石斛‘火鳥(niǎo)’莖尖誘導(dǎo)類原球莖的組培快繁技術(shù)研究

王澤祺，孟金玲，崔永一

（1. 浙江農(nóng)林大學(xué) 風(fēng)景園林與建筑學(xué)院，浙江 臨安 311300；2. 浙江農(nóng)林大學(xué) 農(nóng)業(yè)與食品科學(xué)學(xué)院，浙江 臨安 311300）

石斛‘火鳥(niǎo)’莖尖誘導(dǎo)類原球莖的組培快繁技術(shù)研究

王澤祺1，孟金玲1，崔永一2

（1. 浙江農(nóng)林大學(xué) 風(fēng)景園林與建筑學(xué)院，浙江 臨安 311300；2. 浙江農(nóng)林大學(xué) 農(nóng)業(yè)與食品科學(xué)學(xué)院，浙江 臨安 311300）

以石斛‘火鳥(niǎo)’Dendrobium nobile ‘Huoniao’ 莖尖為外植體，用不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基對(duì)原球莖的誘導(dǎo)、增殖、分化及生根培養(yǎng)進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明，類原球莖的誘導(dǎo)最適宜的基本培養(yǎng)基為MS，生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為0.2 mg·L-1的2,4-D，誘導(dǎo)率達(dá)到92%。不同濃度NAA處理，以1.0 mg·L-1的增殖效果最好，類原球莖生長(zhǎng)較好，增殖系數(shù)達(dá)3.55倍。類原球莖的分化培養(yǎng)以0.5 mg·L-1NAA效果最好。添加5%椰乳，1 g·L-1活性碳最有利于石斛壯苗生根。試驗(yàn)顯示‘火鳥(niǎo)’類原球莖誘導(dǎo)、增殖和分化培養(yǎng)條件分別為：MS+ 2 mg·L-16-BA +0.5 mg·L-1NAA + 0.2 mg·L-12,4-D；1/2MS+0.05 mg·L-1KT + 1.0 mg·L-1NAA；1/2MS+0.5 mg·L-16-BA + 0.5 mg·L-1NAA。在光照培養(yǎng)箱中光照強(qiáng)度1 500 Lx和溫度25℃條件下，‘火鳥(niǎo)’組培苗移栽成活率達(dá)86%。

石斛‘火鳥(niǎo)’；組織培養(yǎng)；莖尖；類原球莖；移栽馴化

石斛‘火鳥(niǎo)’Dendrobium nobile ‘Huoniao’ 為蘭科Orchidaceae石斛屬Dendrobium植物，早春開(kāi)花，在商業(yè)上常以春石斛命名。其花色艷麗、觀賞期長(zhǎng)，具有較高的觀賞價(jià)值[1]。目前石斛生產(chǎn)上主要采用莖段扦插、高芽切取、組織培養(yǎng)3種方法。其中組織培養(yǎng)是現(xiàn)代化繁殖手段，國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)也有報(bào)道[2-5]。王春[6]研究發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基中加入適量BA有助于原球莖增殖。廖飛雄等[7]發(fā)現(xiàn)適量的KT處理，能有效的從芽苗的基部誘導(dǎo)類原球莖。王玉英等[8]試驗(yàn)得出誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)可在同一培養(yǎng)基中進(jìn)行，降低培養(yǎng)成本和轉(zhuǎn)接過(guò)程的污染率。王亞平等[9]對(duì)美花石斛Dendrobium loddigesii的誘導(dǎo)、增殖、分化及生根做了相關(guān)的研究。然而莖尖培養(yǎng)誘導(dǎo)類原球莖[10]難度大、莖段培養(yǎng)中存在繁殖系數(shù)低、株間個(gè)體存在差異等問(wèn)題，也是石斛產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中的瓶頸，亟待解決。

本研究對(duì)石斛‘火鳥(niǎo)’莖尖進(jìn)行組織培養(yǎng)，構(gòu)建其快繁體系，為快速生產(chǎn)‘火鳥(niǎo)’優(yōu)良種苗，促進(jìn)產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供理論依據(jù)。同時(shí)對(duì)其他石斛屬植物的快速繁殖和產(chǎn)業(yè)化發(fā)展也具有一定參考意義。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)材料為由浙江森禾種業(yè)股份有限公司提供的石斛品種‘火鳥(niǎo)’的無(wú)菌苗。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)基本條件 試驗(yàn)所有培養(yǎng)基每瓶40 mL分裝在組培瓶?jī)?nèi)，在121℃，0.14 MPa高溫高壓下滅菌20 min。材料接種后，2 000 Lx的光照下培養(yǎng)，每天光照12 h，培養(yǎng)溫度25±1℃。

