IL-35在肺炎支原體感染患者血清的表達水平及在不同性別、年齡的差異

黃鄧高,王 嬋,陳 揚,馮 女,唐小燕,張淑芳*

(1海口市人民醫(yī)院暨中南大學湘雅醫(yī)院附屬?？卺t(yī)院中心實驗室,?？?570208;2中南大學湘雅醫(yī)學院免疫系;#共同第一作者;*通訊作者,E-mail:haikuoyiyuan@163.com)

IL-35在肺炎支原體感染患者血清的表達水平及在不同性別、年齡的差異

黃鄧高1,2,王 嬋1#,陳 揚1,馮 女1,唐小燕1,張淑芳1*

(1?？谑腥嗣襻t(yī)院暨中南大學湘雅醫(yī)院附屬?？卺t(yī)院中心實驗室,?？?570208;2中南大學湘雅醫(yī)學院免疫系;#共同第一作者;*通訊作者,E-mail:haikuoyiyuan@163.com)

目的 分析不同年齡段肺炎支原體感染患者血清中白細胞介素35(IL-35)的水平,探討其與性別、年齡的相關(guān)性以及在肺炎支原體感染過程中的作用。 方法 將納入標準的94例肺炎支原體感染陽性作為研究組,69例肺炎支原體陰性作為對照組。符合入選標準的研究組與對照組按年齡分為三組:分別是≤1歲組(n=56),>1-10歲組(n=54)和>60歲組(n=53)。通過ELISA方法分別檢測各年齡組中血清IL-35水平,分析研究組與對照組血清IL-35水平在不同年齡組之間的表達差異以及相關(guān)性。 結(jié)果 ≤1歲組中研究組IL-35水平[(41.65±28.80)ng/L]高于對照組[(27.87±19.69)ng/L，P=0.041],>1-10歲組中研究組IL-35水平[(18.55±10.08)ng/L]低于對照組[(30.46±10.61)ng/L，P=0.000],>60歲組中研究組IL-35水平[(33.22±14.65)ng/L]高于對照組[(22.61±8.92)ng/L，P=0.002];對照組血清IL-35水平在不同年齡組兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義(P=0.226);研究組血清IL-35水平≤1歲組高于>1-10歲組(P=0.000);>60歲組高于>1-10歲組(P=0.002);≤1歲組與>60歲組之間差異無統(tǒng)計學意義(P=0.086>0.05)。 結(jié)論 IL-35可能在肺炎支原體感染過程發(fā)揮了抗炎癥作用。對照組與研究組血清中均存在IL-35表達,其表達水平與性別、年齡沒有相關(guān)性,血清IL-35水平可以考慮作為肺炎支原體感染控制水平評估的免疫學參考指標。

白細胞介素35； 血清； 肺炎支原體； 免疫性疾病

肺炎支原體病是由肺炎支原體(Mycoplasmapneumonia,MP)引起,該支原體是介于病毒和細菌之間的原核生物[1],個體大小僅有1-2 μm長,0.1-0.2 μm寬,光學顯微鏡下無法觀察到[2],給臨床診斷帶來巨大的困難。病人感染后主要表現(xiàn)為上呼吸道感染、支氣管炎、肺炎等癥狀,也可誘發(fā)其他系統(tǒng)性疾病,嚴重感染者甚至可致死[3]。目前,肺炎支原體病的發(fā)病機制尚未明確,多項研究認為IL-12,γ干擾素以及Th1型T細胞應答在肺炎支原體感染的過程扮演重要角色[4],宿主細胞介導的免疫功能在肺炎支原體相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用[5]。

近年來,肺炎支原體感染的發(fā)病率呈逐年增長趨勢[6,7]。因此支原體肺炎發(fā)病機制和早期診斷已經(jīng)受到越來越多的重視,對支原體肺炎的早期診斷不僅可以避免支原體肺炎并發(fā)癥的發(fā)生,同時也為遏制其傳播起到很好的作用。白細胞介素35(interleukin-35,IL-35)是近年發(fā)現(xiàn)的細胞因子,主要由調(diào)節(jié)性T細胞(regulatory T cells,Treg)分泌,是Treg發(fā)揮免疫負調(diào)控的主要細胞因子之一[8,9],被認為是一種具有潛在治療前景的新型抗炎因子。在細胞內(nèi)感染及炎癥過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用,成為細胞因子研究的新熱點[10]。

目前,尚未看到關(guān)于肺炎支原體感染與IL-35關(guān)系的研究報道。本研究通過測定肺炎支原體陽性和陰性對照人血清IL-35水平,初步了解IL-35在健康人以及肺炎支原體患者血清中的表達以及與性別、年齡之間的關(guān)系。為了解肺炎支原體發(fā)病機制和檢測方式提供參考。

