雙相躁狂患者治療前后血漿GRM—7的表達研究

榮晗　劉鐵榜　楊海晨　張建　徐丹

[摘要] 目的 觀察雙相躁狂患者血漿中GRM-7 mRNA的表達水平的改變及與雙相躁狂之間的關系。 方法 將105例雙相障礙躁狂發(fā)作患者設為患者組，100例與患者組在年齡和性別上匹配的健康志愿者設為對照組。患者組常規(guī)應用碳酸鋰治療，觀察1個月，患者組于入組時和治療1個月時、對照組于入組時，分別評定BRMS量表并收集血漿，采用實時熒光定量PCR技術檢測GRM-7 mRNA的表達水平，最后對檢測結果及BRMS評分進行統(tǒng)計分析。 結果 患者組血漿GRM-7 mRNA表達顯著低于對照組（P<0.001）；治療1個月后，患者組血漿GRM-7 mRNA的表達水平顯著升高（P<0.001）。 結論 血漿GRM-7 mRNA的表達水平和雙相障礙躁狂發(fā)作有關。

[關鍵詞] 雙相躁狂；GRM-7；病例對照研究；生物標記

[中圖分類號] R749.4 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2017）18-0035-03

Expression of plasma GRM-7 before and after treatment in patients with bipolar mania

RONG Han LIU Tiebang YANG Haichen ZHANG Jian XU Dan

Department of Psychiatry， Shenzhen Kangning Hospital， Shenzhen 518000， China

[Abstract] Objective To observe the changes of plasma GRM-7 mRNA expression in patients with bipolar mania and the relationship between the expression of GRM-7 mRNA and the bipolar mania. Methods 105 patients with bipolar disorder were defined as the patient group. 100 healthy volunteers matched to the patient group at age and sex were set as the control group. The patient group was routinely treated with lithium carbonate and was observed for one month. The BRMS scale was assessed and the plasma was collected when the patient group was at the time of enrollment and treatment for one month and when the control group was at the time of enrollment. The expression level of GRM-7 mRNA was detected by real-time fluorescence quantitative PCR. Finally， the results of the test and BRMS score were analyzed statistically. Results The plasma GRM-7 mRNA expression in the patient group was significantly lower than that in the control group（P<0.001）. After one month of medical treatment， the mRNA expression level of GRM-7 in the patient group was significantly increased（P<0.001）. Conclusion The level of plasma GRM-7 mRNA expression is associated with bipolar disorder manic episode.

[Key words] Biphasic mania； GRM-7； Case-control study； Biomarker

雙相障礙是一種以躁狂和抑郁癥狀反復或交替發(fā)作為主要臨床特征的重性精神疾病，具有高發(fā)病率和高患病率[1]。在臨床上，對雙相障礙的診斷主要依靠精神檢查，缺乏客觀的生物學指標，常出現(xiàn)誤診。因此為雙相障礙尋找客觀的生物學標記物，深入探索雙相障礙的發(fā)病機制，將有助于降低誤診率[2]，準確評估患者病情和療效。代謝性谷氨酸受體7（GRM-7）是谷氨酸受體家族中與G蛋白偶聯(lián)的一類受體，與快速興奮性突觸傳遞、神經(jīng)元的發(fā)育和死亡、突觸的可塑性等密切相關[3-6]。有研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元再生、樹突棘的生長、突觸和神經(jīng)可塑性等參與雙相障礙的發(fā)病基礎，本研究觀察雙相躁狂患者血漿中GRM-7 mRNA表達水平的改變及與雙相躁狂之間的關系。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2010年8月～2012年8月間深圳市康寧醫(yī)院門診或住院的雙相躁狂患者105例，由至少兩名副高及以上職稱的醫(yī)生進行診斷。