1.2.2 類原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng) 取‘火鳥(niǎo)’腋芽上莖尖，解剖刀切取2 ~ 3 mm接種在類原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每個(gè)處理接種5瓶，每瓶接種2個(gè)莖尖，重復(fù)3次。培養(yǎng)基的其他附加物有蔗糖30 g·L-1、瓊脂6.5 g·L-1、椰乳150 ml·L-1、活性炭2 g·L-1，調(diào)節(jié)pH=5.6±0.01。由于細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素之間存在交互作用，可能對(duì)類原球莖的誘導(dǎo)有一定的影響，本試驗(yàn)采用4因素3水平L27(313)正交設(shè)計(jì)方案，培養(yǎng)45 d后調(diào)查收集各個(gè)處理的生物量變化相關(guān)數(shù)據(jù)，計(jì)算成活率及誘導(dǎo)率。

基本培養(yǎng)基設(shè)置3個(gè)水平：MS，1/2MS，KC；6-BA設(shè)置3個(gè)水平：0.5，1.0，2.0 mg·L-1；NAA設(shè)置3個(gè)水平：0.1，0.5，1 mg·L-1；2,4-D設(shè)置3個(gè)水平：0.2，0.4，0.8 mg·L-1（表1）。

表1 莖尖誘導(dǎo)類原球莖正交設(shè)計(jì)Table 1 Orthogonal design for induction of protocorm-like bodies(PLBs)

1.2.3 類原球莖增殖培養(yǎng) 以誘導(dǎo)出的類原球莖為外植體，培養(yǎng)在1/2MS+蔗糖30 g·L-1+瓊脂6.5 g·L-1+椰汁150 ml·L-1+0.05 mg·L-1KT的培養(yǎng)基上，調(diào)節(jié)pH=5.6±0.01，設(shè)置0，0.5，1.0和2.0 mg·L-1不同NAA濃度梯度，每個(gè)處理接種8瓶，每瓶接種5塊，每塊重0.4 g長(zhǎng)勢(shì)均一的‘火鳥(niǎo)’類原球莖材料，重復(fù)3次。培養(yǎng)45 d后調(diào)查收集各個(gè)處理的生物量，計(jì)算增殖系數(shù)。

1.2.4 類原球莖分化培養(yǎng) 將繼代增殖的原球莖培養(yǎng)在1/2MS+蔗糖30 g·L-1+瓊脂6.5 g·L-1+椰汁150 ml·L-1+0.5 mg·L-16-BA的培養(yǎng)基上，調(diào)節(jié)pH=5.6±0.01，設(shè)置0 ，0.1，0.2，0.25和0.5 mg·L-1不同NAA濃度梯度，每個(gè)處理接種8瓶，每瓶接種5塊，每塊重0.4 g長(zhǎng)勢(shì)均一的‘火鳥(niǎo)’類原球莖材料，重復(fù)3次。培養(yǎng)45 d后調(diào)查收集各個(gè)處理的生物量，統(tǒng)計(jì)分化情況。

1.2.5 試管苗的生根壯苗培養(yǎng) 以MS+0.5 mg·L-1IBA +0.1 mg·L-1NAA+蔗糖30 g·L-1+瓊脂6.8 g·L-1為培養(yǎng)基，活性炭設(shè)置3個(gè)水平（0.5，1.0，2.0 g·L-1），不添加作為對(duì)照。將增殖培養(yǎng)得到的試管苗分割，接入生根培養(yǎng)基中，每個(gè)處理接種8瓶，每瓶接種5株，45 d后統(tǒng)計(jì)生物量的變化。

把長(zhǎng)2 ~ 4 cm的試管苗，接種在MS+0.5 mg·L-1IBA +0.1 mg·L-1NAA+蔗糖30 g·L-1+ 6.8 g·L-1+活性炭1 g·L-1培養(yǎng)基中，分別添加5%的椰乳、香蕉汁、馬鈴薯汁和蘋果汁，不添加為對(duì)照，調(diào)節(jié)pH=5.6±0.01。每個(gè)處理接種8瓶，每瓶接種5株，45 d后統(tǒng)計(jì)生物量的變化。

