改性甲殼素對瘢痕形成影響的動物實驗

何君君 ，李天石，朱 輝

（北京大學深圳醫(yī)院整形外科，廣東 深圳 518000）

改性甲殼素對瘢痕形成影響的動物實驗

何君君 ，李天石，朱 輝

（北京大學深圳醫(yī)院整形外科，廣東 深圳 518000）

目的通過動物實驗，來比較不同濃度的改性甲殼素對創(chuàng)面愈合的影響，探討是否能夠減少瘢痕組織形成。方法實驗所用動物SD大鼠120只，隨機分成6組，試驗濃度設計為（10,100,500,1000,2000,5000）mg/l。制備背雙側(cè)對稱的全層皮膚缺損模型，自身對照研究；動物模型的一側(cè)創(chuàng)面缺損以不同濃度的改性甲殼素處理，另一側(cè)以每天常規(guī)消毒對照研究；于術(shù)后7天、14天、21、28天觀察記錄各組創(chuàng)面參數(shù)，進行評價；總結(jié)分析改性甲殼素處理創(chuàng)面與對照組大體及組織學形態(tài)的差異。結(jié)果500 mg/l組、1000 mg/組、2000 mg/組、5000 mg/組中，實驗側(cè)vss評分優(yōu)于對照側(cè)VSS評分，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）結(jié)論通過動物實驗發(fā)現(xiàn)，500 mg/l 濃度的改性甲殼素溶液對創(chuàng)面的愈合有明顯的促進作用。

改性甲殼素； 瘢痕； 動物實驗

甲殼素是一種天然多糖，廣泛存在自然界中，在眾多領(lǐng)域中有著廣泛的應用價值[1]。甲殼素及其衍生物具有良好的生物相容性及生物可降解性，目前已在醫(yī)藥領(lǐng)域廣泛應用[2]。目前,有多項研究證明甲殼素能促進傷口愈合、減小瘢痕[3]。本研究分析了改性甲殼素劑量對創(chuàng)面愈合的影響，現(xiàn)報告如下。

1 材料和方法

1.1 實驗動物和試劑

1.1.1 實驗動物 SD 大鼠，雄性，體重 210 ～220 g，共 120 只購于廣東省動物實驗中心。

1.1.2 甲殼素材料的選擇 本實驗選用經(jīng)過改性后的水溶性甲殼素，脫乙酰度為90%，分子量1-5萬單位，樣品由深圳市陽光之路科技有限公司提供，除具有非常好的組織相容性外，還具有無毒，無刺激，可降解，無免疫原性，抗菌等化學特性。

1.2 改性甲殼素檢驗濃度的設置

經(jīng)過查閱文獻后，確定2000mg/l為甲殼素作用的最佳劑量，故試驗濃度設計為（10,100,500,1000,2000,5000）mg/l。通過實驗進一步驗證。

1.3 方 法

采用自身對照法進行比較，在大鼠背部對稱性設計2cm×2cm的皮膚缺損模型，采用不同濃度的甲殼素溶液濕敷，對照側(cè)常規(guī)碘伏消毒處理。于術(shù)后7天、14天、21、28天觀察記錄各組創(chuàng)面參數(shù)，進行評價。

1.4 創(chuàng)面療效的創(chuàng)有效性分析

創(chuàng)面愈合判定：大體觀察，創(chuàng)面上皮組織生長良好，創(chuàng)面完全覆蓋，無紅腫，無膿性滲出.有效性判斷標準：與對照側(cè)配對比較。有效：與對照組比較提前2天以上愈合；無效：與對照組比較提前1天以上愈合、對照組基本相同或推遲愈合。

1.5 瘢痕組織的大體測量

對各組創(chuàng)面的瘢痕按照溫哥華瘢痕量表(Vancouverscar scale，VSS)進行量化評分。

1.6 統(tǒng)計學處理方法

采用SPSS.19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。每組分別采用配對t檢驗，以P＜0.01為差異有統(tǒng)計學意義。組間差異暫不分析。

2 結(jié) 果

各組創(chuàng)面療效見表1。各組分別進行配對T檢驗，10mg/l組、100 mg/l組vss評分差異無統(tǒng)計學意義。500 mg/l組、1000 mg/組、2000 mg/組、2000 mg/組中，實驗側(cè)vss評分優(yōu)于對照側(cè)VSS評分，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），見表2。

表1 應用甲殼素后各類創(chuàng)面療效分析

表2 各組對照側(cè)及實驗側(cè)VSS評分均值

3 討 論

3.1 實驗設計

在預實驗中，大鼠腹側(cè)制備全層缺損模型中發(fā)現(xiàn)，由于大鼠活動影響，腹側(cè)傷口經(jīng)常受到摩擦，影響創(chuàng)面愈合，故拋棄腹側(cè)制備模型，選用制備大鼠背部雙側(cè)對稱的全層皮膚缺損模型。由于條件限制，不能做到單個大鼠飼養(yǎng)，分批集中（5只/籠）飼養(yǎng)時，各種原因?qū)е麓笫蟊硞?cè)的創(chuàng)面敷料不能穩(wěn)妥包扎，我們采用彈性網(wǎng)帽制備大鼠的約束衣,有效的解決了敷料容易掉落的問題.

