手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法在ABO、RhD血型抗原鑒定中的應(yīng)用效果

鐘勝英

（廣東省興寧市人民醫(yī)院興寧 514500）

手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法在ABO、RhD血型抗原鑒定中的應(yīng)用效果

鐘勝英

（廣東省興寧市人民醫(yī)院興寧 514500）

目的：觀察手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法在ABO、RhD血型抗原鑒定中的應(yīng)用效果。方法：選擇2015年1月～2016年12月在我院健康體檢者1 059例作為研究對(duì)象，分別采取手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法和常規(guī)試管法進(jìn)行ABO、RhD血型抗原鑒定，對(duì)這兩種檢驗(yàn)方法的血型抗原檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法與常規(guī)試管法的血型檢驗(yàn)方法對(duì)體檢者ABO、RhD血型抗原檢驗(yàn)結(jié)果符合率為100%，兩種方法比較，檢驗(yàn)結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：在血型檢驗(yàn)過程中，手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法與試管法的檢驗(yàn)結(jié)果無明顯差異，但手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法相對(duì)于試管法具有操作方便、結(jié)果判斷清晰、靈敏度更高的優(yōu)勢，臨床價(jià)值顯著。

血型；抗原鑒定；手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法；試管法

血型是一種人體遺傳性狀，是人體各種細(xì)胞、各種體液成分的抗原抗體差異。研究證實(shí)，血型是受到獨(dú)立的遺傳基因控制，經(jīng)若干相互關(guān)聯(lián)的抗原抗體組成的體系[1]。ABO血型的鑒定主要是利用紅細(xì)胞上是否存在A、B抗原進(jìn)行檢測，并對(duì)血漿中是否存在抗A、抗B抗體進(jìn)行檢測。人體血液中除常見的ABO血型外還存在Rh等特殊血型，臨床鑒定過程中應(yīng)引起注意[2]。本次研究主要對(duì)手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法在ABO、RhD血型抗原鑒定中的應(yīng)用效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，并對(duì)鑒定結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析。現(xiàn)報(bào)告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2015年1月～2016年12月在我院健康體檢者1 059例作為研究對(duì)象，分別采取手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法和常規(guī)試管法進(jìn)行ABO、RhD血型抗原鑒定。男587例，女472例，年齡12～67歲，平均（32.2±4.5）歲。所有受檢者均未服用會(huì)對(duì)檢測結(jié)果產(chǎn)生影響的藥物，無明顯影響檢測結(jié)果的疾病，不在哺乳期、妊娠期，所有受試者均自愿接受本次檢測，并簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 常規(guī)試管法檢測在一支預(yù)先標(biāo)記好的試管中加入1滴抗D試劑，而后加入1滴濃度為2%～5%的被檢紅細(xì)胞懸液，混勻后進(jìn)行離心處理，離心條件為1 000 r/min，離心時(shí)間為1 min。經(jīng)肉眼對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀察，試管完全凝集后，液體清亮，底部觀察到紅細(xì)胞凝塊，管底細(xì)胞呈現(xiàn)出明顯的花邊狀，輕彈試管后，凝塊不散，完全不凝的液面清亮，血紅細(xì)胞在試管底部均勻沉積，邊緣比較整齊，手指輕彈試管，紅細(xì)胞立即上升，變成均勻懸液。對(duì)輕微凝集的試管，必須將液體轉(zhuǎn)到載玻片上，進(jìn)行鏡檢，最終做出結(jié)果判定。若是凝集結(jié)果顯示出被檢紅細(xì)胞上存在D抗原則RhD陽性，沒有發(fā)生凝集的呈現(xiàn)為RhD陰性。ABO血型鑒定以IgM類特異性血型抗體與紅細(xì)胞膜上特異性抗原結(jié)合會(huì)出現(xiàn)凝集反應(yīng)的原理為依據(jù)進(jìn)行判斷。