1.2.6 ‘火鳥(niǎo)’的移栽馴化 不同光照強(qiáng)度對(duì)‘火鳥(niǎo)’組培苗移栽成活率的影響。將‘火鳥(niǎo)’馴化苗放入光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行試驗(yàn)，設(shè)3個(gè)光照強(qiáng)度水平，分別為1 500，2 000，3 000 Lx，每個(gè)處理45株，重復(fù)3次，共計(jì)135株。每隔7 d觀測(cè)1次成活率，連續(xù)觀測(cè)7周。

不同溫度對(duì)‘火鳥(niǎo)’組培苗移栽成活率的影響。將‘火鳥(niǎo)’馴化苗放入光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行試驗(yàn)，設(shè)3個(gè)溫度水平，分別為20℃，25℃，30℃，試驗(yàn)各溫度誤差為±1℃，光照強(qiáng)度設(shè)置1 500 Lx，光照時(shí)間設(shè)置為14 h/10 h（光照/黑夜），相對(duì)濕度85%。每個(gè)處理45株，重復(fù)3次，共計(jì)135株。處理50 d后統(tǒng)計(jì)生物量的變化。

1.3 數(shù)據(jù)處理

鮮重的測(cè)定使用分析天平。3個(gè)處理以內(nèi)的采用t檢驗(yàn)，并采用LSD法測(cè)驗(yàn)不同處理的差異顯著性。數(shù)據(jù)分析軟件為SPSS 16.0。

2 結(jié)果與分析

2.1 ‘火鳥(niǎo)’類原球莖的誘導(dǎo)

‘火鳥(niǎo)’莖尖誘導(dǎo)類原球莖成活率與誘導(dǎo)率見(jiàn)表2。根據(jù)表2結(jié)果對(duì)類原球莖誘導(dǎo)率進(jìn)行方差分析，結(jié)果見(jiàn)表3。

表 2 莖尖誘導(dǎo)類原球莖成活率與誘導(dǎo)率Table 2 Survival rate and induction rate of PLBs

方差分析結(jié)果表明，處理總效應(yīng)達(dá)到0.01的極顯著水平；4因素中基本培養(yǎng)基和2,4-D兩個(gè)因素對(duì)莖尖誘導(dǎo)類原球莖的效應(yīng)達(dá)到了極顯著水平，6-BA和NAA對(duì)誘導(dǎo)類原球莖的作用不顯著；說(shuō)明基本培養(yǎng)基和2,4-D對(duì)‘火鳥(niǎo)’類原球莖的誘導(dǎo)起主導(dǎo)作用?；九囵B(yǎng)基對(duì)‘火鳥(niǎo)’類原球莖誘導(dǎo)率的影響見(jiàn)表4，對(duì)其進(jìn)行差異性配比（表5）。

表4、表5表明，MS的均數(shù)最大（0.451），且1/2MS與MS和KC之間存在顯著性差異，但MS和KC間差異不顯著P=0.642>0.05，但就均數(shù)來(lái)看，MS的平均數(shù)最大，即對(duì)類原球莖的誘導(dǎo)率最高，因此類原球莖的誘導(dǎo)最適宜的基本培養(yǎng)基為MS。2,4-D對(duì)‘火鳥(niǎo)’類原球莖誘導(dǎo)率的影響見(jiàn)表6，對(duì)其進(jìn)行差異性配比（表7）。

表 3 類原球莖誘導(dǎo)率方差分析結(jié)果Table 3 ANOVA on induction rate of PLBs

表4 基本培養(yǎng)基對(duì)誘導(dǎo)率的影響Table 4 Effect of basic medium on induction rate

表 5 基本培養(yǎng)基差異性配比Table 5 Different basic medium composition

由表6、表7表明，2,4-D的濃度為0.2 mg·L-1時(shí)均數(shù)最大（0.540），且添加0.2 mg·L-1與0.4 mg·L-1和0.8 mg·L-1之間存在顯著性差異，0.4 mg·L-1和0.8 mg·L-1之間差異不顯著P=0.912>0.05，結(jié)合均數(shù)，培養(yǎng)基中添加0.2 mg·L-1的平均數(shù)最大，表明2,4-D對(duì)類原球莖的誘導(dǎo)最適宜的濃度為0.2 mg·L-1。