3.2 改性甲殼素促進創(chuàng)面愈合

減少瘢痕產(chǎn)生的機制瘢痕組織的主要成分是膠原纖維，其中又以Ⅰ型膠原纖維含量最多。在膠原的合成與降解過程中，已經(jīng)證實有多種生物活性起到重要作用[4]。陳海蓉等使用羥脯氨酸比色法研究羧甲基殼多糖對瘢痕疙瘩成纖維細胞膠原合成的影響，發(fā)現(xiàn)羧甲基殼多糖在10、50、100、200ug/ml濃度下對瘢痕成纖維細胞作用48h后,能顯著抑制該細胞膠原的合成(P＜ 0.01)[5]。其機制是通過抑制Ⅰ型膠原的產(chǎn)生，從而減少Ⅰ型/Ⅲ型膠原的比例。還有有研究發(fā)現(xiàn)，殼聚糖通過刺激多種細胞的生長誘導血管再生和肉芽生成[7]。劉宗軍等觀察動脈內(nèi)皮細胞在殼聚糖和磷脂化殼聚糖作用下的增殖和遷移情況，發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細胞在聚糖和磷脂化殼聚糖膜上的增殖率分別達88.8%和77.8%,存活內(nèi)皮細胞數(shù)目較不銹鋼片組顯著增加(P＜0.01);聚糖和磷脂化殼聚糖膜的細胞遷移數(shù)目較空白組顯著增加(P＜0.01)，能促進內(nèi)皮細胞的增殖和遷移[7]。許慶等也發(fā)現(xiàn)殼聚糖單體能使內(nèi)皮細胞在膠原表面形成的管狀結(jié)構(gòu)的生成率突增，促進內(nèi)皮細胞血管化功能[8]。張敬德等用組織塊法進行正常皮膚成纖維細胞的體外培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)隨著甲殼素濃度的增高，成纖維細胞細胞器萎縮，各組G0+G1期的成纖維細胞百分比均上升，S期及G2+M期的成纖維細胞百分比均下降[9-11]。Eugene等通過非晶化蟹殼制備出甲殼素產(chǎn)品 Vinaehitin，用該產(chǎn)品對超過300名重度燒傷、外傷和潰瘍患者進行臨床使用，其結(jié)果表明該產(chǎn)品對傷口愈合有很好的效果。還有研究發(fā)現(xiàn)甲殼素可以直接刺激成纖維細胞分泌IL-8來促進傷口中血管內(nèi)皮細胞的增殖，從而增加血液供應，促進肉芽組織的生長。綜上所述，甲殼素通過抑制Ⅰ型膠原纖維的產(chǎn)生、促進內(nèi)皮細胞的血管化，改善組織修復是的血供，促進創(chuàng)面的愈合，減少瘢痕組織的產(chǎn)生，

本次實驗表明，當濃度達到500 mg/l時，改性甲殼素不僅能夠促進創(chuàng)面愈合，縮短創(chuàng)面的愈合時間，同時能夠減少瘢痕組織產(chǎn)生。說明改性甲殼素療效安全、可靠，不受環(huán)境、條的限制，使用方便，具有很好的使用價值，為臨床使用提供依據(jù)。同時，當濃度在500 mg/l以上時，不同濃度的溶液對創(chuàng)面恢復的影響，可以進一步研究分析。

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Animal Experiment of Effect of Modifed Chitin on Scar Formation

HE Jun-jun LI Tian-shi ZHU Hui
(Department of plastic surgery, Shenzhen hospital, Peking University, Guangdong Province,518000, China)

ObjectiveTo compare the effects of different concentrations of modifed chitin on wound healing in animal experiments, and to explore whether it can reduce scar tissue formation.Methods120 SD rats were randomly divided into 6 groups. The experimental concentration was (10,100,500,1000,2000,5000) mg / l. The surface of the animal model was treated with different concentrations of modifed chitin, and the other side was treated with routine disinfection control. The observation and evaluation of the parameters in groups were done at 7,14,21,28 days after operations; summed up the modifed chitin treated wounds and control group in the general and histological differences.ResultsIn the 500 mg/l group, 1000 mg/l group, 2000 mg/l group and 2000 mg /l group, the vss score on the experimental side was superior to the control VSS score, the difference was statistically signifcant (P＜0.01)。ConclusionAnimal experiments found that 500 mg/l concentration of the modifed Chitin solution on the wound healing has a significant role in promoting.

Modifed chitin;scar;animal experiment

2014年度深圳市衛(wèi)生計生系統(tǒng)科研項目立項編號:201401037。

何君君 ，副主任醫(yī)師，

李天石，副主任醫(yī)師。