不同菌株不同生長期靈芝農(nóng)藝性狀和多糖含量變化研究*

金 鑫，李 強(qiáng)，陳祖琴，陳 誠，熊 川，李 萍，黃文麗**

（1．四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)核技術(shù)研究所，四川 成都 610066；2．四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，四川 成都 610066）

不同菌株不同生長期靈芝農(nóng)藝性狀和多糖含量變化研究*

金 鑫1，李 強(qiáng)1，陳祖琴1，陳 誠2，熊 川1，李 萍1，黃文麗1**

（1．四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)核技術(shù)研究所，四川 成都 610066；2．四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，四川 成都 610066）

分析4個(gè)靈芝菌株的農(nóng)藝性狀和不同生長期子實(shí)體內(nèi)多糖含量變化，以期獲得最佳采收期，同時(shí)為選育高產(chǎn)且多糖含量高的菌株提供參考。以SLZ30、SLZ31、SLZ41和SLZ61為試驗(yàn)材料，對(duì)其不同生長期子實(shí)體多糖含量和農(nóng)藝性狀進(jìn)行分析。綜合農(nóng)藝性狀，得出SLZ61在4個(gè)菌株中表現(xiàn)最好；4個(gè)靈芝菌株在不同生長時(shí)期，其子實(shí)體多糖含量變化趨勢(shì)表現(xiàn)一致，子實(shí)體成熟前期多糖含量逐漸升高，在子實(shí)體成熟期達(dá)到最大值，子實(shí)體成熟后期，其多糖含量下降到最低值。綜合農(nóng)藝性狀、產(chǎn)量和多糖含量，認(rèn)為子實(shí)體成熟期為最佳采收期，此時(shí)，靈芝品質(zhì)最好，多糖含量最高；若采收孢子粉則在成熟后期采收。

靈芝；不同生長期；農(nóng)藝性狀；多糖

靈芝（Ganoderma lucidum） 是擔(dān)子菌綱多孔菌科靈芝屬（Ganoderma）真菌[1]，是著名的藥用真菌，作為我國傳統(tǒng)的中藥材，最早見于《本草綱目》，自古至今在中醫(yī)藥界享有極高的美譽(yù)[2]。根據(jù)現(xiàn)代的藥理學(xué)研究，靈芝具有調(diào)節(jié)免疫，抗腫瘤，抗衰老，抗氧化，保肝護(hù)肝等作用[3]，其最主要的藥理活性物質(zhì)為靈芝多糖，靈芝多糖在靈芝的菌絲體和子實(shí)體中都存在，但在子實(shí)體生長階段，其多糖含量出現(xiàn)較大的變化，各不同生長階段其靈芝多糖活性也大不相同[4]。近年來有較多關(guān)于靈芝不同生長期其子實(shí)體內(nèi)多糖變化規(guī)律方面的研究[5-8]，但大部分只是研究了其多糖含量的變化，并沒有結(jié)合其農(nóng)藝性狀、產(chǎn)量以及多糖含量來綜合確定其最佳采收期。該研究通過段木栽培靈芝的子實(shí)體農(nóng)藝性狀、產(chǎn)量以及不同生長期子實(shí)體內(nèi)多糖含量變化來確定最佳采收期，一方面為篩選靈芝多糖高產(chǎn)菌株提供參考，另一方面指導(dǎo)菇農(nóng)根據(jù)自己需求來選擇合適的采收時(shí)期。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1．1．1 菌株來源

4個(gè)靈芝菌株來源和種名見表1。

表1 供試菌株Tab．1 Test strains

1．1．2 樣品

通過短原木大棚栽培獲得靈芝子實(shí)體，分不同時(shí)期采收靈芝子實(shí)體，靈芝不同生長期特征見表2、圖1，最后將采收的子實(shí)體完全烘干至恒重，粉碎過80目篩備用。