表 6 2,4-D對(duì)類原球莖誘導(dǎo)率的影響Table 6 Effect of 2,4-D on induction rate of PLBs

表 7 2,4-D差異性配比Table 7 Different composition of 2,4-D

2.2 類原球莖的增殖

不同濃度NAA對(duì)‘火鳥(niǎo)’類原球莖增殖的影響見(jiàn)表8。

從表8可以看出，與對(duì)照組相比，添加不同濃度NAA的類原球莖培養(yǎng)后平均鮮重和平均增殖倍數(shù)更大，其生長(zhǎng)狀態(tài)更好，增殖快，聚集成團(tuán)狀，體積較大，分化少。在不同濃度的NAA處理中，以1.0 mg·L-1的增殖效果最好，所培養(yǎng)的類原球莖生長(zhǎng)也較好，培養(yǎng)后鮮重、增殖系數(shù)分別為7.10，3.55。NAA濃度在0.05 mg·L-1時(shí)，

生長(zhǎng)狀況比1.0 mg·L-1濃度的要差，生長(zhǎng)緩慢，顏色暗淡。NAA為2.0 mg·L-1時(shí)，后期會(huì)導(dǎo)致類原球莖的分化，抑制其增殖，其增殖系數(shù)雖然較高，但類原球莖的質(zhì)量稍差，且生長(zhǎng)不均勻，分化出的莖葉比較細(xì)弱。說(shuō)明NAA濃度過(guò)低不利于類原球莖的增殖，濃度過(guò)高則在后期出現(xiàn)抑制類原球莖的增殖。因此‘火鳥(niǎo)’類原球莖增殖的NAA的適宜濃度為1.0 mg·L-1。

2.3 類原球莖的分化

不同濃度NAA對(duì)‘火鳥(niǎo)’類原球莖分化的影響見(jiàn)表9。

表 8 NAA對(duì)類原球莖增殖的影響Table 8 Effect of NAA on proliferation of PLBs

表 9 不同濃度NAA對(duì)類原球莖分化的影響Table 9 Effect of different NAA concentration on differentiation of PLBs

從表9可知，添加0.5 mg·L-1NAA處理的‘火鳥(niǎo)’類原球莖分化效果明顯優(yōu)于其它處理，與不添加NAA的處理相比，在P＜0.01水平上有極顯著差異，而且出苗更多、分化出的芽較健壯，沒(méi)有徒長(zhǎng)現(xiàn)象。試驗(yàn)結(jié)果可以看出，隨著NAA濃度的提高，類原球莖及分化苗的生長(zhǎng)等方面表現(xiàn)出較大的優(yōu)勢(shì)，類原球莖和分化苗鮮綠，長(zhǎng)勢(shì)整齊，部分分化苗長(zhǎng)出根，培養(yǎng)材料大多聚集，由內(nèi)向外生長(zhǎng)，其中添加0.5 mg·L-1NAA的培養(yǎng)基處理中根與葉片的生長(zhǎng)量增加最大。

2.4 ‘火鳥(niǎo)’的生根壯苗

從表10、表11可看出，每個(gè)處理都比對(duì)照發(fā)根數(shù)及鮮重多，表明活性炭對(duì)‘火鳥(niǎo)’試管苗生根壯苗的促進(jìn)作用顯著。培養(yǎng)基中添加1 g·L-1和0.5 g·L-1活性炭，‘火鳥(niǎo)’試管苗的株高、發(fā)根數(shù)以及根長(zhǎng)在P＜0.05水平上有顯著差異?；钚蕴繚舛雀哂? g·L-1，試管苗的株高、鮮重、發(fā)根、發(fā)根數(shù)、根重沒(méi)有顯著差異。由此可知添加1 g·L-1活性炭更有利于壯苗和生根，同時(shí)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)活性炭能夠有效控制褐化現(xiàn)象。

表 10 活性炭對(duì)試管苗生根壯苗的影響Table 10 Effect of activated carbon on growth and rooting of in-vitro plantlets

表 11 不同有機(jī)添加物對(duì)‘火鳥(niǎo)’試管苗生根壯苗的影響Table 11 Effect of different organic additives on growth and rooting of in-vitro plantlets