1 材料與方法

1.1 研究對象

研究對象分研究組和對照組。研究組來源于2015-01～2016-06就診于?？谑腥嗣襻t(yī)院兒科門診、呼吸內(nèi)科門診及收治兒科和呼吸內(nèi)科病房經(jīng)九項呼吸道感染病原體IgM抗體檢測出肺炎支原體陽性的患者,共入組94例(57.7%),其中男性52例(55.3%),女性42例(44.6%)。對照組來源于同期就診于?？谑腥嗣襻t(yī)院兒科、呼吸內(nèi)科門診及收治兒科和呼吸內(nèi)科病房經(jīng)呼吸道九項檢測出肺炎支原體陰性者,共69例(44.3%),男性41例(59.4%),女性28例(40.5%)。

本研究將研究對象分為三組:≤1歲組、>1-10歲組和>60歲組。

1.2 方法

1.2.1 九項呼吸道感染病原體IgM抗體檢測 采用間接免疫熒光法(IFA)(西班牙,VIRCELL,S.L.公司,PNEUMOSLIDE IgM檢測試劑盒,16M237),同時檢測人血清中9種呼吸道感染病原體的IgM抗體,可檢的病原體包括:嗜肺軍團菌血清I型、肺炎支原體、Q熱立克次體、肺炎支原體、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒1、2和3型共9種病原體,收集肺炎支原體陽性病例。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 兩組患者一般情況

研究組與對照組的性別、年齡差異均無統(tǒng)計學意義(見表1)。

表 1 研究組與對照組一般情況

Table 1 Basic information of patients in two groups

年齡 組別 n 性別男 女χ2P年齡(歲)x±s tP≤1歲對照組2815 130664029407±03-19660060研究組2818 1008±02>1-10歲對照組2114 717101524±20374071研究組3316 175±2>60歲對照組2012 80151046175±7 06220537研究組3318 1574±9

2.2 研究組與對照組IL-35水平

研究組與對照組血清中均能檢測出IL-35表達?！?歲組:研究組血清IL-35水平高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05,見表2)。

>1-10歲組:研究組血清IL-35水平低于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001,見表2)。

>60歲組:研究組血清IL-35水平高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01,見表2)。

表 2 研究組與對照組血清中IL-35表達水平的分析

Table 2 Analysis of IL-35 concentration in serum of experimental group and control group

年齡 組別 IL?35濃度(ng/L)tP≤1歲對照組2787±1969-20900041研究組4165±2880>1-10歲對照組3046±1061 441450000研究組1855±1008>60歲對照組2261±892 -32270002研究組3322±1465

2.3 不同年齡組之間IL-35水平比較

對照組:各年齡組間血清IL-35水平兩兩比較無統(tǒng)計學意義(F=1.522,P=0.226>0.05)。

研究組:血清IL-35水平兩兩比較有差異(F=11.808,P=0.000<0.001):≤1歲組高于>1-10歲組(P=0.000<0.001);>60歲組高于>1-10歲組(P=0.002<0.01);≤1歲組與>60歲組之間差異無統(tǒng)計學意義(P=0.086>0.05，見表2)。

2.4 血清中IL-35水平與年齡、性別和肺炎支原體感染之間的相關(guān)性分析

對所有患者血清中IL-35水平與年齡、性別和肺炎支原體感染進行Spearman雙變量相關(guān)性分析,結(jié)果見表3。

表 3 血清中IL-35水平與年齡、性別和肺炎支原體感染之間的相關(guān)性分析

Table 3 Correlation of IL-35 with age, gender andMPinfection

組別年齡性別 肺炎支原體感染≤1歲組P=0．685P=0．505r=0．323，P=0．015<0．05>1-10歲組P=0．074P=0．32 r=-0．554，P=0．000<0．001>60歲組P=0．123P=0．451r=0．372，P=0．006<0．01

3 討論

IL-35可增強調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)、抑制輔助性T細胞17(T-helper cell 17,Th17)分化和效應性T細胞(effector T cell,Teff)增殖,是一種免疫抑制性細胞因子[11,12]。IL-35既能擴增CD4+CD25+T細胞,又能直接抑制CD4+CD25-效應細胞的產(chǎn)生[13],在治療免疫性疾病、慢性疾病以及維持自身耐受中起重要作用。研究報道,IL-35是一個潛在的控制乙型肝炎病毒感染和感染性腸病的治療靶點[14,15],是自身免疫性疾病的潛在治療劑[16],與哮喘、病毒感染、真菌感染和癌癥的發(fā)生機制有密切關(guān)系[17]。Zhang等[18]分析35例吉蘭-巴雷綜合征患者血清中IL-35的濃度發(fā)現(xiàn),血清IL-35含量與患者的病情嚴重程度及預后呈負相關(guān)。提示拮抗或促進IL-35的表達可能對維持機體免疫平衡具有重要意義。但也有研究證明IL-35與兒童持續(xù)性哮喘沒有相關(guān)性[19]。因此,IL-35的作用還存在一定的爭議,其具體受體、信號轉(zhuǎn)導機制及對非T細胞的影響尚未明確,成為IL-35研究的熱點之一。MP是介于病毒和細菌之間的原核生物,被其感染后可引起多種炎癥[1,3],其感染人群廣泛,從兒童至成年人[20],提示IL-35將參與MP感所導致的炎癥。目前實驗室診斷主要有:ELISA方法檢測IgM和IgG抗體、補體結(jié)合試驗、間接血凝試驗法、血清冷凝集試驗法和PCR法等快速診斷方法[3],雖然這些方法能部分有效檢出MP感染,但是及時、有效地進行MP感染的實驗室診斷十分重要。做好病程發(fā)展的實驗室數(shù)據(jù)監(jiān)測,可及時指導臨床治療,進而預防可能發(fā)生的流行和并發(fā)癥仍是亟需解決的難題。

