臨床分離鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)消毒劑抗藥性的研究

梁玉金?張莉

[摘要] 目的 研究臨床分離的鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)常用臨床消毒劑抗藥性研究。 方法 收集自本院2014年1月～2015年12月臨床患者分離獲得的病原菌株鮑曼不動(dòng)桿菌菌株60株。根據(jù)本醫(yī)院抗菌藥譜：氨曲南、妥布霉素、復(fù)方新諾明、氨芐西林-舒巴坦、亞胺培南、左旋氧氟沙星、頭孢他定、頭孢吡肟、慶大霉素、環(huán)丙沙星、呋喃妥因、哌拉西林-他巴唑坦等抗生素耐藥敏感程度，分為三組分，鮑曼不動(dòng)桿菌敏感株、多重耐藥不含碳青霉烯類耐藥、多重耐藥含碳青霉烯類耐藥。采用營養(yǎng)肉湯稀釋法（試管法）分別測定含氯消毒片、復(fù)合碘皮膚消毒液、醋酸氯已定的最低抑菌濃度（MIC）值。 結(jié)果 含氯消毒片對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌敏感株、多重耐藥不含碳青霉烯類耐藥和多重耐藥含碳青霉烯類耐藥的MIC值分別為（940±258）、（958±247）、（957±292）mg/L，MIC范圍均為500～1500mg/L；復(fù)合碘皮膚消毒液為（45±23）、（54±30）、（49±30）mg/L，MIC范圍均為34～63mg/L；醋酸氯已定為（26±20）、（23±10）、（29±35）mg/L，MIC范圍敏感株和多重耐藥不含碳青霉烯類耐藥均為8～63mg/L，多重耐藥含碳青霉烯類耐藥為8～125mg/L。結(jié)論 本院分離的鮑曼不動(dòng)桿菌在抗菌藥物敏感程度不同情況下，對(duì)常用的三種消毒劑抗藥性不存在差異。但是，含氯消毒片對(duì)分離的鮑曼不動(dòng)桿菌實(shí)際使用濃度和推薦使用濃度存在較大差異。

[關(guān)鍵詞] 鮑曼不動(dòng)桿菌；消毒劑；含氯消毒片；復(fù)合碘皮膚消毒液；醋酸氯已定；抗藥性

[中圖分類號(hào)] R378 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2017）10-232-04

Study on drug resistance of clinical isolates of acinetobacter baumannii to Bauman

LIANG Yujin ZHANG Li

Clinical Laboratory， Shunde District Hospital of traditional Chinese Medicine， Guangdong， Foshan 528300， China

[Abstract] Objective To study the drug resistance of clinical isolates of Acinetobacter baumannii to Bauman. Methods Clinical isolates of 60 strains of Acinetobacter strains isolated from Bauman in our hospital from January 2014 to December 2015 were selected. According to the antimicrobial spectrum sensitivity to antibiotic resistance， such as aztreonam， tobramycin， compound sulfamethoxazole， ampicillin sulbactam， imipenem， levofloxacin， ceftazidime， cefepime， gentamicin， ciprofloxacin， piperacillin， piperacillin and methimazole， they were divided into three groups. Bauman sensitive Acinetobacter baumannii， multi drug resistant carbapenem resistant， multi drug resistant carbapenem resistant. The minimum inhibitory concentration （MIC） values were determined by nutrient broth dilution method （tube method）. Results The MIC values of the resistance to antibiotics and the multi drug resistance of carbapenem resistant Acinetobacter baumannii were （940±258）， （958±247）， （957±292）mg/L， and MIC range was 500 - 1500mg/L. Compound iodine skin disinfectant solution was （45±23）， （54±30）， （mg/L±30） mg/L， MIC range was 34-63 mg/L. Chlorhexidine acetate has been determined to be （26±20）， （23±10）， （29±35）， MIC range sensitive strains and multi drug resistant carbapenem resistance were 8 - 63 mg/L， and Multi drug resistant carbapenem resistance was 8 - 125 mg/L. Conclusion There are no differences in the resistance of the three commonly used disinfectants to Bauman in our hospital. However， there is a great difference between the actual concentration and the recommended concentration of the isolated Acinetobacter baumannii by using the chlorine disinfection tablet in the separation of Bauman.

