;n=14),心衰組采用腹主動(dòng)脈一下腔靜脈穿刺造瘺術(shù)建立容量超負(fù)荷心衰模型[12],簡(jiǎn)而言之,大鼠麻醉后腹部正中切口4 cm,充分暴露腹主動(dòng)脈和下腔靜脈,自左側(cè)腎動(dòng)脈下方,鈍性分離出腹主動(dòng)脈和下腔靜脈,顯微持針器持9/0帶線(xiàn)縫合針,在左右髂總動(dòng)脈分支上方3 mm處腹主動(dòng)脈前壁做U形縫合,并在左側(cè)腎動(dòng)脈下方夾閉腹主動(dòng)脈血流,持留置針頭(內(nèi)充低分子肝素鈉抗凝)從U形縫合口進(jìn)針穿入腹主動(dòng)脈,針頭沿前壁向上行至腹主動(dòng)脈和下腔靜脈的聯(lián)合部,向右穿破此處的相鄰動(dòng)靜脈壁,行至下腔靜脈,造成動(dòng)-靜脈瘺。退出針頭并迅速收緊縫合口,此時(shí)靜脈膨脹,顏色變紅并有搏動(dòng),穿刺部位可見(jiàn)明顯渦流。假手術(shù)組只穿刺進(jìn)入腹主動(dòng)脈,不進(jìn)入下腔靜脈造瘺,其余手術(shù)步驟與動(dòng)-靜脈瘺組相同。假手術(shù)組只切開(kāi)腹腔,穿刺腹主動(dòng)脈,不穿刺下腔靜脈,即不造成腹主動(dòng)脈-下腔靜脈之間的瘺,余步驟同心衰組。術(shù)后8周行心臟超聲檢查,評(píng)價(jià)兩組大鼠心功能。

1.5 單個(gè)竇房結(jié)細(xì)胞的分離及鑒定

實(shí)驗(yàn)大鼠取心臟,解剖顯微鏡下取竇房結(jié)組織,左右界限為界嵴和房間隔,上下邊界為上、下腔靜脈,竇房結(jié)的長(zhǎng)軸幾乎于界溝的走向一致[13]。分離竇房結(jié)細(xì)胞的方法在小鼠竇房結(jié)細(xì)胞分離方法上有所改進(jìn)[14]。將竇房結(jié)組織剪成1 mm的小條置入消化酶液中,37 ℃恒溫消化過(guò)程持續(xù)15-19 min,肉眼觀察組織條粉紅透亮、膨脹松軟、呈現(xiàn)云絮狀,以KB液終止消化,輕柔牽拉組織條,KB液變渾濁,竇房結(jié)細(xì)胞即釋放至KB液中。220 μm尼龍網(wǎng)過(guò)濾以除去組織塊,室溫靜置30 min,逐漸復(fù)鈣至1.0 mmol/L。分離細(xì)胞的鑒定:①形態(tài)學(xué)觀察:光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),竇房結(jié)細(xì)胞呈不規(guī)則形態(tài),有梭形、彎曲、弧形等;②HCN4免疫熒光染色:HCN4為特異性表達(dá)于竇房結(jié)組織的超極化陽(yáng)離子通道,通常以其的陽(yáng)性表達(dá)來(lái)鑒定竇房結(jié)細(xì)胞[15]。

1.6 定性觀察SK2通道在竇房結(jié)組織表達(dá)

分離兩組大鼠單個(gè)竇房結(jié)細(xì)胞,行單細(xì)胞免疫熒光染色,步驟如文獻(xiàn)[16]所述,以激光共聚焦顯微鏡觀察SK2通道在竇房結(jié)細(xì)胞的表達(dá)情況。

1.7 定量檢測(cè)心力衰竭竇房結(jié)組織SK2通道表達(dá)的改變

Western blot定量觀察兩組大鼠竇房結(jié)組織SK2通道蛋白的表達(dá)水平。竇房結(jié)組織取材后,提取組織蛋白的方法如文獻(xiàn)[17]所述,95 ℃煮沸5 min使蛋白變性,BCA法測(cè)定蛋白濃度,SDS-PAGE凝膠電泳分離蛋白,冰浴100 V恒壓轉(zhuǎn)膜90 min,將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜。PVDF膜在含5%脫脂奶粉的TBST中4 ℃過(guò)夜封閉,漂洗后予一抗室溫下孵育2 h,洗滌后予二抗(羊抗兔IgG HRP抗體)室溫下孵育1 h,ECL試劑盒使條帶顯色,ChemiDoc XRS化學(xué)發(fā)光熒光成像儀采集圖像,Quality One軟件分析結(jié)果,以目的條帶累計(jì)光密度值/內(nèi)參GAPDH累計(jì)光密度值,獲得結(jié)果。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 心力衰竭大鼠模型的成功建立