表2 靈芝不同生長期特征Tab．2 Characteristics of Ganoderma lucidum at different growth stages

1.2 測(cè)定方法

農(nóng)藝性狀測(cè)定：靈芝段木栽培子實(shí)體成熟后，分別測(cè)定靈芝菌蓋直徑、菌蓋厚度、菌柄長度和干產(chǎn)量。生物轉(zhuǎn)化率為靈芝子實(shí)體干產(chǎn)量除以椴木鮮重乘以100%。

圖1 靈芝子實(shí)體不同生長期Fig．1 Different growth stages of Ganoderma lucidum

多糖提取測(cè)定：稱取30 g靈芝樣品，料液比1∶60，100℃浸提1 h，浸提2次，合并濾液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再通過苯酚硫酸法測(cè)定多糖含量[9]。

2 結(jié)果分析

2.1 系統(tǒng)發(fā)育分析

將4個(gè)靈芝菌株樣品的測(cè)序結(jié)果在NCBI數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行BLAST比對(duì)，每個(gè)菌株各找3個(gè)與之對(duì)應(yīng)相似的同源序列（相似性＞97%） 3條，以樹舌靈芝（Ganoderma applanatum）作為外參，總共17個(gè)序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育分析，如圖2。

從圖2中可以看出4個(gè)菌株都屬于靈芝屬，都處于同一個(gè)大分支，SLZ41、SLZ61和 SLZ31與SLZ30在分類水平上有一定的差異。

2.2 不同菌株靈芝子實(shí)體農(nóng)藝性狀及產(chǎn)量比較

不同菌株靈芝子實(shí)體農(nóng)藝性狀及產(chǎn)量比較見表3、圖3。

從表3和圖3中可以看出，4個(gè)菌株的菌蓋直徑、菌蓋厚度和菌柄長度相互間都存在顯著差異，SLZ30、SLZ31在菌蓋形成階段，未修剪后會(huì)出現(xiàn)2個(gè)～3個(gè)分支，隨后多個(gè)菌蓋生長到一起，導(dǎo)致整個(gè)菌蓋看上去很大，但測(cè)量時(shí)只測(cè)量單個(gè)菌蓋直徑大小，SLZ30在4個(gè)菌株中性狀表現(xiàn)一般，菌柄最短，生物轉(zhuǎn)化率最低為0.78%。SLZ31單個(gè)菌蓋直徑最小，生物轉(zhuǎn)化率為1%，但該菌株出芝較快，成熟的最早，栽培中觀測(cè)到產(chǎn)孢量比其余3個(gè)菌株大。SLZ41為鹿芝，該菌株受二氧化碳濃度影響較大，二氧化碳濃度大于0.1%時(shí)，其菌蓋難以發(fā)育只形成菌柄，但本次試驗(yàn)在同一個(gè)大棚中，必須保證全部靈芝正常生長發(fā)育，菌蓋分化階段人工控制二氧化碳在0.05%左右，此時(shí)SLZ41未形成鹿角芝，菌蓋全部分化，菌蓋厚度最薄，生物轉(zhuǎn)化率也較低。SLZ61在菌蓋直徑、厚度、菌柄長度等性狀上都表現(xiàn)最好，生物轉(zhuǎn)化率最高，且該菌株出現(xiàn)連芝現(xiàn)象最少，外觀整齊，色澤較好，適合嫁接制作盆景。

圖2 基于ITS序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.2 Phylogenetic tree constructed based on ITS sequence

圖3 不同菌株靈芝子實(shí)體Fig.3 Different strains of Ganoderma lucidum fruiting body

表3 不同靈芝菌株子實(shí)體農(nóng)藝性狀及產(chǎn)量比較Tab.3 Comparison of agronomic characters and yield of different Ganoderma lucidum strains

