山茱萸總萜的降糖作用途徑研究

范思思，朱晶晶，徐登球，謝楊慧，王長(zhǎng)玲，王 華，江振洲，樓鳳昌，王 濤

(1.中國(guó)藥科大學(xué)新藥篩選重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210009； 2. 江蘇吳中蘇藥醫(yī)藥開發(fā)有限責(zé)任公司，江蘇 南京 210009； 3. 廣州品競(jìng)生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司，廣東 廣州 510000)

山茱萸總萜的降糖作用途徑研究

范思思1，朱晶晶2，徐登球1，謝楊慧1，王長(zhǎng)玲1，王 華3，江振洲1，樓鳳昌2，王 濤1

(1.中國(guó)藥科大學(xué)新藥篩選重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210009； 2. 江蘇吳中蘇藥醫(yī)藥開發(fā)有限責(zé)任公司，江蘇 南京 210009； 3. 廣州品競(jìng)生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司，廣東 廣州 510000)

目的 從胰島素依賴、α-葡萄糖苷酶抑制、胰島素增敏3個(gè)方面考察山茱萸總萜(TCF)的降血糖作用途徑。方法 尾靜脈注射鏈脲佐菌素(streptozocin，STZ，50 mg·kg-1)建立SD大鼠胰島素缺乏糖尿病模型，分為正常組、模型組、二甲雙胍組0.1 g·kg-1、參芪降糖顆粒組1.0 g·kg-1及TCF高、中、低3個(gè)劑量組(0.10、0.05、0.025 g·kg-1)灌胃(ig)給藥4周。每周測(cè)其體重及血糖，4周后采血測(cè)糖化血紅蛋白(HbA1c)、糖化血清蛋白(GSP)；選擇正常ICR小鼠，分為正常組、二甲雙胍組0.2 g·kg-1、拜糖蘋組0.1 g·kg-1、參芪降糖顆粒組1.5 g·kg-1、TCF高、中、低3個(gè)劑量組(0.20、0.10、0.05 g·kg-1)。給藥10 d后進(jìn)行腹腔注射葡萄糖(2.5 g·kg-1)或灌胃淀粉(3.0 g·kg-1)小鼠糖耐量實(shí)驗(yàn)；選擇正常SD大鼠，分為正常組、羅格列酮組0.02 g·kg-1、格列吡嗪組0.02 g·kg-1、TCF高、中、低3個(gè)劑量組(0.10、0.05、0.025g·kg-1)，給藥7 d后進(jìn)行腹腔注射葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)(IPGTT)，并測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)胰島素水平。 結(jié)果 (1)TCF高劑量組可明顯降低STZ模型大鼠HbA1c(P<0.05)、GSP(P<0.05)水平；(2)TCF對(duì)ICR小鼠的葡萄糖耐量和淀粉糖耐量也有明顯改善(P<0.05)；(3)TCF高劑量組可明顯降低1 h內(nèi)血糖水平和血清胰島素水平(P<0.05)。結(jié)論 TCF在抑制葡萄糖體內(nèi)吸收、促進(jìn)葡萄糖利用等方面具有較明顯的作用，可通過(guò)非胰島素依賴途徑發(fā)揮降糖作用，是否具有α-葡萄糖苷酶抑制、胰島素增敏作用有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

