熊膽粉和豬膽粉干預(yù)脂肪肝大鼠的實(shí)驗(yàn)研究

李曄曾建偉歐余航婁云云湯錦周

（1福建醫(yī)科大學(xué)附屬龍巖第一醫(yī)院龍巖 364000；2福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究院福州 350122；3福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三人民醫(yī)院福州 350122；4福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院福州 350122）

熊膽粉和豬膽粉干預(yù)脂肪肝大鼠的實(shí)驗(yàn)研究

李曄1曾建偉2#歐余航3婁云云4湯錦周4

（1福建醫(yī)科大學(xué)附屬龍巖第一醫(yī)院龍巖 364000；2福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究院福州 350122；3福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三人民醫(yī)院福州 350122；4福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院福州 350122）

目的：探討熊膽粉和豬膽粉干預(yù)高脂飲食引起脂肪肝大鼠的差異，為替代使用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：32只SD大鼠隨機(jī)分為四組（每組8例）：空白對(duì)照組、高脂飲食模型組、熊膽粉干預(yù)組和豬膽粉干預(yù)組，分別記錄體重和肝臟重量的變化，HE染色法檢測(cè)肝臟組織的形態(tài)變化，并檢測(cè)每組血清的谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶和總膽固醇四個(gè)生化指標(biāo)分析對(duì)比肝功能的變化情況。結(jié)果：熊膽粉和豬膽粉對(duì)高脂飲食引起的大鼠體重和肝臟重量的非正常升高均有下降趨勢(shì)，但熊膽粉有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HE染色觀察熊膽粉和豬膽粉對(duì)脂肪肝大鼠肝損傷病理狀態(tài)的影響，發(fā)現(xiàn)熊膽粉能有效改善肝組織的損傷情況，而豬膽粉對(duì)脂肪肝引起的肝損傷變化沒(méi)有作用；肝功能生化指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，熊膽粉能有效降低脂肪肝引起的谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶和總膽固醇指標(biāo)的升高，而豬膽粉只對(duì)乳酸脫氫酶有影響。結(jié)論：對(duì)脂肪肝大鼠的干預(yù)效果，熊膽粉優(yōu)于豬膽粉。

脂肪肝；熊膽粉；豬膽粉；實(shí)驗(yàn)研究

脂肪肝是一種常見(jiàn)的肝功能代謝紊亂引起的肝細(xì)胞中脂質(zhì)積累過(guò)多引起的病變[1]。它正嚴(yán)重威脅人們的健康，在我國(guó)成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病[2]。中醫(yī)藥多途徑、多層次、多靶點(diǎn)的治療肝損傷的優(yōu)勢(shì)日益明顯，故值得深入研究[3～5]。熊膽作為傳統(tǒng)名貴藥材具有清熱解毒，提高免疫力、利濕、退黃、利膽、保肝、抗病毒等作用，在臨床上已經(jīng)廣泛應(yīng)用于各種肝病，主要包括慢性乙型肝炎、慢性肝病殘留黃疸、慢乙肝并膽囊炎、黃疸型肝炎、高黃疸慢性乙型肝炎等[6]。由于熊膽來(lái)源的特殊性，使得熊膽粉極為珍貴。同樣含有天然膽汁酸成分，并且來(lái)源廣泛的豬膽是否也具有治療慢性肝病的藥效作用，能否替代熊膽，有待進(jìn)一步研究。本研究以高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)脂肪肝大鼠為模型，用熊膽和豬膽對(duì)其進(jìn)行干預(yù)治療，比較兩種膽汁對(duì)慢性肝損傷的治療作用，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。現(xiàn)報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料供試樣品熊膽粉為市面上購(gòu)買(mǎi)的熊膽凍干粉，豬膽粉為豬膽汁高速減壓離心干燥得到的膽汁晶體；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和高脂飼料購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型32只6周齡清潔級(jí)SD大鼠（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和高脂飼料購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司），按體重隨機(jī)分成四組：空白對(duì)照組，模型組，熊膽粉干預(yù)組和豬膽粉干預(yù)組，每組8例。動(dòng)物自由進(jìn)食、飲水，基礎(chǔ)飼料，溫度20～24℃，濕度40%～70%[（50±5）%]，風(fēng)速0.1～0.2m/s，氣流≥28次/m in。自然光照環(huán)境中飼養(yǎng)，常規(guī)觀察1周后實(shí)驗(yàn)。造模時(shí)，除空白對(duì)照組以基礎(chǔ)飼料外，其余各組飼料以高脂飼料（豬油10%、膽固醇2%、豬膽鹽0.7%、基礎(chǔ)飼料87.3%），飼養(yǎng)6周，自由飲水。6周后脂肪肝模型制備完成[7]。從第7周起，干預(yù)組分別用熊膽粉和豬膽粉[0.05 g/（kg·d）]對(duì)造模大鼠進(jìn)行灌胃干預(yù)4周，空白對(duì)照組灌等體積的生理鹽水。每周稱(chēng)體重，4周后取材，主動(dòng)脈采血，取全肝組織。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 一般情況觀察大鼠體重稱(chēng)量，觀察不同膽粉對(duì)大鼠一般狀態(tài)的影響。

