URP1基因在肺癌組織中的表達(dá)及其意義

周鑫　漆濱　潘朝陽

[摘要] 目的 研究URP1基因在肺癌組織中的表達(dá)及其意義。 方法 應(yīng)用免疫組化SP法檢測152例肺癌組織和152例配對癌旁正常肺組織中的URP1表達(dá)情況。 結(jié)果 URP1基因在肺癌組織中的表達(dá)明顯高于正常肺組織（P<0.05），在非小細(xì)胞肺癌中高表達(dá)，在小細(xì)胞肺癌中低表達(dá)；URP1在鱗癌的表達(dá)高于腺癌（P<0.05）和大細(xì)胞癌（P<0.05），腺癌與大細(xì)胞癌之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；URP1基因表達(dá)水平與鱗癌的分化程度呈正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論 URP1基因參與肺癌的發(fā)生及發(fā)展過程。

[關(guān)鍵詞] 肺腫瘤；基因表達(dá)；URP1；免疫組化；整合素

[中圖分類號] R734.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701（2017）16-0004-03

[Abstract] Objective To study the expression and significance of URP1 gene in lung cancer tissues. Methods Immunohistochemical SP method was used to detect the expression of URP1 in 152 cases of lung cancer tissues and 152 cases of paired paracancer normal lung tissues. Results The expression of URP1 in lung cancer tissues was significantly higher than that in normal lung tissues （P<0.05）. URP1 was highly expressed in non-small cell lung cancer and was lowly expressed in small cell lung cancer.The expression of URP1 in squamous cell carcinoma was higher than that in adenocarcinoma（P<0.05） and large cell carcinoma （P<0.05）. There was no significant difference in the expression of UPR1 between adenocarcinoma and large cell carcinoma.The expression level of URP1 protein was positively correlated with the degree of differentiation of squamous cell carcinoma（P<0.05）. Conclusion URP1 gene is involved in the development and progression of lung cancer.

[Key words] Lung neoplasms； Gene expression； URP1； Immunohistochemistry； Integrin

肺癌作為嚴(yán)重危害人類健康的最常見惡性腫瘤，在我國癌癥死因構(gòu)成比中已超過20%，且發(fā)病率和死亡率一直呈上升趨勢[1]；肺癌起源于肺泡上皮細(xì)胞和支氣管黏膜柱狀上皮細(xì)胞，其發(fā)展過程中機(jī)體多種基因和蛋白異常表達(dá)，并起促進(jìn)作用[2]。URP1是新近研究證實的整合素激活分子，其可能具有調(diào)節(jié)整合素的作用，并促進(jìn)細(xì)胞間黏附作用的改變，從而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展[3]。本實驗應(yīng)用免疫組化法檢測正常肺組織及肺癌組織中的URP1表達(dá)，以探討URP1基因表達(dá)與肺癌發(fā)生及發(fā)展的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料來源

選擇2014年11月～2016年12月我院胸外科手術(shù)切除留取的新鮮肺癌組織及配對癌旁正常肺組織用于免疫組織化學(xué)染色分析，經(jīng)病理學(xué)醫(yī)師確診后納入。共入組152例，其中男83例，女69例；鱗癌65例，腺癌43例，大細(xì)胞癌21例，小細(xì)胞癌23例，術(shù)前均無化療和放射治療史，所有樣本進(jìn)行URP1基因免疫組織化學(xué)染色。

1.2 免疫組織化學(xué)法

采用URP1兔抗人多克隆抗體U1610-01（1∶1000美國United States Biological公司，Swampscott，MA）和Dako二步法抗兔免疫組織化學(xué)檢測試劑盒（EnVision+/HRP/Rb；顯色劑：Dako Liquid DAB Substrate Chromogen System）進(jìn)行檢測。實驗步驟：將石蠟切片脫蠟水化，過氧化氫消除內(nèi)源性過氧化物酶后進(jìn)行抗原修復(fù)（高壓熱修復(fù)法），滴入URP1兔抗人多克隆抗體，孵化過夜，洗滌，加入二抗，洗滌，蘇木素復(fù)染，脫水，封片，鏡檢。

1.3 結(jié)果評定標(biāo)準(zhǔn)

