結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用效果

瞿煒+趙敏

摘要：目的 探討結(jié)核病診斷中結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（T-SPOT.TB）的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法 選取我中心接診疑為結(jié)核病的84例患者，根據(jù)診斷標(biāo)準(zhǔn)將其分為結(jié)核組56例，非結(jié)核組28例，同時(shí)行T-SPOT.TB和結(jié)核抗體（TB）檢測(cè)。結(jié)果 結(jié)核組T-SPOT.TB陽(yáng)性率為78.57%，TB陽(yáng)性率為37.50%（P<0.05）；非結(jié)核組T-SPOT.TB陽(yáng)性率為10.71%，TB陽(yáng)性率為17.86%（P<0.05）；結(jié)核組與非結(jié)核組A、B孔斑點(diǎn)計(jì)數(shù)對(duì)比結(jié)果均無(wú)顯著差異（P>0.05）。結(jié)論 相較于TB檢測(cè)，T-SPOT.TB的診斷準(zhǔn)確性更高，但建議與TB聯(lián)合應(yīng)用，以此實(shí)現(xiàn)對(duì)診斷準(zhǔn)確性的進(jìn)一步提升。

關(guān)鍵詞：結(jié)核?。唤Y(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)；結(jié)核抗體檢測(cè)；診斷

中圖分類號(hào)：R52 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-1959（2017）14-0179-0

根據(jù)2014年WHO對(duì)全球結(jié)核病發(fā)病情況統(tǒng)計(jì)顯示[1]，結(jié)核病年平均發(fā)病率達(dá)到了126/10萬(wàn)，且根據(jù)發(fā)病總數(shù)排名情況來(lái)看，中國(guó)發(fā)病數(shù)達(dá)到了全球第二，僅次于印度。在結(jié)核病嚴(yán)峻的發(fā)病形勢(shì)下，加強(qiáng)結(jié)核病的早期診斷成為關(guān)鍵。目前，在結(jié)核病診斷中，細(xì)菌學(xué)診斷是最主要的診斷手法，但這種檢測(cè)方法不僅耗時(shí)較長(zhǎng)、過(guò)程較長(zhǎng)，且極易受到各方面因素的干擾，導(dǎo)致檢測(cè)準(zhǔn)確性受到影響。結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（T-SPOT.TB）是近幾年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種結(jié)核病診斷技術(shù)，其具有較高特異性和敏感性，受到學(xué)界的共同認(rèn)可。本研究擬對(duì)結(jié)核病診斷中，T-SPOT.TB的應(yīng)用效果進(jìn)行探討，旨在進(jìn)一步了解其實(shí)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料

本研究病例均來(lái)自我中心2015年1月～2016年5月接診的疑為結(jié)核病的患者84例，根據(jù)《肺結(jié)核診斷和治療指南》（中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)）[2]制定的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)患者進(jìn)行確診，其中28例為非結(jié)核病組，女16例，男12例，年齡21～71歲，平均年齡（37.81±6.61）歲；另56例為結(jié)核病組，女32例，男24例，年齡22～70歲，平均年齡（38.24±5.27）歲。

1.2方法

1.2.1 T-SPOT.TB檢測(cè)方法 ①樣品采集與制備：取兩組患者8 ml外周血，在室溫條件下將其與BPMI1640不完全培養(yǎng)液進(jìn)行充分混合，將成功分離之后獲得的單個(gè)細(xì)胞層，放置在潔凈的離心管內(nèi)，并向其中加入0.4%細(xì)胞稀釋液40 μl與細(xì)胞懸液10 μl，取混合液置于計(jì)數(shù)板內(nèi)并行活細(xì)胞計(jì)數(shù)。②培養(yǎng)板設(shè)置：取抗原A、AIM-V無(wú)血清培養(yǎng)液以及抗原B各50 μl加入培養(yǎng)板內(nèi)，設(shè)置50 μl空白對(duì)照組，將其放置在37 ℃環(huán)境下，以5%二氧化碳對(duì)其進(jìn)行20 h孵育。③斑點(diǎn)計(jì)數(shù)：在清潔干凈的條件下，自培養(yǎng)板內(nèi)吸取舍棄的孔內(nèi)液體，并向其中加入新鮮酶標(biāo)抗體溶液50 μl，靜置于2～8 ℃的環(huán)境下進(jìn)行1 h孵育，再向其中加入底物溶液50 μl，室溫下持續(xù)反應(yīng)7 min，采用蒸餾水對(duì)其進(jìn)行洗滌，行干燥處理。采用全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)分析儀（美國(guó)nexcelom）完成斑點(diǎn)計(jì)數(shù)。④結(jié)果判定：陰性對(duì)照組斑點(diǎn)數(shù)量超過(guò)6，抗原A、B斑點(diǎn)數(shù)均比陰性對(duì)照組斑點(diǎn)數(shù)高出2倍即表示為陽(yáng)性；或者陰性對(duì)照組斑點(diǎn)數(shù)低于6，抗原A、B斑點(diǎn)數(shù)與陰性對(duì)照組斑點(diǎn)數(shù)之差仍然超過(guò)6也表示為陽(yáng)性。

1.2.2結(jié)核抗體檢測(cè) ①方法：自上海容創(chuàng)生物技術(shù)有限公司購(gòu)入結(jié)核分期桿菌（TB）抗體診斷試劑盒，對(duì)患者進(jìn)行TB抗體檢測(cè)。操作方法均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)要求實(shí)施。②結(jié)果判定：陰性：測(cè)定結(jié)果未觀察到紅色斑點(diǎn)；陽(yáng)性：觀察發(fā)現(xiàn)存在紅色斑點(diǎn)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