IL-35作為一個重要的抑炎因子,目前對于IL-35的研究尚處于起步階段,其受體及信號傳導通路等重要問題尚未清楚,今后是否有希望被用于肺炎支原體感染患者的治療具體的機制還需進一步探討。

本研究初步探討了肺炎支原體感染患者不同年齡組之間血清IL-35水平的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對照組與研究組血清中均可檢測出IL-35表達。研究組與對照組IL-35水平比較：≤1歲組和>60歲組研究組比對照組高，而>1-10歲組研究組比對照組低；研究組≤1歲組和>60歲組高于>1-10歲組，對照組各年齡段之間差異沒有統(tǒng)計學意義。血清中IL-35的表達水平與性別、年齡沒有相關(guān)性，但≤1歲組和>60歲組與肺炎支原體感染成正相關(guān)，>1-10歲組與肺炎支原體感染成負相關(guān)。提示IL-35可能是肺炎支原體感染過程中的一種保護性因子,血清IL-35水平可以考慮作為評估肺炎支原體感染的參考指標。

研究對象分為三組:≤1歲組、>1-10歲組和>60歲組,原因是收集標本期間患者的病例集中在10歲以下和60歲以上,10-60歲年齡短期間幾乎沒有,因此我們不將其納入研究范圍。以上三組的研究對象存在一定的規(guī)律性,數(shù)據(jù)分析結(jié)果有統(tǒng)計學意義。但本研究也存在一定的不足,首先標本較少,其次>1-10歲年齡跨越較長,未能進行每個年齡的分組,今后需要更大的樣本量、觀察時間更長來研究探討,得出其具體量化標準。

綜上所述,本研究顯示對照組與肺炎支原體感染患者組血清中均可檢測出IL-35表達,但不同年齡肺炎支原體感染組與對照組的表達差異有統(tǒng)計學意義，且血清中IL-35的表達水平與肺炎支原體感染疾病密切相關(guān)。提示血清IL-35水平可能作為評估肺炎支原體感染患者中的免疫學參考指標,為感染患者的治療提供診斷依據(jù)。

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Expression of IL-35 in serum patients with infectedMycoplasmapneumoniaeand its difference among different age and gender

HUANG Denggao1,2,WANG Chan1#,CHEN Yang1, FENG Nü1,TANG Xiaoyan1,ZHANG Shufang1*

(1CentralLaboratory,AffiliatedHaikouHospitalXiangyaSchoolofMedicineCentralSouthUniversity,HaikouMunicipalPeople’sHospital,Haikou570208,China;2DepartmentofImmunology,XiangyaHospital,CentralSouthUniversity;#Co-firstauthor;*Correspondingauthor,E-mail:haikuoyiyuan@163.com)

ObjectiveTo investigate the concentration of IL-35 in serum of patients infected withMycoplasmapneumoniae(MP) and its difference in different age and gender, and to explore its possible roles in the process of infection.MethodsNinety-four patients infected with MP were selected as experimental group and 69 controls without infection were included as control group. All subjects were divided into three groups:less than 1 year old group,>1-10 year-old group and over 60-year-old group. The serum IL-35 concentration was detected in experimental groups and control group, and then the difference of serum IL-35 concentration among different age and gender patients was analyzed.ResultsSerum IL-35 concentration(ng/ml) in less than 1-year-old patients was higher in experimental group than in control group(41.65±28.80vs27.87±19.69,t=-2.090,P=0.041). Serum IL-35 concentration(ng/ml) in >1-10-year-old patients was lower in experimental group than in control group(18.55±10.08vs30.46±10.61,t=4.414 5,P<0.001).Serum IL-35 concentration(ng/ml) was higher in over 60-year-old patients in experimental group than in control group (33.22±14.65vs22.61±8.92,t=-3.227,P=0.002). There was no significant difference in serum IL-35 concentrations among controls with different age. The serum IL-35 level in less than 1-year-old group and over 60-year-old group was higher than that in >1-10 year-old group.ConclusionIL-35 may play an anti-inflammatory inMycoplasmapneumoniaeinfection. The IL-35 expression in serum shows significant difference betweenMPinfection patients and controls.Serum IL-35 concentration may be used as an immunological indicator to testMPinfection.

interleukin 35； serum；Mycoplasmapneumoniae(MP)； autoimmune disease

黃鄧高,男,1985-04生,在讀碩士,助理研究員,E-mail:hdg_qx@163.com 王嬋,女,1987-09生,學士,檢驗師,E-mail:286734744@qq.com

2017-03-16

R375.2

A

1007-6611(2017)07-0698-04

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.07.013