[Key words] Acinetobacter Bauman； Disinfectant； Chlorine disinfection tablet； Compound iodine skin disinfectant； Chlorhexidine acetate； Drug resistance

鮑曼不動(dòng)桿菌普遍存在自然界中，由于該菌具有極強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)能力和獲得外源耐藥基因的能力，因而在醫(yī)院內(nèi)極易造成播散流行。近年來，隨

著抗菌藥物的廣泛使用，鮑曼不動(dòng)桿菌多重耐藥現(xiàn)象日益嚴(yán)重，已成為醫(yī)院感染的重要病原菌之一[1-3]。該菌不僅其對(duì)抗菌藥物耐藥性逐年增強(qiáng)，而且其攜帶耐消毒劑已有相關(guān)報(bào)道。本研究旨在通過臨床分離的鮑曼不動(dòng)桿菌根據(jù)本醫(yī)院抗菌藥譜：氨曲南、妥布霉素、復(fù)方新諾明、氨芐西林-舒巴坦、亞胺培南、左旋氧氟沙星、頭孢他定、頭孢吡肟、慶大霉素、環(huán)丙沙星、呋喃妥因、哌拉西林-他巴唑坦等抗生素耐藥性，分為三組分，鮑曼不動(dòng)桿菌敏感株、多重耐藥不含碳青霉烯類耐藥、多重耐藥含碳青霉烯類耐藥。采用營養(yǎng)肉湯稀釋法[5-7]。分別測定含氯消毒片、復(fù)合碘皮膚消毒液、醋酸氯已定消毒劑抗藥性，了解該細(xì)菌在抗菌藥物敏感程度不同情況下，是否對(duì)消毒劑抗藥性存在差異?，F(xiàn)將研究報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

菌株選取擬選取本實(shí)驗(yàn)室自2014年1月～2015年12月從感染病例送檢的標(biāo)本中，分離獲得的病原菌：鮑曼不動(dòng)桿菌菌株。藥敏試驗(yàn)結(jié)果參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員（NCCLS）2013年規(guī)定的臨界值判定耐藥（R）、中介（I）和敏感（S）。對(duì)病原菌分為敏感菌株：大鮑曼不動(dòng)桿菌；耐藥菌株：鮑曼不動(dòng)桿菌（多重耐藥不含碳青霉烯類耐藥）、鮑曼不動(dòng)桿菌（含碳青霉烯類耐藥）[8]。

1.2 試劑

消毒劑含氯消毒片（商品名：海格速利），規(guī)格：500mg/L，批號(hào)14054082，深圳市安多福消毒高科技股份有限公司生產(chǎn)。復(fù)合碘皮膚消毒液（商品名：點(diǎn)而康），規(guī)格：2170mg/L，批號(hào)20130917，上海利康消毒高科技有限公司生產(chǎn)。醋酸氯已定，規(guī)格：500mg/L，批號(hào)140620、141128，本院制劑中心生產(chǎn)。

1.3 方法

1.3.1 菌株鑒定根據(jù)全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第3版）。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司出版，對(duì)送檢標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌分離、培養(yǎng)和鑒定。藥敏試驗(yàn)結(jié)果參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NCCLS）2013年規(guī)定的臨界值判定耐藥（R）、中介（I）和敏感（S）執(zhí)行。標(biāo)準(zhǔn)菌株：大腸埃希菌（ATCC25922）、大腸埃希菌（ATCC35218）、銅綠假單胞菌（ATCC27853），由廣東省臨床檢驗(yàn)中心提供。

