生存素和PTEN在良惡性胃潰瘍中的表達(dá)

金曉昇，安慧敏，黃智銘

（1.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院 消化內(nèi)科，浙江 溫州 325200；2.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 消化內(nèi)科，浙江 溫州 325015）

生存素和PTEN在良惡性胃潰瘍中的表達(dá)

金曉昇1，安慧敏1，黃智銘2

（1.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院 消化內(nèi)科，浙江 溫州 325200；2.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 消化內(nèi)科，浙江 溫州 325015）

目的：探討生存素（survivin）和第10號(hào)染色體同源缺失性磷酸酶-張力蛋白（PTEN）在良惡性胃潰瘍中的表達(dá)情況。方法：收集2015年1月至2016年3月溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院胃鏡報(bào)告單及病理切片保存完好的胃潰瘍組織共200例，利用免疫組織化學(xué)法檢測無癌前病變胃潰瘍100例以及胃癌100例中survivin蛋白和PTEN蛋白的表達(dá)。結(jié)果：胃癌組織中的survivin表達(dá)陽性率高于胃潰瘍組，而PTEN表達(dá)陽性率低于胃潰瘍組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論：survivin在胃癌中多為陽性表達(dá)，而PTEN在胃癌中多為陰性表達(dá)。

生存素；PTEN；胃腫瘤

胃癌是來源自胃黏膜上皮的惡性腫瘤，在所有惡性腫瘤中發(fā)病率排在第三位，是最常見的消化道腫瘤。據(jù)世界衛(wèi)生組織公布的報(bào)告，我國胃癌的發(fā)病率和病死率均為世界第一，我國男性胃癌發(fā)病率及病死率高居各種腫瘤發(fā)病與死亡的首位，男女比約為3∶1。早期胃癌多無明顯癥狀，或僅有飽脹、噯氣等非特異性消化道癥狀。當(dāng)癥狀明顯時(shí)往往已屬晚期。胃潰瘍性病變是常見的胃黏膜病變，據(jù)統(tǒng)計(jì)，5%左右的胃潰瘍可發(fā)生癌變，甚至最高達(dá)29.4%的胃癌來自胃潰瘍[1]。如何區(qū)分良惡性胃潰瘍并尋找具有特異性和敏感性的腫瘤標(biāo)志物來盡早發(fā)現(xiàn)胃癌是研究的熱點(diǎn)。本研究通過免疫組織化學(xué)法檢測生存素（survivin）和第10號(hào)染色體同源缺失性磷酸酶-張力蛋白（phosphatase and tensin homolog deleted onchromosome ten，PTEN）在胃癌組和胃潰瘍組中的表達(dá)情況，探討其在潰瘍進(jìn)程中的變化以及在良、惡性胃潰瘍中的鑒別價(jià)值，以期為胃癌的鑒別診斷提供進(jìn)一步的補(bǔ)充。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院2015年1月至2016年3月間經(jīng)胃鏡活檢組織病理學(xué)確診為胃腺癌和胃良性潰瘍性病變標(biāo)本共200例，其中胃腺癌100例，即胃癌組，男74例，女26例，年齡（54.5±16.7）歲，胃良性潰瘍性病變100例，即胃潰瘍組，男69例，女31例，年齡（61.1±13.2）歲。所有標(biāo)本均經(jīng)3位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師在未知原病理診斷的情況下重新閱片確認(rèn)。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 試劑與方法 兔抗人PTEN多克隆抗體（濃縮型）、兔抗人survivin多克隆抗體（濃縮型）購自蘇州康何欣生物科技有限公司，稀釋比例均為1∶100。標(biāo)本經(jīng)4%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋切片，按試劑盒說明書操作，免疫組織化學(xué)采用Envison法，均設(shè)置陰性和陽性對(duì)照。

1.3 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定 survivin和PTEN陽性細(xì)胞主要均為胞質(zhì)染色，呈棕色或棕黃色，采用雙評(píng)分半定量法進(jìn)行蛋白表達(dá)評(píng)分，由2位病理科醫(yī)師在高倍鏡下（×400）隨機(jī)選取10個(gè)視野（每視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞），根據(jù)染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞所占比例進(jìn)行評(píng)判。染色強(qiáng)度：不著色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細(xì)胞所占比例：陽性細(xì)胞≤5%記0分，6%～30%記1分，31%～60%記2分，≥61%記3分。2項(xiàng)評(píng)分之和：0分為陰性（-），1～3分為弱陽性（+），4～6分為中等陽性（++），＞6分為強(qiáng)陽性（+++），+～+++均定為陽性。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2組計(jì)量資料的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，性別構(gòu)成比的比較采用χ2檢驗(yàn)，PTEN和survivin表達(dá)情況比較采用秩和檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料比較 胃癌組及胃潰瘍組患者性別構(gòu)成比、年齡等指標(biāo)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），2組資料具有可比性。

2.2 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果 2組免疫組織化學(xué)染色結(jié)果見圖1。2組survivin和PTEN表達(dá)情況比較發(fā)現(xiàn)，胃癌組中survivin表達(dá)陽性率高于胃潰瘍組（χ2=50.50，P＜0.01），而PTEN表達(dá)陽性率低于胃潰瘍組（χ2=19.50，P＜0.01），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 2組中PTEN和survivin表達(dá)情況比較[例數(shù)（%）]