2.3 不同靈芝菌株子實(shí)體不同生長期多糖含量

不同生長期的靈芝子實(shí)體多糖含量情況見圖4。

圖4 不同生長期的靈芝子實(shí)體多糖含量Fig．4 Polysaccharide content of Ganoderma lucidum fruit bodies in different growth stages

從圖4可以看出，在子實(shí)體成熟前期和子實(shí)體成熟期靈芝子實(shí)體的多糖含量無明顯變化，子實(shí)體成熟期多糖含量有輕微上升，但是無顯著差異。而在孢子彈射完進(jìn)入成熟后期，靈芝子實(shí)體的多糖含量大大降低。4個(gè)菌株的靈芝在3個(gè)采收期多糖含量的變化較一致。如果不采收孢子粉，靈芝子實(shí)體的最佳采收期應(yīng)該是確保產(chǎn)量的前提下在進(jìn)入成熟期時(shí)立即采收。4個(gè)菌株中子實(shí)體多糖含量相互間存在顯著差異，在子實(shí)體成熟前期，4個(gè)菌株子實(shí)體多糖含量順序?yàn)镾LZ30＞SLZ61＞SLZ41＞SLZ31，在子實(shí)體成熟期，子實(shí)體多糖含量順序?yàn)镾LZ61＞SLZ30＞SLZ41＞SLZ30，在子實(shí)體成熟后期，子實(shí)體多糖含量順序?yàn)镾LZ30＞SLZ31＞SLZ41＞SLZ61。

3 討論

此前已有較多學(xué)者對(duì)靈芝生長過程中子實(shí)體多糖含量變化進(jìn)行研究，本試驗(yàn)的結(jié)果與大部分學(xué)者研究結(jié)果相同[5，8，10-11]，即多糖含量在成熟前期到成熟期再到成熟后期呈現(xiàn)先升高后降低趨勢(shì)。但也有較多學(xué)者研究表明隨著靈芝的生長，其子實(shí)體多糖得率逐漸降低[4-5]，而張曉云[7]研究靈芝子實(shí)體在菌柄階段、子實(shí)體成熟階段和子實(shí)體彈射孢子等不同時(shí)期多糖含量變化時(shí)，發(fā)現(xiàn)多糖含量在靈芝生長過程中不斷升高，這與本試驗(yàn)結(jié)果類似，而子實(shí)體成熟期和子實(shí)體成熟后期其多糖含量不變，這一結(jié)果與本試驗(yàn)不同，造成這一不同結(jié)果有可能是由于試驗(yàn)材料靈芝菌株特性的不同而造成差異。

以前傳統(tǒng)的采收只在乎靈芝產(chǎn)量的高低，導(dǎo)致靈芝育種僅以農(nóng)藝性狀和產(chǎn)量來比較，而忽視其藥效品質(zhì)指標(biāo)。靈芝多糖是靈芝最主要藥用成分之一，其含量的高低早已作為靈芝的質(zhì)量重要評(píng)價(jià)指標(biāo)。因此，菇農(nóng)可以根據(jù)自己的不同需求進(jìn)行采收，如果不采收孢子粉，即在靈芝子實(shí)體停止生長后立即采收，不僅采收的子實(shí)體質(zhì)量最好，其多糖含量也最高。

4 結(jié)論

該研究通過分析段木栽培4個(gè)靈芝菌株的子實(shí)體農(nóng)藝性狀，綜合比較菌蓋直徑、菌蓋厚度、菌柄長度和生物轉(zhuǎn)化率4個(gè)因素影響，得出SLZ61在4個(gè)菌株中表現(xiàn)最好。4個(gè)靈芝菌株在不同生長時(shí)期，其子實(shí)體多糖含量趨勢(shì)都表現(xiàn)一致，子實(shí)體成熟前期多糖含量逐漸升高，在子實(shí)體成熟期達(dá)到最大值，隨著靈芝孢子粉完全彈射完畢，其多糖含量下降到最低值。

