化學(xué)發(fā)光法檢測TORCH抗體的方法學(xué)評價

顏霞+肖雪蓮

[摘 要] 目的：評價化學(xué)發(fā)光法檢測TORCH抗體的價值。方法：樣本來自1829名孕前及孕早期婦女，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法、化學(xué)發(fā)光法依次檢測其TORCH特異性免疫球蛋白M（IgM）抗體陽性率，比較兩種檢測方法的重復(fù)性及靈敏度。結(jié)果：化學(xué)發(fā)光法檢測TORCH各病原體IgM的陽性率均高于酶聯(lián)免疫吸附法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。兩種方法檢測TORCH抗體的批內(nèi)變異系數(shù)、批間變異系數(shù)均小于給定的允許范圍且組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。隨著標本稀釋倍數(shù)的增加，兩種方法檢測TORCH抗體的陽性率均逐漸下降，酶聯(lián)免疫吸附法陽性率下降更為明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：化學(xué)發(fā)光法檢測TORCH抗體的批內(nèi)、批間重復(fù)性良好且陽性率與靈敏度更高，對于TORCH感染的早期檢測具有推廣價值。

[關(guān)鍵詞] 化學(xué)發(fā)光法；TORCH抗體；方法學(xué)評價；免疫球蛋白M

中圖分類號：R446 文獻標識碼：A 文章編號：2095-5200（2017）03-077-03

DOI：10.11876/mimt201703032

[Abstract] Objective： This study objective was to evaluate the value of chemiluminescence in the detection of TORCH antibodies. Methods： The sample came from 1 829 pregnant women and early pregnant women， the positive rate of TORCH-specific immunoglobulin M （IgM） antibody was detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and chemiluminescence method. The reproducibility and sensitivity of the two methods were compared. Results： The positive rate of IgM in each pathogen of TORCH detected by chemiluminescence method was higher than that by enzyme-linked immunosorbent assay， and the difference was statistically significant （P<0.05）. The intra-assay coefficient of TORCH antibody detected by the two methods were both less than the given allowable range， and there was no significant difference between the two groups （P>0.05）. With the increase of the dilution ratio， the positive rate of TORCH antibody was decreased gradually， and the positive rate detected by enzyme-linked immunosorbent assay was decreased significantly （P<0.05）. Conclusions： The batch-to-batch reproducibility by the method of chemiluminescence for the detection of TORCH antibody is good and its positive rate and sensitivity are higher， which is of great value for early detection of TORCH infection.

[Key words] chemiluminescence method； TORCH antibody； methodological evaluation； immunoglobulin M

TORCH是一組具有致畸作用的病原微生物的縮寫，孕婦感染的TORCH可沿胎盤播散至胎兒，并導(dǎo)致新生兒發(fā)育遲緩、畸形等多種并發(fā)癥[1]。通過檢測血清中TORCH特異性免疫球蛋白M（IgM）抗體明確THRCH感染狀態(tài)，對保證母嬰結(jié)局、改善人口質(zhì)量具有重要意義[2]。既往臨床常用的TORCH抗體檢測手段為酶聯(lián)免疫吸附法，但該技術(shù)靈敏度偏低且需手工操作，無法滿足臨床快速診斷和篩查要求[3]。本研究就化學(xué)發(fā)光法檢測TORCH的臨床價值進行了方法學(xué)評。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2010年2月—2016年2月來我院進行產(chǎn)前篩查或產(chǎn)檢1829名孕前及孕早期女性，排除既往有自然流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、胎兒畸形等不良孕產(chǎn)史者。其中孕前女性713名，年齡20～39歲，平均（26.25±4.31）歲；孕早期女性1116名，年齡21～43歲，平均（27.08±4.52）歲，孕周10～14周，平均（12.09±1.28）周。按照標本送檢要求，統(tǒng)計單項結(jié)果。

1.2 檢測及評價方法

抽取其空腹肘靜脈血6 mL，均分為2份，（1）酶聯(lián)免疫吸附法：使用TORCH特異性抗體診斷試劑盒，嚴格參照試劑盒使用說明書進行檢測，陽性判斷標準[4]：血清標本吸光度（OD）值≥臨界值。（2）化學(xué)發(fā)光法：使用Sunrise光吸收酶標儀（奧地利Tecan公司）、Maglumi2000 PLUS全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及配套檢測試劑（深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程有限公司），根據(jù)標本發(fā)光強度計算TORCH抗體IgM濃度，陽性判斷標準[5]：TOX陽性：IgM濃度≥6 AU/mL；RV陽性：IgM濃度≥15 AU/mL；CMV陽性：IgM濃度≥30 AU/mL；HSV Ⅰ/Ⅱ型陽性：IgM濃度≥1.1 AU/mL。