1.2.2 手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法將采集好的血液標(biāo)本，進(jìn)行常規(guī)的質(zhì)量檢測后，采集血液量為5 ml，分成3份，對(duì)標(biāo)本展開血清、紅細(xì)胞分離，制備0.8%～1%的紅細(xì)胞懸液，取50 μl加入抗A、抗B、抗O微柱凝膠檢測試管中，經(jīng)2級(jí)離心法離心處理2 min后，加速離心3 min。紅細(xì)胞發(fā)生凝集，在離心后留在微柱表面的結(jié)果為陽性，紅細(xì)胞下沉在微柱底部的結(jié)果為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法與常規(guī)試管法的血型檢驗(yàn)方法對(duì)體檢者ABO、RhD血型抗原檢驗(yàn)結(jié)果的符合率為100%，兩種方法比較，檢驗(yàn)結(jié)果無明顯差異（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組檢測結(jié)果統(tǒng)計(jì)[例（%）]

3 討論

血型檢驗(yàn)在臨床工作中具有十分重要的臨床意義，只有在保證血型配型后，才能夠確保輸入的血液不會(huì)發(fā)生凝集的情況。血型檢驗(yàn)對(duì)于產(chǎn)前檢查也具有十分重要的意義，雙方ABO血型不合或者是Rh血型不合，均會(huì)造成新生兒、胎兒溶血的發(fā)生，進(jìn)而造成死胎、死產(chǎn)、新生兒死亡的諸多不良妊娠結(jié)局[3]。因此，臨床上所有疾病的搶救輸血前，均必須開展血型檢查[4]。ABO血型屬于輸血、器官移植過程中所應(yīng)用到的一種非常重要的血型系統(tǒng)，確保受血者與供血者之間的ABO血型正確，是有效保證臨床輸血安全的一個(gè)非常重要的前提，也是基本原則。如果受血者或供血者二者中一方的ABO血型發(fā)生誤定，失誤的輸注了異型血，發(fā)生嚴(yán)重溶血性輸血反應(yīng)的可能性就會(huì)大大增加，會(huì)對(duì)該患者的生命安全構(gòu)成嚴(yán)重威脅。在發(fā)現(xiàn)ABO的正反定型存在不符的情況下，如何能夠迅速準(zhǔn)確地找到原因，并及時(shí)正確的對(duì)血型進(jìn)行鑒定的臨床意義重大，應(yīng)引起人們的重視。

試管法血型鑒定操作簡單，對(duì)儀器要求不高，廣泛應(yīng)用于血型的初次鑒定。在試驗(yàn)操作時(shí)，需清洗干凈試管，以避免發(fā)生假凝集現(xiàn)象。通常多先加血清后加紅細(xì)胞懸液，以方便核實(shí)是否漏加血清。試驗(yàn)對(duì)離心時(shí)間及離心速度要求較高，觀察結(jié)果時(shí)需在光線充足的背景下觀察凝集程度，觀察后立即記錄觀察結(jié)果。但臨床檢測中，常出現(xiàn)試劑不標(biāo)準(zhǔn)、失效甚至污染等情況。操作者因粗心加錯(cuò)樣本或試劑，離心速度及離心時(shí)間不恰當(dāng)，細(xì)胞及血清比例不合適，結(jié)果判斷失誤等人為因素而導(dǎo)致出現(xiàn)鑒定錯(cuò)誤。加之某些引起血型抗原減弱的疾病，如白血病等，可導(dǎo)致患者血型抗原含量少不易被檢測出。部分受檢者抗體效價(jià)較低，也不易檢測出[5]。