患者組入組標準[7]：（1）符合DSM-Ⅳ的雙相障礙躁狂發(fā)作疾病診斷標準；（2）Bech-Rafaelsen躁狂量表（BRMS）11項評分≥11分；（3）年齡18～50歲，性別不限。正常對照組入組標準[7]：以年齡、性別、民族和文化程度與患者組匹配為原則，同期在志愿的前提下選擇心身健康的正常人群為對照組，為深圳市康寧醫(yī)院的職工或志愿者?；颊呓M及對照組不符合下列任意一條均將被排除：（1）無嚴重心、腦、肝、腎疾病及其他嚴重的軀體疾病，無嚴重營養(yǎng)不良、肥胖等；（2）無內分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病，無急、慢性感染疾病；（3）至少半年內未用過免疫抑制劑及免疫增強劑，未應用電抽搐治療；（4）至少兩周內未服用抗精神病藥物及心境穩(wěn)定劑；（5）無其他精神疾病和精神發(fā)育遲滯；（6）無酒精和藥物濫用史；（7）懷孕、哺乳婦女及月經(jīng)期女性排外；（8）血常規(guī)、肝臟生化、腎臟生化、心電圖、腦電圖及體格檢查結果無明顯異常；（9）近1年內無重大生活事件。

本研究共入組雙相躁狂患者共105例，男56例，女49例，年齡18～50歲，平均（35.49±8.31）歲。本研究經(jīng)深圳市康寧醫(yī)院倫理委員會批準，所有研究對象均自愿參加并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料的收集 患者在入組時由兩名經(jīng)過培訓的副主任醫(yī)師進行BRMS的評定（Kappa=0.90）。同時收集患者組及對照組的一般人口學資料、首次發(fā)病年齡、總病程、本次病程等其他臨床資料。患者組使用藥物情況為105例患者均使用鋰鹽治療，平均使用藥物劑量為（1.0±0.2）mg，合并使用藥物為奧氮平，平均使用藥物劑量（15.0±2.4）mg?；颊呓M使用藥物的時間為1個月。

1.2.2 樣本的采集與儲存 分別于治療前和治療1個月后采集所有患者組和對照組的空腹靜脈血6 mL，經(jīng)過離心大約3000 r/min，遂收集血漿，保存于-80℃的冰箱。同時對患者組評定BRMS量表。

1.2.3 實時定量PCR（Real-time PCR） Real-time PCR檢測GRM-7的表達水平：提取各組組織總RNA，進行PCR檢測GRM-7的表達，每個樣品測3次。將加好樣品的96孔板放在熒光定量PCR儀中進行反應，反應條件如下：95 ℃ 15 min后連續(xù)45個循環(huán)，每個循環(huán)內95 ℃ 15 s、55 ℃ 30 s、72 ℃ 34 s，總反應體積20 μL。

1.3 統(tǒng)計學處理

用SPSS 13.0 for windows軟件，計量資料以（x±s）表示，數(shù)據(jù)分析采用T-test。影響因素分析采用Pearson相關分析。所有統(tǒng)計檢驗均采用雙側檢驗，檢驗水準α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組人口學資料比較

患者組依據(jù)入組標準和排除標準共入組105例，其中男56例，女49例，平均年齡（35.49±8.31）歲，平均病程（4.21±1.32）年，首次發(fā)病年齡（19.36±5.36）歲，情感障礙發(fā)作次數(shù)（2.76±0.74）次。對照組依據(jù)入組標準和排除標準共入組100例，其中男54例，女46例，平均（34.89±7.45）歲?；颊呓M和對照組間年齡和性別差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表1。

2.2患者組治療前后BRMS量表評分比較

分別在患者組治療前后進行BRMS評分，并采用配對樣本t檢驗發(fā)現(xiàn)，治療后患者組BRMS量表評分顯著低于治療前的評分（t=2014.86，P<0.0001）。見表2。

2.3 不同組別GRM-7 mRNA表達水平比較

對治療前后患者組和對照組的血漿GRM-7 mRNA表達水平進行方差分析發(fā)現(xiàn)：治療前患者組血漿GRM-7 mRNA表達水平均顯著低于對照組（P<0.001）；治療1個月后患者組的血漿GRM-7 mRNA表達水平均顯著升高（P<0.001），見圖1。