山茱萸總萜；糖尿??；胰島素；葡萄糖耐量；α-葡萄糖苷酶；鏈脲佐菌素

中藥山茱萸為山茱萸科植物山茱萸CornusofficinalisSieb.et Zucc.的干燥成熟果實(shí)，其具有多種生物活性，如免疫調(diào)節(jié)[1]、降血糖[2]、抗心律失常[3]。本實(shí)驗(yàn)中所用的山茱萸總萜(terpenes fromCornusofficinalis，TCF)由中藥山茱萸經(jīng)乙醇提取、大孔樹脂純化所得。本課題組在前期研究中，證明TCF對(duì)KKay小鼠、db/db小鼠均具有明顯的降糖作用[4-5]，尤其在中度2型糖尿病中降血糖程度更好，但其降糖途徑尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立STZ誘導(dǎo)SD大鼠胰島素缺乏糖尿病模型，選用正常ICR小鼠和SD大鼠，考察TCF對(duì)葡萄糖體內(nèi)吸收、利用的影響，以及降糖作用的可能途徑，為臨床使用TCF治療糖尿病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 藥品與試劑 山茱萸總萜(每克相當(dāng)于43.5 g原藥材)，批號(hào)：110309，由江蘇吳中蘇藥醫(yī)藥開發(fā)有限公司提供；鹽酸二甲雙胍片，批號(hào)：20101212，由北京中惠藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；參芪降糖顆粒，批號(hào)：1011712，由魯南厚普制藥有限公司生產(chǎn)；阿卡波糖片(拜糖蘋)，批號(hào)：124357，由拜耳醫(yī)藥保健有限公司(中國(guó)北京)生產(chǎn)；羅格列酮片(愛能)，批號(hào)：100506，由成都恒瑞制藥有限公司生產(chǎn)；格列吡嗪片，批號(hào)：A2110F03，由購(gòu)于海南贊邦制藥有限公司生產(chǎn)；葡萄糖，批號(hào)：080708，由廣西梧州制藥(集團(tuán))股份有限公司生產(chǎn)；鏈脲佐菌素(STZ，SB0130)，批號(hào)：MC0304B0511M，由生工生物(上海)有限公司生產(chǎn)；葡萄糖、糖化血清蛋白、糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑盒，均由威特曼生物科技(南京)有限公司生產(chǎn)；小鼠胰島素(Ins)檢測(cè)試劑盒(ELISA法)，由上海依科賽生物制品有限公司生產(chǎn)。

1.2 動(dòng)物 SPF級(jí)SD大鼠，體質(zhì)量(165±15)g；SPF級(jí)ICR小鼠，體質(zhì)量(20±2)g，均160只，♀♂各半，均由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)為SYXK(滬)2013-0016。動(dòng)物均飼養(yǎng)于使用型屏障系統(tǒng)內(nèi)[動(dòng)物設(shè)施使用許可證號(hào)：SYXK(蘇)2010-0004]，空氣潔凈度10 000級(jí)，氣流速度0.1～0.2 m·s-1，環(huán)境壓差20～50 Pa，溫度(20～25) ℃，濕度40%～70%，氨濃度≤14 mg·m-3，換氣10～20次/h，動(dòng)物照度15～20 lux，工作照度150～300 lux，噪音≤60 dB，晝夜明暗交替時(shí)間12 h/12 h，♀♂分開飼養(yǎng)，大鼠、小鼠每籠均5只。

1.3 儀器 FEJ-200電子天平(0.1～200 g)，福州富日衡之寶電子有限公司；BS210S 精密電子天平(0.1 mg～10 g)，德國(guó)賽多利斯(Sartorius)；TDL80-2B臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；強(qiáng)生穩(wěn)豪ONE TOUCH Ultra血糖儀及血糖試紙、Safire2多功能酶標(biāo)儀，瑞士TECAN公司。

2 方法

2.1 劑量設(shè)置 二甲雙胍(Met)：給予SD大鼠0.1 g·kg-1，給予ICR小鼠0.2g·kg-1；拜糖蘋(Acar)0.10 g·kg-1；格列吡嗪(Glipizide)0.02 g·kg-1；羅格列酮(Rosiglitazone)0.02 g·kg-1；參芪降糖顆粒(根據(jù)體表面積換算人的最大使用量)：給予SD大鼠1.0g·kg-1，ICR小鼠1.5 g·kg-1；TCF：給予SD大鼠高、中、低劑量0.10、0.05、0.025 g·kg-1；給予ICR小鼠高、中、低劑量0.20、0.10、0.05 g·kg-1。