1.3.2 菌株對(duì)消毒劑抗藥性MIC測定 （1）預(yù)處理：①復(fù)合碘皮膚消毒液、醋酸氯已定原液即為臨床推薦使用濃度，用等體積蒸餾水稀釋成原液濃度的1/2，1/4，1/8，1/16，1/32，1/64濃度梯度。每片含氯消毒片，溶解在蒸餾水1000mL（濃度500mg/L）。②菌液制備將各菌株接種營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)，36℃培養(yǎng)18h[9]。再接種普通瓊脂平板36℃培養(yǎng)24h，從平板挑選單個(gè)菌落，接種普通瓊脂斜面，36℃培養(yǎng)24h。將斜面上的菌苔用PBC洗下，稀釋成105～108cfu/mL的菌懸液（相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠁挝唬?。?）營養(yǎng)肉湯稀釋法（試管法）：取各濃度梯度消毒劑供試液2.5mL，加至含已滅菌的雙倍濃度營養(yǎng)肉湯試管中，混勻。取含菌量為105～108cfu/mL菌懸液0.1mL，接種于上述試管中，作為試驗(yàn)組樣本；同法，接種于不含消毒劑的營養(yǎng)肉湯的試管中，作為陽性對(duì)照；取2支含營養(yǎng)肉湯的試管，不加消毒劑和菌液，作為陰性對(duì)照。所有菌液于15min內(nèi)接種完畢，試管放置于37℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)48h，觀察結(jié)果。（3）評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)陽性對(duì)照管有細(xì)菌生長（混濁），陰性對(duì)照管無菌生長（透明），試驗(yàn)組以在試管內(nèi)完全抑制細(xì)菌生長的最高稀釋度所對(duì)應(yīng)的消毒劑濃度，為該樣品對(duì)受試菌的MIC值（mg/L） [10]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0建立數(shù)據(jù)庫，計(jì)量資料以（）的形式表示，進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，分析處理以抗菌藥物敏感程度不同分為三組的鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)三種消毒劑的MIC值，通過t檢驗(yàn)比較分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三種消毒劑對(duì)60株臨床分離的鮑曼不動(dòng)桿菌的MIC值（試管法）情況

最低抑菌濃度（MIC）值三種消毒劑中含氯消毒片對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌敏感株、多重耐藥不含碳青霉烯類耐藥和多重耐藥含碳青霉烯類耐藥的MIC值（940±258）、（958±247）、（957±292）mg/L分別均高于復(fù)合碘皮膚消毒液為（45±23）、（54±30）、（49±30）mg/L，F(xiàn)=17.323、18.534、15.646，醋酸氯已定為（26±20）、（23±10）、（29±35）mg/L，F(xiàn)=17.187、18.521、15.646，P<0.05，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。復(fù)合碘皮膚消毒液和醋酸氯已定對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌敏感株、多重耐藥不含碳青霉烯類耐藥和多重耐藥含碳青霉烯類耐藥的MIC值無明顯差異，P>0.05。見表1。

2.2 三種消毒劑對(duì)60株臨床分離的鮑曼不動(dòng)桿菌的MIC值（試管法）情況

最低抑菌濃度（MIC）值濃度分布三種消毒劑中含氯消毒片對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌敏感株、多重耐藥不含碳青霉烯類耐藥和多重耐藥含碳青霉烯類耐藥的MIC值范圍均為500～1500mg/L；復(fù)合碘皮膚消毒液MIC值范圍均為34～63mg/L；醋酸氯已定MIC值范圍敏感株和多重耐藥不含碳青霉烯類耐藥均為8～63mg/L，多重耐藥含碳青霉烯類耐藥為

8～125mg/L，本院分離的鮑曼不動(dòng)桿菌在抗菌藥物敏感程度不同情況下，對(duì)常用的三種消毒劑抗藥性基本差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.183、1.648、1.785，P>0.05）。見表2。