近年來，研究顯示手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法在血型檢驗(yàn)中發(fā)揮了重要的作用[6]。手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法的工作原理：將凝膠作為微柱凝膠卡的填充物，將離心技術(shù)、凝膠分子篩過濾技術(shù)、血型血清學(xué)的抗原抗體反應(yīng)特異性等技術(shù)相結(jié)合，在出現(xiàn)抗原抗體反應(yīng)后，紅細(xì)胞會(huì)發(fā)生凝集；在經(jīng)離心處理后，無法通過凝膠間隙，進(jìn)而在凝膠上層和分散的凝膠中滯留，此時(shí)可認(rèn)定結(jié)果為陽性，反之結(jié)果為陰性[7]。針對(duì)成年個(gè)體而言，紅細(xì)胞上A抗原、B抗原與血漿中抗A、抗B抗體存在對(duì)應(yīng)關(guān)系。其特異性表現(xiàn)在紅細(xì)胞上缺乏A抗原、B抗原，血漿中存在與所缺乏抗原對(duì)應(yīng)的強(qiáng)反應(yīng)性抗體，如紅細(xì)胞上缺乏A抗原，能夠?qū)ρ獫{中存在抗A抗體進(jìn)行預(yù)測。

本研究對(duì)手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法在ABO、RhD血型抗原鑒定中的應(yīng)用效果進(jìn)行了評(píng)價(jià)分析，選擇1 059名健康體檢者分別采取手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法和常規(guī)試管法進(jìn)行ABO、RhD血型抗原鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法與采用常規(guī)試管法對(duì)ABO、RhD血型抗原檢驗(yàn)結(jié)果的符合率為100%，兩種方法比較，檢驗(yàn)結(jié)果無明顯差異（P＞0.05）。由此證實(shí)，在血型檢驗(yàn)過程中，手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法與試管法的檢驗(yàn)結(jié)果無明顯差異，并且手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法相對(duì)于試管法具有操作方便、結(jié)果判斷更清晰、靈敏度更高等優(yōu)勢，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

[1]李健,劉喜龍,譚為,等.手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法在ABO、RhD血型抗原鑒定中的應(yīng)用[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2016,22(10):27-28

[2]張茜,陳黎輝.全自動(dòng)微柱凝膠技術(shù)在ABO、RhD血型鑒定中的應(yīng)用分析[J].實(shí)用醫(yī)藥雜志,2016,33(9):810-811

[3]梁曉林,王桂君,王仲泉,等.老年人ABO血型正反定不一致37例分析[J].實(shí)用老年醫(yī)學(xué),2012,26(4):346

[4]吳濤,張長虹,周俊,等.1012名新生兒ABO及Rh血型鑒定結(jié)果分析[J].中國輸血雜志,2010,23(7):500-501

[5]劉婷.試管法與戴安娜卡檢測法在血型鑒定中的應(yīng)用比較[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)刊,2012,14(7):1232-1233

[6]武峰,劉亞玲.微柱凝膠技術(shù)在血型免疫學(xué)相關(guān)檢測中的應(yīng)用進(jìn)展[J].臨床血液學(xué)雜志,2008,21(1):101-104

[7]王生忠,王佑清,周本霞,等.微柱凝膠免疫檢測技術(shù)在新生兒溶血病檢測中的應(yīng)用[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2014,35(10):1366,1373

The Identification Effect of Manual Microcolumn Gel Immunoassay in ABO,RhD Blood Antigen

ZHONG Sheng-ying
(The People's Hospital of Xingning City,Guangdong,Xingning514500)

Objective:To evaluate the identification effect of manual microcolumn gel immunoassay in ABO,RhD blood antigen. Methods:1 059 Cases of healthy population in our hospital were selected from January 2015 to December 2016 as the research object, were respectively take test manual microcolumn gel immunoassay and routine tube method in the identification of ABO,RhD blood antigen,the result of two methods were statistically analyzed.Results:The coincidence rate of blood identification method of the two methods were 100%for the ABO and RhD blood antigen,and there was of no significant difference between the two methods(P＞0.05). Conclusion:In the blood identification,there were of no significant difference between the manual microcolumn gel immunoassay method and the routine tube method,and the manual microcolumn gel immunoassay method has the advantages of convenient operation,the result is more clear and more sensitive,has significant clinical value,worthy of attention and promotion.

Blood type；Antigen identification;Manual microcolumn gel immunoassay method;Tube method

R466.11

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2017.05.002

2017-03-15）