圖1 胃癌和胃潰瘍患者典型的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果（×400）

3 討論

目前，國內(nèi)外研究表明，人類多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與PTEN及survivin相關(guān)。GOVENDER等[2]研究發(fā)現(xiàn)前列腺癌、乳腺癌、子宮頸癌、顱腦腫瘤、結(jié)腸癌和肺癌等多種腫瘤組織的PTEN蛋白表達(dá)異常。PTEN是目前發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因，其能通過調(diào)控多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，在細(xì)胞的生長、凋亡、黏附、擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移等各個(gè)方面發(fā)揮作用[3]。PTEN可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，它的作用機(jī)理主要為：①PTEN的異常表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞的凋亡異常是細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化和腫瘤形成的主要原因之一；②PTEN的缺失使細(xì)胞周期無法停滯，細(xì)胞增殖分化增強(qiáng)，因而導(dǎo)致細(xì)胞惡性分化；③PTEN缺失引起的負(fù)性調(diào)節(jié)導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生自噬；④PTEN的異常表達(dá)導(dǎo)致新生血管惡性增殖；⑤PTEN的表達(dá)缺失可導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)移、黏附增加，從而引發(fā)惡性腫瘤遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移。

血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子、基質(zhì)金屬蛋白酶與胃癌PTEN的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)，表明PTEN失活可提高血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子與基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)，可促進(jìn)癌細(xì)胞向基質(zhì)浸潤及腫瘤血管的形成，從而為腫瘤細(xì)胞的浸潤轉(zhuǎn)移提供條件。有研究檢測PTEN雜合性缺失發(fā)現(xiàn)，于萎縮性胃炎、萎縮性胃炎伴腸化、不典型增生、早期胃癌、進(jìn)展期胃癌中，PTEN雜合性缺失逐步增加，PTEN蛋白表達(dá)率逐步下降[5]，由此表明，PTEN蛋白缺失在胃黏膜萎縮至癌變的發(fā)病過程發(fā)揮作用[6]。而survivin在多種惡性腫瘤組織如腎癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮肉瘤中表達(dá)率較高[7-8]，并在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中起一定的調(diào)控作用，而在正常成人組織中表達(dá)則微乎其微。其同時(shí)在子宮頸上皮內(nèi)瘤變、乳腺良性病變、結(jié)腸腺瘤性息肉等一些癌前疾病中表達(dá)。可能是由于survivin存在2種亞細(xì)胞定位：細(xì)胞核和（或）細(xì)胞質(zhì)中，兩者中的survivin有著不同的作用，提示在不同的腫瘤中，survivin的定位不同，預(yù)后亦不同[9]。survivin通過直接或間接地干預(yù)凋亡蛋白酶caspases的功能而發(fā)揮其抗凋亡作用，在調(diào)控細(xì)胞周期和抑制細(xì)胞凋亡過程中起重要作用[10]。survivin是一種既能調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂又能抑制細(xì)胞凋亡功能的蛋白，是分子量最小的凋亡抑制蛋白家族中的成員，也是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制因子，更是聯(lián)系細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的重要因子。有研究發(fā)現(xiàn)，survivin在臨床上不同的胃癌患者中的表達(dá)存在著很大的差異，但是它與胃癌的分化程度和TNM分期具有較高的相關(guān)性而與患者的年齡、性別及淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)性較小[11]。

PTEN的失活和survivin的高表達(dá)在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起協(xié)同作用[12]。PTEN和survivin作用環(huán)節(jié)一致，但生物學(xué)效應(yīng)相反，其可能的機(jī)制為PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑對(duì)survivin表達(dá)有調(diào)控作用，而PTEN在正常生理情況下抑制了PI3K/Akt通路，從而抑制survivin的表達(dá)。有時(shí)在胃癌尤其是早期胃癌的病理診斷上存在一定困難，此時(shí)需借助免疫組織化學(xué)方法來提高診斷的準(zhǔn)確率[13]。PTEN 及survivin在胃潰瘍及胃癌中的不同表達(dá)以及其負(fù)相關(guān)特性有助于對(duì)胃癌的診斷提供進(jìn)一步幫助。同時(shí)可作為腫瘤治療療效的判斷依據(jù)之一，為腫瘤的治療提供新的途徑[14-15]。

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（本文編輯：賈建敏）

Expression of survivin and PTEN in benign and malignant gastric ulcer

JIN Xiaosheng, AN Huimin, HUANG Zhiming. 1.Department of Gastroenterology, the Third Affi liated Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou, 325200; 2.Department of Gastroenterology, the First Affi liated Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou, 325015

Objective:To study the expression of survivin and the 10th chromosome homologous gene lacking protein phosphatase-tension (PTEN) in benign and malignant gastric ulcer.Methods:One hundred gastric ulcer tissues and one hundred gastric cancer tissues were collected from January 2015 to March 2016 in the Third Affi liated Hospital of Wenzhou Medical University. Expressive difference of PTEN and survivin between gastric ulcer tissues and gastric cancer tissues were measured by immunohistiochemistry.Results:The positive expression rate of survivin in gastric cancer tissues was higher than that in the gastric ulcer tissues, but the positive expression rate of PTEN in gastric cancer tissues was lower than that in the gastric ulcer tissues, the difference was both statistically signifi cant (P＜0.01).Conclusion:The expression of survivin in gastric cancer is positive, and the expression of PTEN is negative.

survivin; PTEN; stomach neoplasms

R57

B

10.3969/j.issn.2095-9400.2017.06.015

2016-07-26

金曉昇（1982-），男，浙江溫州人，主治醫(yī)師。

黃智銘，教授，碩士生導(dǎo)師，Email：wfyhzm@126. com。