采用染色廣度及強(qiáng)度雙評分標(biāo)準(zhǔn)評估蛋白表達(dá)[4]：染色廣度計算染色細(xì)胞所占比例，染色深度分為4級0～3+。陰性：染色廣度<10%；弱陽性：深度1+/廣度<50%或深度2+/廣度<30%；中等陽性：深度2+/廣度30%～60%或深度3+/廣度<30%；強(qiáng)陽性：深度2+/廣度>60%或深度3+/廣度>30%。陰性和弱陽性為低表達(dá)，中等陽性和強(qiáng)陽性為高表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS 14.0統(tǒng)計分析軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗，對于理論頻數(shù)<5時，采用Fisher確切概率法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 URP1基因在正常肺組織和肺癌組織中的表達(dá)

URP1基因在正常肺組織和肺癌組織中的表達(dá)：URP1基因陽性表達(dá)呈棕黃色，其在肺癌組織和正常肺組織中的陽性表達(dá)率分別為53.3%（81/152）和8.6%（13/152），兩者之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=69.5，P<0.05）。

2.2 URP1基因在不同病理類型肺癌組織中的表達(dá)

URP1基因在非小細(xì)胞癌的陽性表達(dá)率均高于小細(xì)胞癌（χ2=10.4，P<0.05）；在非小細(xì)胞肺癌亞型中，URP1基因陽性表達(dá)率：鱗癌大于腺癌（χ2=9.7，P<0.05）及大細(xì)胞癌（χ2=8.9，P<0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義，大細(xì)胞癌與腺癌之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.2，P>0.05）。見表1。

2.3 URP1基因在高、中、低分化程度的肺癌組織中的表達(dá)

高、中、低分化鱗癌之間URP1基因陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=25.4，P<0.05），高分化鱗癌URP1基因陽性表達(dá)率高于中分化鱗癌（χ2=4.6，P<0.05），中分化鱗癌表達(dá)陽性率高于低分化鱗癌（χ2=4.8，P<0.05），分化越好者URP1基因表達(dá)陽性率越高。但腺癌分化程度與URP1基因陽性表達(dá)率之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.09，P>0.05）。見表2。

3 討論

整合素分子是一種細(xì)胞黏附受體，在細(xì)胞黏附、細(xì)胞遷移、胚胎發(fā)育、損傷修復(fù)等過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，通過介導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)與細(xì)胞及細(xì)胞與細(xì)胞間的黏附作用，直接刺激細(xì)胞增殖、抑制凋亡并介導(dǎo)血管生成等過程，參與腫瘤的生長與發(fā)展[5-7]。

URP1是新近研究證實的整合素激活分子，位于染色體20p12.3，與新桿狀線蟲中的UNC-112蛋白同源，在整合素活化中發(fā)揮重要作用，參與整合素的雙向信號傳導(dǎo)[8，9]。近些年其與腫瘤的關(guān)系逐漸被揭示，Kloeker[10]研究顯示URP1基因在70%的結(jié)腸癌和60%的肺癌中表達(dá)上調(diào)，定量PCR檢測其在結(jié)腸癌表達(dá)上調(diào)4倍以上，肺癌表達(dá)上調(diào)60倍以上，國內(nèi)研究也表明URP1基因mRNA和蛋白表達(dá)在結(jié)腸癌中均上調(diào)，提示URP1基因參與結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展，并與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)[11]。

本研究通過免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測不同病理類型肺癌中URP1基因表達(dá)，發(fā)現(xiàn)URP1基因在肺癌組織表達(dá)明顯高于正常肺組織，證實UPR1基因參與了肺癌的發(fā)生發(fā)展過程，其機(jī)制可能與依賴TGF-β信號通路的EMT上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）有關(guān)，EMT在腫瘤的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移過程中扮演著重要的作用[12]，URP1基因FERM功能域可與整合素B亞單位結(jié)合，形成黏著斑復(fù)合物，并通過TGF-β信號通路調(diào)控EMT，從而促進(jìn)肺癌的發(fā)生和發(fā)展[4]。