2.2 分組 SD大鼠適應(yīng)飼養(yǎng)1周后，禁食16 h(過(guò)夜禁食，不禁水)后，尾靜脈注射STZ 50 mg·kg-1，72 h后剪尾采血，采用血糖試紙測(cè)定血糖值，以血糖>12.0 mmol·L-1者為糖尿病模型大鼠。血糖值低于12.0 mmol·L-1者同法追加注射STZ 35 mg·kg-1。隨機(jī)選10只健康SD大鼠為正常對(duì)照組(control，CON)。選取60只糖尿病造模成功的大鼠，分成6組，每組10只，一組設(shè)為模型組(Model)，其余5組分別給予二甲雙胍(Met)、參芪降糖顆粒(Shenqi)、TCF高、中、低劑量。

另選60只健康SD大鼠，分成6組，每組10只，一組設(shè)為正常對(duì)照組(control, CON)，其余5組分別給予格列吡嗪、羅格列酮、TCF高、中、低劑量。

選擇120只正常ICR小鼠，分成7組，一組設(shè)為正常對(duì)照組(control, CON)，其余6組給予二甲雙胍、拜糖蘋、參芪降糖顆粒，TCF高、中、低劑量。除二甲雙胍組和拜糖蘋組每組10只外，其余各組均20只。

所有組別均♀♂各半，正常對(duì)照組和模型組以0.5%CMC-Na灌胃，受試藥物組按上述劑量設(shè)置，采用0.5%CMC-Na研磨配制所需濃度藥液，均按10 mL·kg-1等體積灌胃給藥。將STZ誘導(dǎo)的SD大鼠糖尿病模型組別每天上午、下午各灌胃給藥1次，連續(xù)給藥4周；正常ICR小鼠及正常SD大鼠組每天灌胃給藥1次，連續(xù)給藥7 d。

2.3 檢測(cè)指標(biāo)

2.3.1 STZ誘導(dǎo)SD大鼠糖尿病模型指標(biāo)測(cè)定 每次給藥前觀察動(dòng)物毛色、排便、排尿、自發(fā)活動(dòng)等一般狀況；給藥前及給藥期間每周各測(cè)定1次體重和空腹血糖，上午禁食2 h后，剪尾采血，用血糖試紙測(cè)定血糖；4周給藥試驗(yàn)完畢，大鼠眼眶采血，肝素抗凝，取全血檢測(cè)HbA1c，其余血液3500 r·min-1離心15 min，分離血清，測(cè)定GSP。

2.3.2 正常ICR小鼠的血糖和糖耐量測(cè)定 血糖：各組小鼠按上述方案連續(xù)給藥7 d，除拜糖蘋組外，其余組末次給藥后0.5、1、2、4 h后，每組10只小鼠(♀♂各半)剪尾采血，血糖試紙測(cè)定血糖值； 糖耐量：各組小鼠按上述方案連續(xù)給藥10 d(血糖測(cè)定實(shí)驗(yàn)后繼續(xù)給藥3 d)，末次給藥前禁食5 h，進(jìn)行ip葡萄糖(2.5 g·kg-1)或ig淀粉(3.0 g·kg-1)小鼠糖耐量實(shí)驗(yàn)。其中葡萄糖耐量測(cè)定選取二甲雙胍組，除拜糖蘋組外的其他組各1/2動(dòng)物；余下的動(dòng)物用于進(jìn)行淀粉糖耐量測(cè)定。測(cè)定給藥后0、0.5、1、2 h時(shí)的血糖，根據(jù)血糖值繪制血糖-時(shí)間曲線，參考文獻(xiàn)方法[6]，按以下公式求算各組血糖-時(shí)間曲線下面積：AUC/mmol·h·L-1=0.25×BG0 h+0.5×BG0.5 h+0.75×BG1.0 h+0.5×BG2.0 h。