圖1 GRM-7 mRNA表達水平的比較

注：*表示與對照組比較有顯著差異，P<0.001；#表示與治療前患者組比較有顯著差異，P<0.001

3 討論

雙相障礙是一類世界范圍內影響人們生命及功能的常見、慢性、易復發(fā)的精神疾病，以反復或交替的躁狂或抑郁發(fā)作為主要臨床特征[5]。據(jù)統(tǒng)計，全球約有1 億人口飽受雙相障礙的折磨，在中國有上千萬的雙相障礙患者[6]。臨床研究表明大多數(shù)雙相障礙患者結局不良，表現(xiàn)為高復發(fā)率、殘留癥狀以及社會認知功能受損等。目前以鋰鹽等抗癲癇藥物為主導的治療方法雖對部分雙相障礙患者有效，但仍存在起效慢（數(shù)周到數(shù)月）、療效不完全、對部分患者無效、副反應明顯等問題[7]。因此更深入地了解雙相障礙的發(fā)病機制并尋找新的治療策略十分必要。

雙相障礙的發(fā)病機制十分復雜，被認為是受多個易感基因與環(huán)境因素影響下的神經(jīng)可塑性的紊亂[8]。神經(jīng)可塑性的概念包含突觸可塑性、某些腦區(qū)如海馬齒狀回神經(jīng)元再生、神經(jīng)遞質釋放的改變、軸突與樹突結構的重塑等[8]。已有研究表明microRNA可以通過復雜的對基因/蛋白的時間及空間的調節(jié)從而調節(jié)神經(jīng)可塑性[9]，提示其在雙相障礙的發(fā)病及治療機制中可能扮演了重要角色。

有研究指出microRNA-34a對應的靶蛋白GRM-7參與了軸突的生長以及神經(jīng)元再生等過程[3-4]。其中GRM-7是與G蛋白偶聯(lián)而起作用的一類受體，與快速興奮性突觸傳遞、神經(jīng)元的發(fā)育和死亡、突觸的可塑性密切相關。有研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元再生、樹突的生長、突觸和神經(jīng)可塑性以及生物節(jié)律等組成雙相障礙的發(fā)病基礎[10-12]。這些結果提示GRM-7可能參與了雙相障礙的發(fā)病。

本研究使用RT-PCR技術對被試血漿中GRM-7 mRNA的表達水平進行了檢測，發(fā)現(xiàn)患者組血漿GRM-7 mRNA表達水平均顯著低于對照組，表明雙相躁狂患者血漿GRM-7 mRNA的表達存在相應的變化，提示血漿中GRM-7的低表達與雙相障礙有關。

為進一步驗證該結論，在患者組治療1個月后再次評定BRMS，發(fā)現(xiàn)治療后BRMS得分顯著低于治療前，表明治療后患者的病情比治療前明顯好轉。同時對患者組血漿GRM-7 mRNA的表達水平檢測，發(fā)現(xiàn)治療后患者組血漿GRM-7 mRNA的表達水平顯著升高。進一步證明了血漿中GRM-7的表達與雙相躁狂的病情有關。GRM-7可能通過影響快速興奮性突觸傳遞、神經(jīng)元的發(fā)育和死亡、突觸可塑性等參與雙相躁狂的發(fā)病[13-15]，同時也說明miR-34a可能通過調節(jié)GRM-7的水平影響到突觸可塑性而參與雙相障礙的發(fā)病和治療。

但是本研究仍存在一定的局限性，其一，本研究雖然發(fā)現(xiàn)microRNA-134、microRNA-34a和雙相躁狂有關，并對microRNA-134和microRNA-34a在雙相躁狂發(fā)病中的作用作了初步假設和探索，但是對其具體的作用機制還需進一步深入研究和驗證；其二，雙相障礙的發(fā)病可能是多個通道和多個基因交互作用的結果，本研究作為對該領域的初步探索，僅從GRM-7的角度進行了分析，其完善的發(fā)病機制還需從多個領域共同探討。

總之，GRM-7的表達在雙相躁狂患者血漿中存在相應的變化，其表達水平的變化在雙相障礙中起了一定的作用，同時，躁狂患者治療后血漿GRM-7較治療前明顯升高，提示血漿GRM-7有潛力成為雙相障礙的狀態(tài)標記物，深入探討其在雙相障礙發(fā)生發(fā)展過程中的調控機制，可以為臨床雙相障礙的診斷治療提供新的思路，為新藥的研發(fā)提供參考，甚至可以通過長期監(jiān)測生物學標記來提早用藥而預防復發(fā)，然而具體的作用機制尚需進一步深入研究。

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（收稿日期：2017-04-02）