[1]Kirk PM,Cannon PF,Minter DW．Dictionary of the Fungi (10th ed)[M]．Suvey:CABI,2008:272．

[2]李時(shí)珍．本草綱目（第十八冊(cè)，二十八卷）[M]．北京：商務(wù)印書館，1933．

[3]林志彬．靈芝的現(xiàn)代研究[M]．北京：北京醫(yī)科大學(xué)、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1996：145-146．

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[5]付立忠，吳學(xué)謙，李明焱，等．靈芝不同生長發(fā)育期粗多糖水提物和三萜含量變化規(guī)律[J]．食用菌學(xué)報(bào)，2008，15（3）：47-50．

[6]林應(yīng)興．靈芝子實(shí)體不同生長階段多糖與三萜類物質(zhì)含量的研究[J]．亞熱帶農(nóng)業(yè)研究，2009，5（3）：152-154．

[7]張曉云，李朝謙，楊春清．不同生長期赤靈芝子實(shí)體多糖含量變化研究[J]．食用菌，2008，30（1）：10-11．

[8]韋會(huì)平，李學(xué)剛，蒲盛才，等．靈芝生長過程中靈芝多糖含量變化規(guī)律研究[J]．中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2006，34（5）：10-12．

[9]張志軍，劉建華，李淑芳，等．靈芝多糖含量的苯酚硫酸法檢測(cè)研究[J]．食品工業(yè)科技，2006（2）：193-195．

[10]陳璐．不同栽培基質(zhì)和生長期的靈芝藥效品質(zhì)特異性研究[D]．成都：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008．

[11]寶萍萍，圖力古爾，包海鷹．栽培靈芝不同生長階段多糖和三萜類化合物的含量測(cè)定[J]．菌物研究，2011，9（1）：110-113，118．

Study on Agronomic Traits and Polysaccharide Content of Ganoderma lucidum in Different Growth Stages

JIN Xin1,LI Qiang1,CHEN Zu-qin1,CHEN Cheng2,XIONG Chuan1,LI Ping1,HUANG Wen-li1
(1．Biotechnology and Nuclear Technology Research Institute,Sichuan Academy of Agricultural Sciences,Chengdu 610066, China;2．Institute of Plant Protection,Sichuan Academy of Agricultural Sciences,Chengdu 610066,China)

The agronomic traits of four Ganoderma lucidum strains and the changes of polysaccharide content in different growth stages were analyzed,in order to obtain the best harvest period,and to provide reference for breeding high yield and high polysaccharide strains．SLZ30,SLZ31,SLZ41 and SLZ61 were used as test materials to analyze the content and agronomic traits of fruiting body in different growth stages．The agronomic traits of four G.lucidum strains and the changes of polysaccharide contents in different growth stages were analyzed．The results showed that SLZ61 was the best among the four strains．The contents of polysaccharides in the four fruiting fungi were increased at different growth stages,and reached the maximum at the maturation stage of the fruiting body．The polysaccharide content of the four fruiting bodies decreased to the lowest value．The agronomic traits,yield and polysaccharide content of the fruiting bodies were considered to be the best harvesting period．At this time,the quality of G.lucidum was the best and the polysaccharide content was the highest．If the spore powder was harvested, it was harvested at the post-maturation stage．

Ganoderma lucidum;different growth periods;agronomic trait;polysaccharide

S646.9

A

1003-8310（2017）04-0041-04

10．13629/j．cnki．53-1054．2017．04．010

四川省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2016NZ0042、2016GZ0355）；無限極（中國）有限公司合作項(xiàng)目（HPG/2014/09/1091）。

金鑫（1985-），男，碩士，助理研究員，主要從事食（藥）用菌栽培以及應(yīng)用研究工作。E-mail:1535002186＠qq．com

**通信作者：黃文麗（1983-），女，博士，助理研究員，主要從事食（藥）用菌應(yīng)用研究。E-mail:27826477＠qq．com

2017-05-12