2.3.3 正常SD大鼠的糖耐量及胰島素測(cè)定 連續(xù)給藥7 d后，末次給藥前禁食5 h，各組大鼠ig給藥后分別ip葡萄糖2.5 g·kg-1，給藥后于0、0.5、1、2 h，剪尾采血，采用血糖試紙測(cè)定血糖含量，繪制糖耐量曲線；此外各時(shí)間點(diǎn)分別留取部分血樣，離心分離血清，采用ELISA試劑盒測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)胰島素水平。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)STZ誘導(dǎo)SD大鼠糖尿病模型的影響

3.1.1 一般狀況觀察結(jié)果 與正常對(duì)照動(dòng)物相比，STZ造模大鼠表現(xiàn)為明顯的多飲、多尿，體重明顯下降，大都出現(xiàn)精神萎靡，活動(dòng)減少癥狀。

3.1.2 體重 與正常對(duì)照動(dòng)物相比，STZ模型大鼠自造模第2周起直至4周給藥完畢，大鼠體重明顯下降(P<0.01)，各受試藥物組對(duì)STZ模型大鼠體重下降趨勢(shì)減緩，但均未見明顯影響，見Tab 1。

3.1.3 空腹血糖水平 與正常對(duì)照動(dòng)物相比，STZ模型大鼠自造模1周起，血糖水平即明顯升高(P<0.01)，二甲雙胍0.10 g·kg-1可明顯降低STZ模型大鼠血糖水平(P<0.01，P<0.05)，TCF高劑量組對(duì)STZ模型大鼠高血糖水平也有部分改善作用，其中給藥2～3周較為明顯(P<0.05)。參芪降糖顆粒1.0 g·kg-1對(duì)STZ模型大鼠高血糖水平僅有部分改善作用，未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)明顯差異，見Tab 2。

3.1.4 對(duì)STZ模型大鼠HbA1c、GSP的影響 與正常對(duì)照動(dòng)物相比，STZ模型大鼠HbA1c、GSP明顯升高(P<0.01)，二甲雙胍0.1 g·kg-1可明顯降低STZ模型大鼠HbA1c(P<0.05)、GSP(P<0.05)水平，TCF 0.10 g·kg-1可明顯降低STZ模型大鼠HbA1c(P<0.05)、GSP(P<0.05)水平，其余各治療組對(duì)HbA1c、GSP未見明顯影響，見Fig 1。

3.2 對(duì)ICR小鼠血糖及糖耐量的影響

3.2.1 血糖水平 各組連續(xù)給藥7 d，末次給藥后，二甲雙胍0.2g·kg-1可明顯降低2 h內(nèi)的血糖水平(P<0.01)，參芪降糖顆粒1.5g·kg-1和TCF高劑量組0.5、1 h血糖水平也有明顯降低(P<0.05)，但2 h和4 h無(wú)明顯影響。TCF中、低劑量組給藥4 h內(nèi)對(duì)正常小鼠血糖影響較小，見Tab 3。

3.2.2 對(duì)ICR小鼠的糖耐量實(shí)驗(yàn)

3.2.2.1 TCF對(duì)ICR小鼠腹腔注射葡萄糖耐量的影響 與對(duì)照組相比，二甲雙胍組和參芪降糖顆粒組明顯降低ICR小鼠注射葡萄糖2 h內(nèi)的血糖水平(P<0.01)，其中二甲雙胍降糖作用更明顯。TCF高、低劑量組注射葡萄糖2 h內(nèi)的血糖水平均明顯降低(P<0.01)，見Fig 2A。

Fig 1 Effects of TCF on HbA1c, GSP of STZ - induced diabetic rats(±s,n=10) **P<0.01 vs control；#P<0.05 vs model

Tab 1 Effects of TCF on body weight (g) of STZ - induced diabetic rats(±s，n=10)