3 討論

細(xì)菌的耐藥問題己不再局限于抗生素耐藥，消毒劑耐藥性已普遍存在，給臨床細(xì)菌病的防治帶來了新的困難，值得我們重視。消毒劑對(duì)不同微生物的作用機(jī)制存在差異性，因此，對(duì)消毒劑作用機(jī)制的研究已迫在眉睫。消毒劑的耐藥機(jī)制與抗菌藥物有相似之處，很容易導(dǎo)致交叉耐藥性[11-12]。由于細(xì)菌是容易變異，且容易受外界環(huán)境尤其是抗菌藥物因素影響的特殊生物，加之每個(gè)地區(qū)每個(gè)國家所使用的抗菌藥物不同，抗菌藥物的使用原則也不同，造就了在不同國家、不同地區(qū)、甚至不同醫(yī)院和不同病區(qū)間對(duì)同類微生物的耐藥率也存在較大差異。如果這種“抗生素-消毒劑耐藥”菌株沒有被重視并及時(shí)殺滅，成為醫(yī)院感染的流行菌株，就會(huì)加大感染控制的難度，造成社會(huì)、經(jīng)濟(jì)的損失[13]。

本研究通過收集自本院2014年1月～2015年12月臨床患者分離獲得的病原菌株鮑曼不動(dòng)桿菌菌株60株。根據(jù)本醫(yī)院抗菌藥譜：氨曲南、妥布霉素、復(fù)方新諾明、氨芐西林-舒巴坦、亞胺培南、左旋氧氟沙星、頭孢他定、頭孢吡肟、慶大霉素、環(huán)丙沙星、呋喃妥因、哌拉西林-他巴唑坦等抗生素耐藥敏感程度，分為三組分，鮑曼不動(dòng)桿菌敏感株、多重耐藥不含碳青霉烯類耐藥、多重耐藥含碳青霉烯類耐藥。采用營養(yǎng)肉湯稀釋法（試管法）分別測定含氯消毒片、復(fù)合碘皮膚消毒液、醋酸氯已定的最低抑菌濃度（MIC）值。結(jié)果表明，最低抑菌濃度（MIC）值三種消毒劑中含氯消毒片對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌敏感株、多重耐藥不含碳青霉烯類耐藥和多重耐藥含碳青霉烯類耐藥的MIC值分別均高于復(fù)合碘皮膚消毒液、醋酸氯已定，提示，通過臨床分離的鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)本院常用的3種消毒劑抗藥性研究，細(xì)菌沒有隨抗菌藥物敏感度不同情況下，對(duì)消毒劑抗藥性存在差異，復(fù)合碘皮膚消毒液、醋酸氯已定消毒滅菌的效果優(yōu)于含氯消毒片，復(fù)合碘皮膚消毒液中的碘與表面活性劑聚維酮相結(jié)合而成的松散絡(luò)合物，從而發(fā)揮滅菌的效果。吸附在細(xì)菌胞漿膜的滲透屏障，使細(xì)胞內(nèi)容物漏出，低濃度抑制細(xì)菌，高濃度殺滅細(xì)菌。醋酸氯已定可以吸附在細(xì)菌胞漿膜的滲透屏障，使細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)容物形成滲出，低濃度抑制細(xì)菌，高濃度殺滅細(xì)菌。本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，本院分離的鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)消毒劑推薦使用濃度和實(shí)際濃度存在較大差異。如含氯消毒片對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的實(shí)際濃度MIC值均大于推薦濃度。已有研究報(bào)道[14]。建議臨床能有效地選擇、調(diào)整消毒劑濃度及類別，加強(qiáng)監(jiān)測，有利于控制抗消毒劑菌株的出現(xiàn)，可能會(huì)導(dǎo)致醫(yī)院消毒不徹底，引起醫(yī)院感染的發(fā)生和傳播[15]。本研究條件局限等因素，未能開展細(xì)菌對(duì)消毒劑的耐藥基因檢測，今后希望在這方面進(jìn)行研究，為本院建立更完善的耐藥性規(guī)范管理，為有效減少消毒劑的濫用、用量不足或處理方法不當(dāng)?shù)葐栴}提供參考依據(jù)。

綜上所述，復(fù)合碘皮膚消毒液、醋酸氯已定消毒劑抗菌消毒效果更加理想，值得臨床推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2017-03-31）