紫外分光光度法測(cè)定清熱潤(rùn)燥口服液中總多糖的含量

袁小淋++余曉玲++魏丹霞++李月亭

摘要：目的建立紫外分光光度法測(cè)定清熱潤(rùn)燥口服液中總多糖含量的方法。方法采用苯酚-硫酸比色法，以D-無(wú)水葡萄糖為對(duì)照品，在波長(zhǎng)490 nm處測(cè)定總多糖含量。結(jié)果D-無(wú)水葡萄糖回歸方程為A=00726x+01531，R=09998，線性范圍0260 mg～0910 mg，平均回收率為10037%，RSD 為132%（n=6）。結(jié)論本方法穩(wěn)定、快捷，可用于清熱潤(rùn)燥口服液中總多糖的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：清熱潤(rùn)燥口服液；總多糖；紫外分光光度法；苯酚-硫酸比色法；含量測(cè)定

中圖分類號(hào)：R9272文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2017）07-0063-03

地域氣候特征、居民的飲食習(xí)慣，使得昆明地區(qū)的咳嗽多發(fā)，并具有獨(dú)特的特點(diǎn)。雖然，臨床用于治療咳嗽的西藥及中成藥較多，但有效針對(duì)昆明地區(qū)咳嗽特點(diǎn)的中成藥還未見(jiàn)報(bào)道。清熱潤(rùn)燥口服液處方來(lái)源于云南省著名老中醫(yī)陸家龍教授的臨床驗(yàn)方，臨床上經(jīng)過(guò)了多年的驗(yàn)證。處方由桑葉、蘆根、薏苡仁等13味中藥組成，具有清熱養(yǎng)陰，潤(rùn)燥止咳之功。為控制劑的質(zhì)量，確保臨床療效，本研究采紫外分光光度法對(duì)清熱潤(rùn)燥口服液中的總多糖進(jìn)行含量測(cè)定，為該制劑的質(zhì)量控制方法研究打下基礎(chǔ)。

1儀器與試藥

UV-2000型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（無(wú)尼可儀器有限公司）；電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；FB124自動(dòng)內(nèi)校電子分析天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）。苯酚；濃硫酸；D-無(wú)水葡萄糖（110833-200904）；乙醇；清熱潤(rùn)燥口服液3批樣品（自制批號(hào)為150616，150713，150716）。

2方法與結(jié)果

21測(cè)定波長(zhǎng)選擇[1～8]顯色后D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品溶液和供試品溶液在490 nm處均有最大吸收，故選擇測(cè)定波長(zhǎng)為490 nm。

22對(duì)照品溶液的制備精密稱取D-無(wú)水葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品適量，加水制成每1 mL含D-無(wú)水葡萄糖0052 mg的溶液，即得。

23供試品溶液的制備[9～14]精密吸取清熱潤(rùn)燥口服溶液（批號(hào)150616）1 mL，加水稀釋至50 mL，從中另取2 mL蒸干，用80%乙醇2 mL洗滌2次，離心（3000r/min）10 min，傾去上清液，用水分散，放置，合并殘留在蒸發(fā)皿上的沉淀一并過(guò)濾，收集濾液后，定容至10 mL容量瓶中，即得供試品溶液。

24測(cè)定方法精密量取1 mL供試品溶液置10 mL量瓶中，加5% 苯酚溶液1 mL，混勻，沿壁加入濃硫酸50 mL，混勻，40℃水浴加熱20 min，置冷水浴中冷卻至室溫。以相應(yīng)的溶液為空白，在490 nm處測(cè)定吸光度。連續(xù)測(cè)定3次，取平均值，以D-無(wú)水葡萄糖為對(duì)照品，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定總多糖含量。

25標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備線性關(guān)系考察精密吸取D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品溶液（0052 mg/mL）5、75、100、125、150、175 mL置25 mL量瓶中，加5% 苯酚溶液1 mL，混勻，沿壁加入濃硫酸50 mL，加水至刻度線，混勻，40℃水浴加熱20 min，置冷水浴中冷卻至室溫。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（C）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程。結(jié)果D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品的回歸方程為A=00726x+01531（r=09998），表明D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品在0260 mg～0910 mg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，見(jiàn)圖1。

26精密度試驗(yàn)精密量取D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品溶液5 mL置25 mL容量瓶中，按制備供試品溶液操作方法，連續(xù)測(cè)定6次。結(jié)果表明，RSD為0215%，精密度符合含量測(cè)定要求，結(jié)果見(jiàn)表1。

27穩(wěn)定性試驗(yàn)分別吸取D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品溶液和供試品溶液5 mL和1 mL置25 mL容量瓶中，按制備供試品溶液操作方法，在顯色15 min后每隔10 min測(cè)定一次吸光度，結(jié)果表明D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品溶液吸光度在65min內(nèi)穩(wěn)定性良好，而樣品溶液吸光度在45 min內(nèi)基本穩(wěn)定，表明在測(cè)定時(shí)間45 min內(nèi)樣品穩(wěn)定性良好。結(jié)果見(jiàn)表2。

28重復(fù)性考察精密稱取同一份樣品6份，按制備供試品溶液操作方法，每份取1 mL，測(cè)定吸光度。結(jié)果表明：6份樣品的RSD<3%，表明本法具有較好的重復(fù)性，結(jié)果見(jiàn)表3。

29加樣回收率試驗(yàn)精密吸取已知含量的樣品溶液（8741 mg/mL）1 mL（9份），分別加入5 mL、10 mL、20 mLD-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品溶液（0052 mg/mL），按制備供試品溶液操作方法，測(cè)定每份樣品溶液吸光度，計(jì)算其平均回收率為10037%，RSD 為132%，表明本含量測(cè)定方法穩(wěn)定可靠，可用于總多糖的含量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表4。

210樣品測(cè)定取清熱潤(rùn)燥口服溶液3批（每批測(cè)定兩次，即n=2），按23項(xiàng)下方法制備供試液，取1 mL測(cè)定吸光度，并計(jì)算每mL含量，結(jié)果見(jiàn)表5。

3討論

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，精密準(zhǔn)確的加入各種試劑是關(guān)鍵，由于穩(wěn)定性不好，時(shí)間的把握也直接影響其測(cè)定的準(zhǔn)確性，故在測(cè)定時(shí)要準(zhǔn)確把握時(shí)間和試劑的加入。處方組成中的藥材含大量的多糖，如：沙參、蘆根、薏仁、麥冬、冬瓜等。而多糖具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力，促進(jìn)康復(fù)的作用。因此，選擇此類成分作為處方含量測(cè)定的控制指標(biāo)較為合理。

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