Control:SD rats; Model: STZ-induced diabetic rats; Met: STZ-induced diabetic rats treated with metformin 0.1 g·kg-1; Shenqi : STZ-induced diabetic rats treated with Shenqi 1.0 g·kg-1; TCF -H: STZ-induced diabetic rats treated with TCF 0.10 g·kg-1; TCF-M: STZ-induced diabetic rats treated with TCF 0.05 g·kg-1; TCF-L: STZ-induced diabetic rats treated with TCF 0.025 g·kg-1.**P<0.01vscontrol

Tab 2 Effects of TCF on blood glucose(mmol·L-1) in STZ-induced diabetic rats(±s,n=10)

**P<0.01vscontrol；#P<0.05，##P<0.01vsmodel

Tab 3 Effects of TCF on blood glucose(mmol·L-1 ) in ICR mice(±s,n=10 )

CON: ICR mice; Met: ICR mice treated with metformin 0.2 g·kg-1; Shenqi: ICR mice treated with Shenqi 1.5 g·kg-1; TCF-H: ICR mice treated with TCF 0.20 g·kg-1; TCF-M: ICR mice treated with TCF 0.10 g·kg-1; TCF-L: ICR mice treated with TCF 0.05 g·kg-1.*P<0.05,**P<0.01vscontrol

3.2.2.2 TCF對(duì)ICR小鼠灌胃淀粉糖耐量影響 與對(duì)照組相比，拜糖蘋組明顯降低ICR小鼠灌胃淀粉2 h內(nèi)的血糖水平(P<0.01)，參芪降糖顆粒組與TCF高、中劑量組灌胃淀粉2 h內(nèi)的血糖水平均明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，見Fig 2B。

Fig 2 Effects of TCF on area under curve (AUC) of blood glucose-time curve of ICR mice(±s,n=10)

A: Glucose tolerance test; B: Gavage starch tolerance. Acar:ICR mice treated with acarbose at 0.10 g·kg-1.*P<0.05,**P<0.01vscontrol

3.3 對(duì)SD大鼠糖耐量及胰島素釋放的影響

3.3.1 對(duì)腹腔注射葡萄糖后血糖水平的影響 與對(duì)照組相比，格列吡嗪組可降低SD大鼠腹腔注射葡萄糖后2 h內(nèi)的血糖水平,但未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)明顯差異。羅格列酮組與TCF高、中劑量組注射葡萄糖2 h內(nèi)的血糖水平均明顯降低(P<0.01)，見Fig 3。

Fig 3 Effects of TCF on AUC of blood glucose-time curve of SD rats(±s,n=10)

**P<0.01vscontrol

3.3.2 對(duì)腹腔注射葡萄糖后血清胰島素水平的影響 與對(duì)照組相比，羅格列酮0.02 g·kg-1可明顯降低大鼠腹腔注射葡萄糖后0.5、1 h的血清胰島素水平(P<0.05)，格列吡嗪0.02 g·kg-1可明顯升高0.5 h血清胰島素水平(P<0.05)，1、2 h無(wú)明顯影響。TCF高劑量組可明顯降低0.5、1 h時(shí)間點(diǎn)血清胰島素水平(P<0.05)，2 h未見明顯影響，TCF中、低劑量組對(duì)2 h內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)血清胰島素水平均未見明顯影響，見Tab 4。

Tab 4 Effects of TCF on serum insulin(μg·L-1) of SD mice(±s,n=10)

CON: SD rats; Glipizide: SD rats treated with glipizide 0.02g·kg-1; Rosiglitazone: SD rats treated with rosiglitazone 0.02g·kg-1; TCF-H: SD rats treated with TCF 0.10 g·kg-1; TCF-M: SD rats treated with TCF 0.05 g·kg-1; TCF-L: SD rats treated with TCF 0.025 g·kg-1.*P<0.05vscontrol