腹主動(dòng)脈-下腔靜脈造瘺術(shù)后8周,行超聲心動(dòng)圖檢查，結(jié)果顯示,心衰組大鼠左心室射血分?jǐn)?shù)(left ventricular ejection fraction,LVEF)與左心室短軸縮短率(left ventricular fraction shortening,LVFS)較假手術(shù)組明顯降低(均P<0.01，見(jiàn)表1),心衰組大鼠左心室收縮末內(nèi)徑(left ventricular end-systolic diameter,LVEDs)、左心室舒張末內(nèi)徑(left ventrieular edn-diastolic diameter,LVEDd)較假手術(shù)對(duì)照組大鼠明顯增加(均P<0.01，見(jiàn)表1)。結(jié)果證明與假手術(shù)組相比,心衰組大鼠左心室收縮與舒張功能明顯下降,左心室心腔明顯擴(kuò)張,表明容量超負(fù)荷心衰模型成功建立。

表 1 HF組大鼠和SO組大鼠超聲心動(dòng)學(xué)指標(biāo)比較 (n=7)

Table 1 Comparison of echocardiographical results between HF and SO rats (n=7)

組別LVEDd(mm)LVEDs(mm)LVEF(%)LVFS(%)SO組591±036289±0288710±1635127±203HF組1115±091??789±070??6210±257??3005±166??

LVEDd:左室舒張末內(nèi)徑;LVEDs:左室收縮膜內(nèi)徑;LVEF:左室射血分?jǐn)?shù);LVFS:短軸縮短率;與SO組比較,**P<0.01

2.2 兩組大鼠心臟質(zhì)量/體質(zhì)量結(jié)果

稱(chēng)量大鼠體質(zhì)量、心臟重量,計(jì)算兩組大鼠心臟質(zhì)量/體質(zhì)量,并行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,結(jié)果顯示,心衰組大鼠心臟質(zhì)量及心臟質(zhì)量/體質(zhì)量比均較假手術(shù)組顯著增加(P<0.01，見(jiàn)表2),證明在慢性心衰過(guò)程中發(fā)左心室重構(gòu),心腔擴(kuò)大,心臟結(jié)構(gòu)改變,心臟增大。

表 2 兩組大鼠組大鼠體質(zhì)量、心臟質(zhì)量、心臟質(zhì)量/體質(zhì)量的比較

Table 2 Comparison of BW,HW,HW/BW between HF and SO rats

組別 BW(g) HW(g)HW/BW(mg/100g)SO組(n=7)34152±3046081±01924419±3687HF組(n=7)37229±3451??219±067??59321±2872??

BW:體質(zhì)量;HW:心臟重量;HW/BW:心臟質(zhì)量/體質(zhì)量;與SO組比較，**P<0.01

2.3 竇房結(jié)細(xì)胞的鑒定

酶解分離的單個(gè)竇房結(jié)細(xì)胞行HCN4免疫熒光染色,激光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果可見(jiàn),竇房結(jié)細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,有梭形、弧形、彎曲形等,細(xì)胞橫紋清楚、細(xì)胞核可見(jiàn)。HCN4均勻地表達(dá)于竇房結(jié)細(xì)胞的細(xì)胞上,因HCN4在竇房結(jié)表達(dá)具有特異性,進(jìn)一步證實(shí)分離所得的細(xì)胞為竇房結(jié)細(xì)胞,結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 HCN4在SO組與HF組大鼠的分離細(xì)胞呈陽(yáng)性表達(dá)Figure 1 The positive expression of HCN4 in isolated cells of SO and HF rats