研究數(shù)據(jù)均以統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS20.0進(jìn)行分析處理，各指標(biāo)以t值或χ2檢驗(yàn)，α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 T-SPOT.TB與TB檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

56例結(jié)核組對(duì)象中，44例T-SPOT.TB陽(yáng)性，陽(yáng)性率為78.57%（44/56），21例TB陽(yáng)性，陽(yáng)性率為37.50%（21/56）；28例非結(jié)核組對(duì)象中，3例T-SPOT.TB陽(yáng)性，陽(yáng)性率為10.71%（3/28），5例TB陽(yáng)性，陽(yáng)性率為17.86%（5/28）。各組對(duì)比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 T-SPOT.TB檢測(cè)斑點(diǎn)計(jì)數(shù)比較

T-SPOT.TB檢測(cè)斑點(diǎn)計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，結(jié)核組與非結(jié)核組A、B孔斑點(diǎn)計(jì)數(shù)對(duì)比結(jié)果均無(wú)顯著差異（P>0.05），見(jiàn)表1。

3 討論

結(jié)核病主要是指經(jīng)由細(xì)胞實(shí)現(xiàn)傳播的一種慢性傳染性疾病，多出現(xiàn)在肺部。為提高該病的預(yù)后效果，對(duì)其進(jìn)行早期診斷和治療是非常關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，同時(shí)也我國(guó)結(jié)核病防治工作的要點(diǎn)。結(jié)核菌素試驗(yàn)可以說(shuō)是當(dāng)前臨床中一種應(yīng)用非常廣泛并且非常實(shí)用的結(jié)合篩查方法，其具有檢測(cè)速度快，操作方法簡(jiǎn)單等各項(xiàng)優(yōu)點(diǎn)，經(jīng)常被用于經(jīng)驗(yàn)性抗結(jié)核診斷和治療的判斷標(biāo)準(zhǔn)。但因我國(guó)人群卡介苗接種率非常高，這使得TST假陽(yáng)性率也因此偏高，并且非常容易受到機(jī)體自身免疫狀態(tài)的影響，為此，導(dǎo)致其臨床應(yīng)用受到了限制。結(jié)核病原學(xué)作為結(jié)核病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，其診斷價(jià)值已經(jīng)得到了學(xué)界的公認(rèn)，但常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)所花費(fèi)的時(shí)間往往較長(zhǎng)，并且非常容易應(yīng)細(xì)菌數(shù)量而導(dǎo)致結(jié)果受到影響，從而造成診斷假陰性，痰涂片檢出陽(yáng)性率相對(duì)較低。為此，尋找新的，并且準(zhǔn)確性快的診斷方法，成為了結(jié)核病預(yù)防和控制的重要方法。

T-SPOT.TB試驗(yàn)是一種基于ELISA技術(shù)發(fā)展起來(lái)的一種細(xì)胞免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，其可實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞水平的檢測(cè)，其綜合敏感性可達(dá)到90%左右，診斷敏感性則可達(dá)到83%～97%，這表明T-SPOT.TB試驗(yàn)具有非常高的敏感性[3]。TB試驗(yàn)同樣作為結(jié)核病診斷的重要手段，其主要通過(guò)對(duì)血清中的IgG抗體進(jìn)行測(cè)定，了解B細(xì)胞在刺激下所產(chǎn)生的抗體[4]。

根據(jù)本研究測(cè)定結(jié)果，結(jié)核組T-SPOT.TB陽(yáng)性率為78.57%，TB陽(yáng)性率為37.50%（P<0.05），該結(jié)果與國(guó)內(nèi)其他文獻(xiàn)研究一致。因結(jié)核病患者處在不同的階段，故其細(xì)胞免疫和自身體液免疫也存在一定的差異，從不同角度對(duì)結(jié)核病的診斷效果做出反應(yīng)，從而實(shí)現(xiàn)診斷準(zhǔn)確率的提升。此外，本研究對(duì)T-SPOT.TB兩孔檢測(cè)斑點(diǎn)計(jì)數(shù)情況進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩組兩孔均無(wú)顯著差異（P>0.05），即表明結(jié)核病患者盡管體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生一定的 致使陰性出現(xiàn)一定的升高，但對(duì)T-SPOT.TB測(cè)定結(jié)果并無(wú)顯著影響。

綜上所述，相較于TB試驗(yàn)，T-SPOT.TB試驗(yàn)在結(jié)核病診斷中具有更高的應(yīng)用價(jià)值，但在實(shí)際操作中，建議將兩項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)聯(lián)合運(yùn)用，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)診斷準(zhǔn)確性的進(jìn)一步提升。

參考文獻(xiàn)：

[1]崔魴，楊玲，孟江萍，等.結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)及結(jié)核抗體在肺外結(jié)核病診斷中的臨床意義[J].西部醫(yī)學(xué)，2014，11（1）：103-104，107.

[2]中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì).肺結(jié)核診斷和治療指南[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2001，24（2）：70-74.

[3]高萬(wàn)芹.結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)在結(jié)核病快速診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，35（24）：3450-3452.

[4]鄒丹鳳，肖和平，尹洪云.結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在HIV/AIDS合并結(jié)核病診斷中的應(yīng)用[J].同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2015，59（5）：74-78.編輯/張建婷