4 討論

有研究表明山茱萸提取物能夠降低STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠血糖、血脂，預(yù)防糖尿病性腎病，是糖尿病及其并發(fā)癥的潛在治療劑[7]。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，TCF主要單體成分降血糖相關(guān)作用的分子機(jī)制可能涉及以下幾部分：(1)抑制α-葡萄糖苷酶[8]，減少糖類吸收，抑制餐后高血糖；(2)抑制糖原磷酸化酶[9]，減少葡萄糖動(dòng)員；(3)通過(guò)抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)，刺激葡萄糖的吸收，增強(qiáng)胰島素受體磷酸化[10]。

考慮到TCF由多種天然成分組成，且中藥成分大都具有多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)，因此，闡明其復(fù)雜的分子機(jī)制具有一定的難度和局限性。為此，在文獻(xiàn)報(bào)道和已有作用機(jī)制研究基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)在研究方案設(shè)計(jì)時(shí)擬通過(guò)結(jié)合不同動(dòng)物模型和陽(yáng)性參比藥物的藥效作用綜合分析，試圖從以下幾個(gè)方面進(jìn)一步明確本品抗糖尿病作用途徑和特點(diǎn)：(1)不依賴于胰島素的直接降糖作用；(2)胰島素增敏作用；(3)抑制α-葡萄糖苷酶作用。

與正常對(duì)照動(dòng)物相比，STZ造模大鼠表現(xiàn)為明顯的多飲、多尿、體重明顯下降，大都出現(xiàn)精神萎靡，活動(dòng)減少癥狀。TCF高劑量組對(duì)STZ模型大鼠高血糖水平也有改善作用，其中給藥2～3周較為明顯。與正常對(duì)照動(dòng)物相比，STZ模型大鼠HbA1c、GSP明顯升高，二甲雙胍0.1g·kg-1和TCF 0.10 g·kg-1可明顯降低STZ模型大鼠HbA1c、GSP水平，其余各治療組對(duì)HbA1c、GSP未見明顯影響，提示TCF高劑量下對(duì)STZ誘導(dǎo)SD大鼠糖尿病模型高血糖和高血清HbA1c、GSP水平具有較明顯的改善作用。此模型的原理是由于STZ破壞胰腺組織，造成體內(nèi)胰島素分泌量絕對(duì)不足，進(jìn)而引起高血糖，而TCF高劑量下對(duì)此模型具有一定的降糖作用，提示本品可能具有部分不依賴于胰島素的直接降糖作用。

α-葡萄糖苷酶抑制劑可減緩腸道內(nèi)葡萄糖的吸收，降低餐后高血糖[11]，有潛在預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的作用。有文獻(xiàn)表明，山茱萸各萃取物均具有很好的 α-葡萄糖苷酶抑制活性[8]。為了考察TCF對(duì)糖代謝的影響以及可能的作用途徑，本試驗(yàn)分別測(cè)定了正常ICR小鼠腹腔注射葡萄糖耐量和灌胃淀粉糖耐量。TCF對(duì)ICR小鼠的糖耐量有明顯的改善作用，可能與TCF具有一定的α-葡萄糖苷酶抑制作用相關(guān)。

格列酮類是一類新型口服抗糖尿病藥物, 其抗糖尿病效應(yīng)主要表現(xiàn)為增加靶組織對(duì)胰島素的敏感性 ,改善胰島素抵抗[12]。張杰等[13]研究發(fā)現(xiàn)山茱萸提取物之一熊果酸能明顯改善糖尿病大鼠的胰島素敏感性。為了進(jìn)一步考察TCF對(duì)葡萄糖體內(nèi)吸收、利用的影響，本實(shí)驗(yàn)對(duì)正常SD大鼠進(jìn)行了葡萄糖耐量和胰島素水平的測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TCF降低正常動(dòng)物糖耐量血糖和胰島素釋放作用的時(shí)效特征與羅格列酮較一致，而不同于格列吡嗪。但尚不能證明TCF具有胰島素增敏作用。

綜上，TCF在抑制葡萄糖體內(nèi)吸收、促進(jìn)葡萄糖利用等方面具有較明顯的作用，可通過(guò)非胰島素依賴途徑發(fā)揮降糖作用，是否具有α-葡萄糖苷酶抑制、胰島素增敏作用有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

(致謝：本實(shí)驗(yàn)在中國(guó)藥科大學(xué)新藥篩選中心實(shí)驗(yàn)室、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心完成，在此對(duì)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中給予指導(dǎo)和幫助的老師及同學(xué)表示真摯的感謝!)