2.4 SK2通道在SO組及HF組大鼠竇房結(jié)細(xì)胞表達(dá)的定性觀察

以上述方法分離的單個(gè)竇房結(jié)細(xì)胞,行SK2通道免疫熒光染色,激光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果可見(jiàn),SK2通道表達(dá)于SO組及HF組大鼠竇房結(jié)細(xì)胞膜上,細(xì)胞核、細(xì)胞漿區(qū)表達(dá)呈陰性(見(jiàn)圖2);肉眼可見(jiàn)HF組竇房結(jié)細(xì)胞的熒光強(qiáng)度較假手術(shù)對(duì)照組低。

2.5 SO組及HF組大鼠SK2通道表達(dá)的定量分析

Western blot定量結(jié)果表明SK2通道在兩組大鼠竇房結(jié)均有表達(dá),HF組大鼠竇房結(jié)SK2通道表達(dá)水平明顯低于SO組大鼠(SO 0.31±0.16,HF 0.22±0.10,P<0.05,見(jiàn)圖3),證明SK2通道在心力衰竭組大鼠竇房結(jié)組織發(fā)生重構(gòu),表達(dá)明顯下調(diào)。

3 討論

竇房結(jié)功能的基礎(chǔ)是竇房結(jié)細(xì)胞膜上離子電流的共同作用,形成動(dòng)作電位。研究顯示SK2通道參與竇房結(jié)細(xì)胞復(fù)極化過(guò)程,在竇房結(jié)功能中起重要作用[10],而SK2通道在竇房結(jié)組織的表達(dá)如何尚無(wú)研究。本研究通過(guò)分離單個(gè)竇房結(jié)細(xì)胞行免疫熒光染色,結(jié)果證實(shí)SK2通道表達(dá)于大鼠的竇房結(jié)細(xì)胞膜上,在細(xì)胞核、細(xì)胞漿均無(wú)表達(dá),提示竇房結(jié)細(xì)胞SK2的表達(dá)是SK2通道作用于竇房結(jié)復(fù)極化的分子基礎(chǔ)。

A,B,C,D.SO組大鼠竇房結(jié)細(xì)胞SK2通道的表達(dá);E.SO組陰性對(duì)照細(xì)胞;F,G,H,I.HF組大鼠竇房結(jié)細(xì)胞SK2通道的表達(dá);J.HF組陰性對(duì)照細(xì)胞圖2 SO組與HF組大鼠竇房結(jié)細(xì)胞SK2通道的免疫熒光染色Figure 2 The immunofluorescence staining results of SK2 in sinoatrial node cells of SO and HF rats

圖3 SO組及HF組大鼠竇房結(jié)組織SK2通道蛋白Western blot結(jié)果Figure 3 Western blot analysis of SK2 protein in the sinoatrial node tissue of HF and SO rats

心力衰竭是多種心血管疾病的最終歸宿,其患病率高,預(yù)后差。心力衰竭患者易并發(fā)竇房結(jié)功能不全,表現(xiàn)為固有心率顯著減慢,固有竇性周期長(zhǎng)度、校正后竇房結(jié)恢復(fù)時(shí)間及竇房傳導(dǎo)時(shí)間明顯延長(zhǎng)。研究表明,心力衰竭竇房結(jié)功能不全的本質(zhì)為竇房結(jié)細(xì)胞膜上的離子通道表達(dá)和功能異常,離子電流重構(gòu),導(dǎo)致竇房結(jié)APD延長(zhǎng)。大量研究顯示心力衰竭時(shí)竇房結(jié)細(xì)胞If、IKs明顯下調(diào),鉀通道(ERG、KvLQT1、Kir2.4、TASK1、TWIK1、TWIK2)、鈣通道、鈉-氫交換體等離子通道的表達(dá)顯著上調(diào),致竇房結(jié)固有心率下降,校正后竇房結(jié)恢復(fù)時(shí)間延長(zhǎng)[3,4],本實(shí)驗(yàn)室前期研究證實(shí),心力衰竭時(shí)竇房結(jié)組織神經(jīng)型鈉通道Nav1.1,Nav1.6表達(dá)明顯下調(diào),可能參與心力衰竭竇房結(jié)功能不全的形成[11]。