比較酶聯(lián)免疫吸附法、化學(xué)發(fā)光法檢測TORCH抗體的陽性率，數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0進行分析，計數(shù)資料以（n/%）表示，并采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。取陽性、陰性樣本各20份，連續(xù)重復(fù)測定20次，檢測其批內(nèi)重復(fù)性能；連續(xù)重復(fù)測定20 d，檢測其批間重復(fù)性能[6]；使用10%小牛血清生理鹽水以1：5、1：10、1：20稀釋處于臨界值的標本，對兩種方法的靈敏度進行比較[7]。

2 結(jié)果

2.1 檢測結(jié)果比較

化學(xué)發(fā)光法檢測TORCH抗體IgM總陽性率及各病原體的陽性率均高于酶聯(lián)免疫吸附法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 重復(fù)性試驗結(jié)果

兩種方法檢測TORCH抗體的批內(nèi)變異系數(shù)、批間變異系數(shù)均小于給定的允許范圍且組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表2。

2.3 靈敏度試驗結(jié)果

隨著標本稀釋倍數(shù)的增加，兩種方法檢測TORCH抗體的陽性率均逐漸下降，酶聯(lián)免疫吸附法陽性率下降更為明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表3。

3 討論

TORCH專指發(fā)生在孕前期或孕期的微生物感染，女性內(nèi)分泌改變與免疫功能降低所致易感性上升與體內(nèi)潛伏病毒激活是造成TORCH感染的主要原因[8]。母體TORCH感染往往不具備特異性臨床表現(xiàn)[9]。Ayla等[10]發(fā)現(xiàn)，圍產(chǎn)期TORCH感染還可隨女性下生殖道逆行擴散，造成長期的病理性損害。隨著近年來TORCH感染治療手段的進步，一系列針對性治療策略已被證實能夠取得良好的干預(yù)效果[11]。

酶聯(lián)免疫吸附法是過往臨床檢測TORCH抗體的常用方法，該法主要對宿主感染病原體3～7 d后特異性IgM抗體的檢測明確TORCH感染狀態(tài)，其優(yōu)勢在于設(shè)備、試劑成本較低，但弊端也同樣明顯，包括病毒分離耗時長、檢測操作較為復(fù)雜等[12-13]。本研究發(fā)現(xiàn)，與化學(xué)發(fā)光法相比，酶聯(lián)免疫吸附法檢測孕前期、孕期TORCH感染的陽性率偏低，與Stahl等[14]研究結(jié)果一致，進一步顯現(xiàn)出酶聯(lián)免疫吸附法在TORCH感染早期診斷中的局限性。

化學(xué)發(fā)光法的檢測原理為：以病原體抗原包被的磁微粒為固相載體，以鼠抗人單克隆抗體連接異魯米諾衍生物為抗體結(jié)合物，在2次孵育過程中，病原體與固相載體、抗體結(jié)合物與病原體抗體相繼反應(yīng)，此時激發(fā)試劑誘發(fā)的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)可由光電倍增管獲取，通過光單位判斷可定量明確TORCH抗體狀態(tài)[15]。與酶聯(lián)免疫吸附法相比，化學(xué)發(fā)光法不受試劑反應(yīng)溫度、溫育時間、實驗條件等多種因素影響，且能夠為臨床快速、準確診斷提供可靠參考，故在近年來TORCH抗體檢測中受到了廣泛關(guān)注[16]。本研究結(jié)果表明，化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫吸附法檢測TORCH抗體的重復(fù)性相當(dāng)，均具有良好的批內(nèi)、批間重復(fù)性，而化學(xué)發(fā)光法具有更高的TORCH抗體IgM檢測陽性率，且標本稀釋倍數(shù)達1：5～1：20時，該方法檢測TORCH抗體的陽性率仍高于酶聯(lián)免疫吸附法，說明化學(xué)發(fā)光法具有更高的靈敏度，對于TORCH感染的早期檢出與病情控制具有更為積極的意義。雖然化學(xué)發(fā)光免疫分析設(shè)備的成本較高，但該方法可滿足臨床全自動批量檢測要求，能夠有效彌補酶聯(lián)免疫吸附法費時費力的弊端，相信隨著該方法在圍產(chǎn)期TORCH抗體篩查的普遍應(yīng)用，其成本可進一步下降。

參 考 文 獻

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