[1] Kim S H, Kim B K, Lee Y C. Effects of Corni fructus on ovalbumin-induced airway inflammation and airway hyper-responsiveness in a mouse model of allergic asthma[J].JInflamm(Lond), 2012,9(1):9.

[2] Han Y, Jung H W, Park Y K. Selective therapeutic effect of Cornus officinalis fruits on the damage of different organs in STZ-induced diabetic rats[J].AmJChinMed, 2014,42(5):1169-82.

[3] Qi M Y, Liu H R, Dai D Z,et.al. Total triterpene acids, active ingredients from Fructus Corni, attenuate diabetic cardiomyopathy by normalizing ET pathway and expression of FKBP12.6 and SERCA2a in streptozotocin-rats[J].JPharmPharmacol, 2008,60(12):1687-94.

[4] 劉 薇, 朱晶晶, 徐志猛, 等. 山茱萸總萜對(duì)KKay糖尿病小鼠的治療作用研究[J]. 藥物評(píng)價(jià)研究, 2016，39(6):947-52.

[4] Liu W,Zhu J J,Xu Z M,et al. Effects of terpenes from Cornus Fructus on KKay diabetic mice[J].DrugEvalRes, 2016, 39(6):947-52.

[5] 徐志猛, 朱晶晶, 江振洲, 等. 山茱萸總萜對(duì)db/db糖尿病小鼠的降血糖作用[J]. 中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào), 2016，47(3): 337-41.

[5] Xu Z M,Zhu J J,Jiang Z Z,et al. Hypoglycemic effects of terpenes from Fructus Corni on db/db diabetic mice[J].JChinaPharmUniv, 2016, 47(3): 337-41.

[6] Yang Z, Wang L, Zhang F, et al. Evaluating the antidiabetic effects of Chinese herbal medicine: Xiao-Ke-An in 3T3-L1 cells and KKAy mice using both conventional and holistic omics approaches[J].BMCComplementAlternMed, 2015, 15: 272.

[7] Gao D, Li Q, Gao Z, et al. Antidiabetic effects of Corni Fructus extract in streptozotocin-induced diabetic rats[J].YonseiMedJ, 2012, 53(4): 691-700.

[8] Park C H, Noh J S, Tanaka T. The effects of Corni Fructus extract and its fractions against α-glucosidase inhibitory activities in vitro and sucrose tolerance in normal rats[J].AmJChinMed, 2011, 39(2):367-80.

[9] Chen J, Liu J, Zhang L, et al. Pentacyclic triterpenes. Part 3: Synthesis and biological evaluation of oleanolic acid derivatives as novel inhibitors of glycogen phosphorylase[J].BioorgMedChemLett, 2006,16(11):2915-9.

[10] Zhang W, Hong D, Zhou Y, et al. Ursolic acid and its derivative inhibit protein tyrosine phosphatase 1B, enhancing insulin receptor phosphorylation and stimulating glucose uptake[J].BiochimBiophysActa, 2006, 1760(10):1505-12.

[11] 顧覺奮, 陳紫娟. α-葡萄糖苷酶抑制劑的研究及應(yīng)用[J]. 藥學(xué)進(jìn)展,2009，33(2):62-7.

[11] Gu J F, Chen Z J. The studies and applications of α-glucosidase inhibitors[J].ProgPharmSci, 2009, 33(2):62-7.

[12] 羅謀倫, 郭欲曉, 胡映輝, 等. 羅格列酮的胰島素增敏作用和胰島素抵抗改善作用[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2000，16(4): 425-8.