綜上所述,SK2通道介導(dǎo)復(fù)極化電流,參與心房肌、房室結(jié)、竇房結(jié)等細(xì)胞復(fù)極化過(guò)程,其通道蛋白表達(dá)于竇房結(jié)細(xì)胞膜上,在竇房結(jié)細(xì)胞APD中起重要作用,藥物阻斷后竇房結(jié)細(xì)胞APD延長(zhǎng),竇房結(jié)組織起搏頻率明顯減慢。心力衰竭竇房結(jié)功能不全的本質(zhì)為竇房結(jié)細(xì)胞膜上離子通道的重構(gòu)致APD延長(zhǎng),而SK2通道在竇房結(jié)APD中的作用重大,為探討SK2通道在心力衰竭竇房結(jié)中的表達(dá)情況,本研究通過(guò)建立容量超負(fù)荷大鼠心力衰竭模型,采用分離竇房結(jié)細(xì)胞行免疫熒光染色及免疫印跡等方法證實(shí),SK2通道在心力衰竭竇房結(jié)組織中發(fā)生重構(gòu),通道蛋白表達(dá)明顯下調(diào),可能致竇房結(jié)細(xì)胞APD延長(zhǎng)及竇房結(jié)起搏頻率減慢,進(jìn)而參與心力衰竭竇房結(jié)功能不全的形成。闡明SK2通道在心力衰竭竇房結(jié)中表達(dá)的重構(gòu)情況對(duì)進(jìn)一步認(rèn)識(shí)心力衰竭竇房結(jié)功能不全的發(fā)生機(jī)制具有重要意義,為心力衰竭竇房結(jié)功能不全的靶向治療手段的研發(fā)提供重要的理論依據(jù)。

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Changes of small conductance calcium-activated potassium channel SK2 expression in sinoatrial node of heart failure rats induced by volume-overload

NI Yajuan1,ZHANG Jingwen2,BAI Hongyuan1,YANG Guodong2,MA Aiqun2*(1

DepartmentofCardiology,SecondAffiliatedHospital,SchoolofMedicine,Xi’anJiaotongUniversity,Xi’an710004,China;2DepartmentofCardiology,FirstAffiliatedHospital,SchoolofMedicine,Xi’anJiaotongUniversity;*Correspondingauthor,E-mail:yuxi1128-@163.com)

ObjectiveTo investigate the changes of SK2 channel expression in sinoatrial node of the heart failure(HF) rats induced by volume-overload.MethodsThe volume-overload HF rats were induced by aortocaval fistula(ACF,n=7),and the sham-operated rats were regarded as control group(SO,n=7). The abdominal cavity was opened to puncture abdominal aorta without making a fistula between abdominal aorta and inferior vena cava in SO rats. The echocardiogram indexes such as left ventricular end-systolic diameter(LVEDs),left ventricular end-diastolic diameter(LVEDd),left ventricular fraction shortening(LVFS),left ventricular end-systolic diameter(LVEDs) were measured at week 8 after operation, and the ratio of heart weight(HW) to body weight(BW) was caculated. Then the sinoatrial node cells were isolated and collected to observe the expression of the SK2 channel protein by immunofluorescent staining. Meanwhile, sinoatrial node tissues of rats were isolated to determine the change of SK2 channel protein expression by Western blot.ResultsThe data of echocardiogram showed that the systolic and diastolic function in HF rats significantly declined [LVEDd(mm):SO 5.91±0.36vsHF 11.15±0.91,P<0.01;LVEDs(mm):SO 2.89±0.28vsHF 7.89±0.70,P<0.01;LVEF(%):SO 87.10±1.63vsHF 62.10±2.57,P<0.01;LVFS(%):SO 51.27±2.03vsHF 30.05±1.66,P<0.01)], and the ratio of HW to BW significantly increased (SO 244.19±36.87vsHF 593.21±28.72,P<0.01). The results of immunofluorescent staining indicated that the SK2 channels were located on membrane of single sinoatrial node cell. The Western blot results demonstrated that the protein expression of SK2 was down-regulated significantly in sinoatrial node of HF rats compared with SO rats(0.22±0.10vs0.31±0.16,P<0.01).ConclusionThe expression of SK2 channel protein is significantly down-regulated in sinoatrial node of HF rats.

small conductance calcium-activated potassium channel; SK2 channel; heart failure; sinoatrial node; rats

中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專(zhuān)項(xiàng)基金資助項(xiàng)目(0817-1191320076)

倪雅娟,女,1986-11生,博士,住院醫(yī)師,E-mail:finley007@163.com

2017-03-02

R541.6

A

1007-6611(2017)07-0641-06

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.07.001