1.3.2 肝臟形態(tài)學(xué)變化取10%甲醛溶液中固定的肝組織，通過(guò)常規(guī)脫水、石蠟包埋進(jìn)行切片，后經(jīng)HE染色，光鏡下觀察肝組織病理改變。

1.3.3 生化指標(biāo)檢測(cè)全自動(dòng)生化分析儀分析大鼠血清肝生化指標(biāo)：谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶和總膽固醇。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS18.0軟件分析數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以（±s）表示，多組均數(shù)間比較采用單因素方差分析檢驗(yàn)，P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般狀態(tài)實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察實(shí)驗(yàn)全程，空白組大鼠精力充沛，始終保持常規(guī)食物攝入量，毛皮白凈光滑，尿液呈淡黃色。相比之下，模型組大鼠活動(dòng)明顯減少，同時(shí)飲食量較空白組大鼠明顯減少。此外，毛皮顏色變得油膩，暗淡，而尿液變成了暗黃色。然而，接受熊膽粉和豬膽粉干預(yù)后一般狀態(tài)有顯著提高，包括運(yùn)動(dòng)恢復(fù)，毛色不油膩，尿液顏色相對(duì)模型組較淡。

2.2 熊膽粉和豬膽粉干預(yù)后對(duì)肝損傷模型大鼠體重的影響高脂飲食的大鼠體重和肝臟重量顯著增加。用不同的膽粉藥物干預(yù)高脂飲食大鼠在體重和肝臟重量上有不同程度的改善。值得注意的是，熊膽粉干預(yù)后的模型大鼠體重和肝重都有明顯的恢復(fù)，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而豬膽粉干預(yù)的模型大鼠雖然體重和肝重都有下降，但結(jié)果并不顯著。見(jiàn)圖1，圖2。

圖1 熊膽粉和豬膽粉對(duì)脂肪肝大鼠體重的影響

圖2 熊膽粉和豬膽粉對(duì)脂肪肝大鼠肝重的影響

2.3 病理組織學(xué)結(jié)果光鏡下觀察四組大鼠肝臟病理組織學(xué)改變，空白對(duì)照組可見(jiàn)肝小葉輪廓清晰，細(xì)胞分界清，核圓，位于細(xì)胞中央，胞質(zhì)豐富，呈嗜堿性；高脂飲食模型組可見(jiàn)肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，肝板排列紊亂，呈點(diǎn)、片狀壞死，肝細(xì)胞明顯腫脹，胞質(zhì)中可看到大小不等、數(shù)量不一的圓形脂肪空泡，散在肝細(xì)胞嗜酸性變，小葉中央靜脈周?chē)醒仔约?xì)胞浸潤(rùn)，有的肝細(xì)胞質(zhì)中有紅色顆粒狀Mallory小體；熊膽粉干預(yù)組大鼠肝細(xì)胞渾濁明顯減輕，肝板排列恢復(fù)，細(xì)胞內(nèi)偶有小脂滴；豬膽粉干預(yù)組與模型組沒(méi)有顯著差別。見(jiàn)圖3。