由表11可知，椰乳與添加其他有機(jī)物在株高、根長(zhǎng)有顯著差異（P＜0.05），分別為4.39 cm和2.20 cm，其葉色濃綠，莖粗節(jié)長(zhǎng)，根粗壯且整齊。在生根數(shù)與生根率方面，4種添加物之間無(wú)顯著性差異，但從鮮重上比較椰乳與馬鈴薯汁處理組之間有顯著差異。因此椰乳最有利于‘火鳥(niǎo)’壯苗生根培養(yǎng)。

2.5 ‘火鳥(niǎo)’的移栽馴化

不同光照強(qiáng)度對(duì)‘火鳥(niǎo)’組培苗移栽馴化的影響見(jiàn)表12。不同溫度對(duì)‘火鳥(niǎo)’組培苗移栽馴化的影響見(jiàn)表13。

表 12 不同光照強(qiáng)度下‘火鳥(niǎo)’組培苗生長(zhǎng)指標(biāo)Table 12 Growth traits of in-vitro plantlets under different illumination intensity

表 13 不同溫度對(duì)‘火鳥(niǎo)’組培苗生長(zhǎng)的影響Table 13 Growth traits of in-vitro plantlets under different temperature

由表12可知，光照強(qiáng)度1 500 Lx處理組的‘火鳥(niǎo)’組培苗的植株重量、高度，葉片數(shù)量分別是光照強(qiáng)度3 000 Lx處理組的2.82倍，2.48倍，3倍，且光照強(qiáng)度3 000 Lx處理組的‘火鳥(niǎo)’植株個(gè)體明顯瘦弱，生長(zhǎng)速度緩慢，甚至出現(xiàn)部分死亡的現(xiàn)象，成活率僅47%。而光照強(qiáng)度2 000 Lx處理組的植株葉片呈綠色，新葉生長(zhǎng)相對(duì)較多，與1 500Lx處理組僅在植株鮮重增加量存在顯著差異。因此1 500 Lx光照對(duì)‘火鳥(niǎo)’組培苗馴化效果最佳。

由表13可知，在相同的相對(duì)濕度和光照條件下，25℃處理組‘火鳥(niǎo)’組培苗葉片數(shù)的增加量和成活率與其他處理組之間存在顯著性差異，成活率達(dá)86%。25℃處理組植株高度、鮮重與30℃處理組差異顯著。試驗(yàn)中觀察到30℃處理組的組培苗生長(zhǎng)狀況不良，植株葉尖部分發(fā)黃明顯。培養(yǎng)箱溫度在25℃條件下，‘火鳥(niǎo)’組培馴化苗新根數(shù)量多，且長(zhǎng)勢(shì)良好，最為適宜。

3 結(jié)論與討論

在‘火鳥(niǎo)’類原球莖誘導(dǎo)試驗(yàn)中，類原球莖的誘導(dǎo)最適宜的基本培養(yǎng)基為MS，本試驗(yàn)與修景潤(rùn)等[10]的篩選結(jié)果一致。0.2 mg·L-1的2,4-D對(duì)類原球莖誘導(dǎo)最適宜，因此合適的培養(yǎng)條件為MS+ 2 mg·L-16-BA +0.5 mg·L-1NAA+0.2 mg·L-12,4-D。不同濃度NAA的處理，1.0 mg·L-1的增殖效果最佳，且類原球莖生長(zhǎng)良好，平均增殖系數(shù)為3.55倍，最適培養(yǎng)條件為1/2MS+0.05 mg·L-1KT +1.0 mg·L-1NAA。類原球莖的分化培養(yǎng)以0.5 mg·L-1NAA的效果最好，最適的培養(yǎng)條件為1/2MS + 0.5 mg·L-16-BA + 0.5 mg·L-1NAA。