肺癌按病理組織學(xué)可分兩大類：小細(xì)胞癌和非小細(xì)胞癌，其中小細(xì)胞癌占比接近20%，非小細(xì)胞癌占比超過80%，非小細(xì)胞癌又包括鱗癌、腺癌、大細(xì)胞癌，鱗癌、腺癌又可分為高分化、中分化、低分化，不同病理分化類型的肺癌的治療及預(yù)后存在差異，分化越低其生長速度越快，越早出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，預(yù)后越差[13]。通過本實驗我們發(fā)現(xiàn)不同病理類型的肺癌組織URP1陽性表達(dá)率也存在差異：鱗癌>腺癌>小細(xì)胞癌，揭示URP1基因表達(dá)可能與肺癌細(xì)胞起源相關(guān)聯(lián)，起源于上皮細(xì)胞的鱗癌、腺癌陽性表達(dá)率高，而神經(jīng)內(nèi)分泌起源的小細(xì)胞癌陽性表達(dá)率低，另一方面，高分化鱗癌的URP1基因陽性表達(dá)率高于中分化鱗癌 ，中分化鱗癌表達(dá)陽性率高于低分化鱗癌，分化越好者URP1基因表達(dá)陽性率越高，提示URP1基因可能影響肺癌細(xì)胞的機(jī)動性、趨化性及侵襲性，URP1高表達(dá)的腫瘤侵襲、遷移能力相對較弱，惡性程度相對較低，反之亦然，其具體調(diào)節(jié)機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 陳萬青，張思維，曾紅梅，等. 中國2010年惡性腫瘤發(fā)病與死亡[J]. 中國腫瘤，2014，23（1）：1-10.

[2] 赫捷，陳萬青. 2012年中國腫瘤登記年報[M]. 北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，2012：60-62.

[3] Jemal A，Siegel R，Xu J，et al. Cancer statistics，2010[J]. CA Cancer J Clin，2010，60（5）：277-300.

[4] 樊軍衛(wèi)，王兆文，唐華美，等.UNC-112相關(guān)蛋白1基因在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其意義[J]. 中華實驗外科雜志，2010，27：597-599.

[5] Kanpanagiotou EM，Dilana KD，Gkiozos I，et al. Metastin is not involved in metastatic potential of non-small cell lung cancer[J].Medical Oncology，2011，28（2）：559-564.

[6] Souza MA，Kimble RM，McMillan JR，et al.Kindler syndrome pathogenesis and fermitin family homologue 1（kindlin-1）function[J].Dermatol Clin，2010，28：115-118.

[7] Schaller MD.UNC-112，A new regulator of cell-extracellular matrix adhesions？[J]. J Cell Biol，2000，150：F9-F11.

[8] Qadota H，Moerman DG，Benian GM. A molecular mechanism for the requirement of PAT4（integrin-linked kinase（ILK） for the localization of UNC-112（Kindlin） to integrin adhesion sites[J].J Biol Chem，2012，287：28537-28551.

[9] Moser M，Legate KR，Zent R，et al.The tail of intergrins，talin，and kindlins[J].Science，2009，324（5929）：895-899.

[10] Kloeker S，Major MB，Calderwood DA，et al. The kindler syndrome protein is regulated by transforming growth factor-beta and involved in integrin—mediated adhesion[J].J Biol Chem，2004，279（8）：6824-6833.

[11] Harburger DS，Calderwood DA. Integrin signalling at a glance[J].J CeU Sci，2009，122（2）：159-163.

[12] Weinstein EJ，Boumer M，Head R，et al.URPl：A member of a novel family of PH and FERM domain-containing membrane-associated proteins is significantly over-expressed in lung and colon carcinomas[J].Biochim Biophys Acta，2003，1637（3）：207-216.

[13] Sin S，Bonin F，Petit V，et al.Role of the focal adhesion protein kindlin-1 in breast cancer growth and lung metastasis[J].J Natl Cancer Inst，2011，103（17）：1323-1337.

[14] Margadant C，Sonnenberg A.Integrin-TGF-B crosstalk in fibrosis，cancer and wound healing[J].EMBO Pep，2010， 11（2）：97-105.

[15] Travis WD，Travis LB，Devesa SS. Lung cancer[J]. Cancer，1995，75（1 Suppl）：191-202.

（收稿日期：2017-04-05）