圖3 HE染色觀察熊膽粉和豬膽粉對(duì)脂肪肝大鼠肝組織病理狀態(tài)的影響

2.4 生化測(cè)定結(jié)果與空白對(duì)照組相比，模型組大鼠血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶和總膽固醇水平明顯高于正常組（P＜0.05，P＜0.01）。與模型組比較，熊膽粉干預(yù)組四種生化指標(biāo)均有顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）；豬膽粉干預(yù)組降低乳酸脫氫酶的活力有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對(duì)谷草轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶的活力影響有下降的趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），同時(shí)，對(duì)總膽固醇含量未起到抑制作用。見(jiàn)表1。

表1 熊膽和豬膽對(duì)脂肪肝大鼠肝生化指標(biāo)的影響（±s）

表1 熊膽和豬膽對(duì)脂肪肝大鼠肝生化指標(biāo)的影響（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別谷草轉(zhuǎn)氨酶（U/L）堿性磷酸酶（U/L）乳酸脫氫酶（U/L）總膽固醇（mmol/L）空白對(duì)照組模型組熊膽粉干預(yù)組豬膽粉干預(yù)組57.88±8.75 84.23±11.06##68.19±11.93*80.49±12.66 132.25±17.43 169.13±33.83#159.00±17.71*167.38±35.27 229.18±38.45 290.64±33.58##212.28±60.59**249.11±58.70*1.36±0.12 1.95±0.19#1.78±0.29*2.21±0.30

3 討論

在中醫(yī)臨床實(shí)踐中，動(dòng)物膽粉常用于中藥治療各種慢性肝病。然而，對(duì)動(dòng)物膽粉療效對(duì)比的研究甚少。目前的研究表明，在高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠脂肪肝模型中，不同膽汁粉對(duì)脂肪肝有不同的生物效應(yīng)。熊膽粉作為一種名貴動(dòng)物類(lèi)中藥，具有清熱解毒、息風(fēng)止痙、清肝明目的功效，現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)熊膽粉所含的膽汁酸鹽能促進(jìn)脂肪、類(lèi)脂質(zhì)及脂溶性維生素的消化吸收，因此，熊膽粉在控制脂肪肝大鼠體重、肝重、肝臟病理狀態(tài)及肝生化指標(biāo)上均有顯著性的效果；豬膽粉對(duì)高脂模型大鼠的整體變化有降低趨勢(shì)，但效果不顯著。這種結(jié)果可能是由于豬膽粉所含的成分與熊膽粉不同所致。特別是熊膽粉不僅可以抑制高脂飲食引起的體重和肝臟重量的增加，而且還大大減輕肝組織中炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和脂質(zhì)積累。這為臨床動(dòng)物膽粉的選擇使用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1]Wang XH,Li CY,M uhammad I,et al.Fatty acid composition in serum correlates with that in the liver and non-alcoholic fatty liver disease activity scores in mice fed a high-fat diet[J].Environmental Toxicology&Pharmacology,2016,44:140-150

[2]Lee HS,Nam Y,Chung YH,et al.Beneficial effects of phosphatidylcholine on high-fatdiet-induced obesity,hyperlipidemia and fatty liver inmice[J].Life Sciences,2015,18(10):1095

[3]Gordaliza M.Natural products as leads to anticancer drugs[J].Clin TranslOncol,2007,9(12):767-776

[4]Ji HF,Li XJ,Zhang HY.Natural products and drug discovery.Can thousandsof yearsof ancientmedicalknow ledge lead us to new and powerfuldrug combinations in the fightagainst cancerand dementia [J]?EMBORep,2009,10(3):194-200

[5]徐益語(yǔ),于爾辛.以片仔癀為主治療中晚期肝癌42例臨床分析[J].上海中醫(yī)藥雜志,1994(12):4-5

[6]Li S,Tan HY,Wang N,et al.Substitutes for Bear Bile for the Treatment of Liver Diseases:Research Progress and Future Perspective[J].Evidence-based Comp lementary and A lternative M edicine,2016,17:1-10

[7]張偉,巴圖得力根,韓志強(qiáng),等.高脂飲食致大鼠脂肪肝實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥,2015,24(15):19-20

R285.5

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10.13638/j.issn.1671-4040.2017.04.101

2017-03-05）

#通訊作者：曾建偉，E-mail：zjw tcm@qq.com