類原球莖可以通過(guò)葉尖、花莖、莖節(jié)切段和叢生芽等為外植體進(jìn)行誘導(dǎo)。誘導(dǎo)類原球莖過(guò)程中愈傷、類原球莖和不定芽同時(shí)交錯(cuò)存在[11]。本試驗(yàn)用NAA，6-BA和2,4-D對(duì)‘火鳥(niǎo)’類原球莖進(jìn)行誘導(dǎo)，結(jié)果表明，2,4-D的作用顯著，其次是NAA和6-BA。韓磊等[12,13]認(rèn)為1/2MS相比MS培養(yǎng)基可減少類原球莖褐化程度，同時(shí)1/2MS，0.2 mg·L-1NAA和0.5 mg·L-16-BA有利于其芽分化，但本試驗(yàn)結(jié)果是MS對(duì)類原球莖的誘導(dǎo)效果最佳，存活率較高，分化效果在0.5 mg·L-1NAA和0.5 mg·L-16-BA處理?xiàng)l件下較好，這與韓磊的研究結(jié)果有所差異，可能與基因型差異引起的植物體內(nèi)源激素水平的不同有關(guān)[14]。不同濃度的KT均具有愈傷組織的直接誘導(dǎo)能力，但作用效果不同[15]。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，低濃度的KT與高濃度的NAA組合有利于‘火鳥(niǎo)’類原球莖的增殖生長(zhǎng)。

在蘭科植物組織培養(yǎng)過(guò)程中添加有機(jī)物屢見(jiàn)報(bào)道，有機(jī)添加物中包含植物生長(zhǎng)所需的豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、硫胺素、核黃素、抗壞血酸、鉀、鈉、鈣、鎂、磷等營(yíng)養(yǎng)成分。研究發(fā)現(xiàn)椰乳能促進(jìn)兜蘭不定根的形成[16]，椰乳有利于蝴蝶蘭Phalaenopsis aphrodite地上部鮮質(zhì)量積累[17]，香蕉汁和土豆汁有利于鐵皮石斛壯苗生根[18]，添加蘋果汁和香蕉汁有利于墨蘭Cymbidium sinense生根壯苗[19]。本試驗(yàn)選用這幾種常用有機(jī)添加物，結(jié)果表明椰乳一定程度上促進(jìn)了‘火鳥(niǎo)’組培苗的生長(zhǎng)，與潘虹虹等[20]的研究結(jié)果一致。由于培養(yǎng)基中添加椰乳，增加了培養(yǎng)成本，為了降低成本，替代椰乳成分的其它有機(jī)添加物有待研究。在生根培養(yǎng)基中加入1g·L-1的活性炭能有效提高生根率并控制褐化現(xiàn)象。光照培養(yǎng)箱光照強(qiáng)度1 500 Lx和培養(yǎng)溫度25℃條件更有利于‘火鳥(niǎo)’組培苗移栽馴化，過(guò)強(qiáng)的光照和過(guò)高的溫度，會(huì)使‘火鳥(niǎo)’葉片出現(xiàn)發(fā)黃，葉綠素遭破壞，成活率降低。

石斛屬組織培養(yǎng)的相關(guān)研究報(bào)道較多，但是由于蘭科植物的不同品種之間類原球莖誘導(dǎo)、增殖及芽分化等方面存在較大差異，本試驗(yàn)選用觀賞價(jià)值較高的 ‘火鳥(niǎo)’，較系統(tǒng)地開(kāi)展了其組培快繁的研究，初步構(gòu)建了‘火鳥(niǎo)’組培快繁體系。

[1] 董璐，李青. 春石斛試管花芽分化與開(kāi)花的影響因素[J]. 東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，43（1）：61－66．

[2] 張愛(ài)香，左利兵，劉會(huì)清，等. 春石斛蘭愈傷組織的誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基的篩選[J]. 河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2011，27（1）：36－37．

[3] K P Martin，J Madassery. Rapid in vitro propagation of Dendrobium hybrids through direct shoot formation from foliar explants, and protocorm-like bodies[J]. Sci Hor，2006，108（1）：95－99．

[4] R B Malabadi，G S Mulgund，N Kallappa. Micropropagation of Dendrobium nobile from shoot tip sections[J]. J Plant Physiolo，2005，162（4）：473－478．

[5] 周輝明，葉煒，羅慶國(guó). 春石斛的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J]. 三明農(nóng)業(yè)科技，2006，3：23－24．

[6] 王春. 石斛蘭組織培養(yǎng)及快繁技術(shù)研究[J]. 浙江林業(yè)科技，2002，22（2）：38－40.

[7] 廖飛雄，王恒明，黃群慧. 春石斛的工廠化快速繁殖技術(shù)研究[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2006，19（5）：943－945.

[8] 王玉英，李枝林，余朝秀. 春石斛試管增殖研究初報(bào)[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)．2005，21（2）：208－209．

[9] 王亞平，曾美琴，張樂(lè)萍，等. 盆栽春石斛蘭組培快繁技術(shù)研究[J]. 中國(guó)園藝文摘，2016，（9）：28－31.