[12] Luo M L, Guo Y X, Hu Y H, et al. Insulin sensitizing effect and insulin resistance ameliorating effect of rosiglitazone[J].ChinPharmacolBul, 2000, 16(4):425-8.

[13] 張 杰, 吳淑艷, 王 琳, 等. 熊果酸對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)胰島素抵抗大鼠脂質(zhì)代謝的影響[J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊, 2010，28(5):975-8.

[13] Zhang J, Wu S Y, Wang L, et al. Effects of ursolic acid on fat metabolism in high-fat-fed induced insulin resistance rats[J].ChinArchTraditChinMed, 2010,28(5):975-8.

Hypoglycemic pathways of terpenes from Cornus officinalis

FAN Si-si1, ZHU Jing-jing2, XU Deng-qiu1, XIE Yang-hui1, WANG Chang-ling1, WANG Hua3, JIANG Zhen-zhou1, LOU Feng-chang2, WANG Tao1
(1.NewDrugScreeningCenter,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing210009,China; 2.JiangsuWuzhongSuMedicineDevelopmentCoLtd,Nanjing210009,China; 3.GuangzhouPrecisionBiomedicalTechnologyCoLtd,Guangzhou510000,China)

Aim To investigate the hypoglycemic pathway of terpenes from Cornus officinalis(TCF) from three aspects of insulin dependence, α-glucosidase inhibition, insulin sensitizing. Methods Insulin-deficient diabetes mellitus(DM) model was induced by tail vein injection of streptozotocin(STZ) into SD rats at the dose of 50mg·kg-1body weight. Rats were randomly divided into seven groups: control group(CON), model group(Model), metformin group(Met) 0.1g·kg-1, shenqi jiangtang granules(Shenqi) group 1.0 g·kg-1, three dose groups of TCF: 0.10, 0.05, 0.025 g·kg-1. Body weight and blood glucose were measured every week. After four weeks, glycosylated hemoglobin (HbA1c), glycosylated serum protein (GSP) were determined. Normal ICR mice were divided into seven groups: CON, Model, Met group 0.2g·kg-1, acarbose group(Acar) 0.1 g·kg-1, Shenqi group 1.5g·kg-1, three dose groups of TCF: 0.20g·kg-1; 0.10g·kg-1; 0.05 g·kg-1. After 10 days of administration, intraperitoneal injections of glucose and gavage starch tolerance tests were employed. Normal SD rats were divided into six groups: CON, rosiglitazone group 0.02 g·kg-1, glipizide group 0.02 g·kg-1, three dose groups of TCF: 0.10, 0.05, 0.025 g·kg-1. After seven days of administration, intraperitoneal glucose tolerance test(IPGTT) was employed and levels of insulin was determined. Results (1)High dose of TCF significantly reduced the level of HbA1c(P<0.05), GSP(P<0.05) on STZ model rats; (2)TCF significantly improved the glucose tolerance and gavage starch tolerance in ICR mice(P<0.05); (3) High dose of TCF significantly reduced the blood glucose and serum insulin level. Conclusions TCF has obvious effects on inhibiting glucose absorb and promoting the use of glucose. It is able to exert hypoglycemic effect through non-insulin dependent pathway, whereas, whether it has the effects of α-glucosidase inhibition and insulin sensitization should be further validated.

TCF; diabetes mellitus; insulin; glucose tolerance; α- glucosidase; STZ

2017-04-10,

2017-05-18

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81403154)

范思思(1995-)，女，碩士生，研究方向：糖尿病藥理學(xué)，E-mail: fanss1995@163.com； 王 濤(1980- )，男，博士，副研究員，碩士生導(dǎo)師，研究方向：糖尿病藥理學(xué)，通訊作者，Tel:025-83271043, E-mail: wangtao1331@126.com

時(shí)間：2017-6-7 19:04 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170607.1904.050.html

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.07.025

A

1001-1978(2017)07-1014-06

R-332；R284.1；R587.105.31；R977.15