[10] 修景潤(rùn)，樸炫春，姚睿，等. 培養(yǎng)基種類、BA濃度和蔗糖濃度對(duì)春石斛組培苗增殖的影響[J]. 北方園藝，2012，（12）：143－145．

[11] 粦葉秀. 石斛蘭組織培養(yǎng)和細(xì)胞學(xué)觀察[J]. 園藝學(xué)報(bào)，1995，22（1）：83－87．

[12] 韓磊，張洪平，艾應(yīng)偉. 不同激素對(duì)春石斛的組織培養(yǎng)影響研究初報(bào)[J]. 北方園藝，2007，（3）：177－178.

[13] 韓磊. 不同激素對(duì)春石斛微體快繁的影響[D]. 成都：四川大學(xué)，2007．

[14] 時(shí)青青. 春石斛離體繁殖不同成苗途徑的研究[D]. 北京：北京林業(yè)大學(xué)，2009．

[15] 賀佳，彭峰，江玉梅，等. 石斛蘭組織培養(yǎng)和快速繁殖體系的建立與優(yōu)化[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)．2010（6）：70－72．

[16] 曾宋君，陳之林，吳坤林，等. 兜蘭無(wú)菌播種和組織培養(yǎng)研究進(jìn)展[J]. 園藝學(xué)報(bào)，2007，34（3）：793－796.

[17] 何松林，蔣要衛(wèi)，任凝輝，等. 培養(yǎng)基、添加物及碳源對(duì)蝴蝶蘭試管苗生長(zhǎng)的影響[J]. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，40（2）：142－145.

[18] 郭洪波，于曉丹，陳麗靜，等. 鐵皮石斛莖節(jié)離體培養(yǎng)的研究[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18（11）：2659－2660.

[19] 曾宋君，程式君，張京麗，等. 墨蘭及其雜種的組織培養(yǎng)與快速繁殖[J]. 廣西植物，1998，18（2）：153－156.

[20] 潘虹虹，孫丹，廉美蘭，等. 幾種外部因子對(duì)春石斛組培生根的影響[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（29）：12591－12594.

Tissue Culture of Soot Apices for Induction of PLBs of Dendrobium nobile ‘Huoniao’

WANG Ze-qi，MENG Jin-ling，CUI Yong-yi
（1.School of Landscape Architecture, Zhejiang A & F University, Lin’an 311300, China; 2. School of Agricultural and Food Science, Zhejiang A & F University, Lin’an 311300, China)

Experiments were conducted on induction, multiplication, differentiation and rooting of shoot apices of Dendrobium nobile ‘Huoniao’ as explants treated by different plant growth regulators and basic medium. The results showed that the best basic medium and growth regulator was MS and 0.2 mg·L-1of 2,4-D for induction of protocorm-like bodies(PLBs) with induction rate of 92%. 1.0 mg·L-1of NAA had the best effect of proliferation of PLBs, with growth coefficient of 3.55 time. 0.5 mg·L-1of NAA had the best effect of differentiation of PLBs. Addition of 5% coconut milk and 1.0 g·L-1activated carbon had advantages of rooting and seedling growth. The conclusions for the experiments were as follows, the best condition for induction, proliferation and differentiation was MS +2 mg·L-16-BA + 0.5 mg·L-1NAA +0.2 mg·L-12,4-D, 1/2MS + 0.05 mg·L-1KT + 1.0 mg·L-1NAA, and 1/2MS +0.5 mg·L-16-BA + 0.5 mg·L-1NAA. The survival rate of in-vitro plantlets was 86% under 25℃ and 1 500 Lx light intensity in light incubator.

Dendrobium nobile ‘Huoniao’; tissue culture; shoot apices; protocorm-like bodies

S723.1+32

A

1001-3776（2017）02-0048-07

10.3969/j.issn.1001-3776.2017.02.007

2016-11-05 ；

2017-02-28

浙江省花卉新品種選育重大科技專項(xiàng)( 編號(hào): 2012C12909-11-2)

王澤祺，碩士研究生，主要從事觀賞花卉繁殖研究；E-mail：wzq041015@126.com。通信作者：崔永一，博士，教授，主要從事觀賞花卉繁殖研究；E-mail：orchidcui@163.com。