• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    miR-346在鼻咽癌中的表達及生物學(xué)功能①

    2017-07-05 11:46:55蔣成義汪洪濤許亞佳
    中國免疫學(xué)雜志 2017年6期
    關(guān)鍵詞:生物學(xué)研究

    蔣成義 汪洪濤 江 濤 許亞佳 夏 林

    (蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科,蚌埠233004)

    miR-346在鼻咽癌中的表達及生物學(xué)功能①

    蔣成義 汪洪濤②江 濤 許亞佳 夏 林

    (蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科,蚌埠233004)

    目的:探討miR-346在鼻咽癌中的表達及在鼻咽癌中的生物學(xué)功能。方法:收集63例鼻咽癌組織以及34例鼻咽部非癌組織標(biāo)本,Real-time PCR檢測組織和6株人鼻咽癌細胞系及1株人正常鼻咽部永生化上皮細胞株NP69中miR-346表達量,選取人鼻咽癌細胞系中表達量居中的兩種細胞系,并轉(zhuǎn)染miR-346 inhibitor,設(shè)置對照組(NC組)并轉(zhuǎn)染陰性對照質(zhì)粒,Real-time PCR檢測兩種細胞系轉(zhuǎn)染miR-346 inhibitor和對照組miR-346表達量,細胞增殖、凋亡分別采用Brdu-ELISA和流式細胞術(shù)檢測,Transwell小室實驗檢測細胞遷移和侵襲。結(jié)果:與鼻咽非癌組織比較,鼻咽癌組織中miR-346表達量顯著升高(P=0.000);以正常人鼻咽部上皮細胞NP69比較,各鼻咽癌細胞株中miR-346相對表達量均顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。選擇6種鼻咽癌細胞株中miR-346表達量居中的兩種,分別為CNE-1和CNE-2,轉(zhuǎn)染miR-346 inhibitor后,兩種鼻咽癌細胞株miR-346相對表達量均顯著降低,與NC組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。兩種鼻咽癌細胞轉(zhuǎn)染miR-346 inhibitor下調(diào)miR-346表達后鼻咽癌細胞的增殖受到抑制,均在轉(zhuǎn)染第3天差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。下調(diào)miR-346表達后鼻咽癌細胞CNE-1和CNE-2的凋亡顯著增加,遷移細胞數(shù)和侵襲細胞數(shù)顯著降低,與NC組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:miR-346在鼻咽癌中高表達,下調(diào)miR-346表達會抑制鼻咽癌細胞增殖、遷移和侵襲,促進凋亡,miR-346可能作為一種癌基因在鼻咽癌的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要的作用。

    miR-346;鼻咽癌;增殖;凋亡;遷移;侵襲

    鼻咽癌起源于鼻咽部上皮細胞,是常見的頭頸部惡性腫瘤。目前已知的鼻咽癌致病因素包括遺傳易感性、飲食和環(huán)境因素、EB病毒感染[1]。鼻咽癌具有早期遠處轉(zhuǎn)移和高度局部轉(zhuǎn)移的特征,且起病隱匿,易復(fù)發(fā),雖然以調(diào)強放射治療技術(shù)為主的放化療綜合治療可以提高鼻咽癌的局控率,但鼻咽癌的5年生存率仍僅維持在70%[2]。深入了解鼻咽癌的癌變分子機制有助于提高鼻咽癌的早期診斷準確率,并尋找到其他更有效的治療方法從而延長生存期,改善患者預(yù)后。

    microRNA簡稱miRNA,是非編碼RNA分子的一種,長度為19~25 nt。miRNA能夠與下游基因mRNA的3′端非編碼區(qū)(3′-UTR)特異性結(jié)合影響mRNA的降解和翻譯,從而參與調(diào)控細胞的生長、分化、增殖等多種生理及病理過程[3]。miRNA與腫瘤的關(guān)系是近年來研究的熱點,研究發(fā)現(xiàn)超過50%的miRNA基因定位在與腫瘤相關(guān)的脆性位點[4]。miRNA與腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移和血管新生等密切相關(guān)[5],目前已經(jīng)在多種腫瘤中檢測到miRNA 的異常表達[4,5]。miR-346是miRNA家族中的一種,已經(jīng)有研究發(fā)現(xiàn)miR-346在炎性腸道疾病[6]和甲狀腺腫[7]等的發(fā)生中具有重要作用。新近研究發(fā)現(xiàn),miR-346與宮頸癌的發(fā)生也有關(guān)[8],miR-346在鼻咽癌中的表達及生物學(xué)功能尚不清楚,本研究旨在探討miR-346在鼻咽癌中的表達,采用細胞瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù)認為干預(yù)鼻咽癌細胞中miR-346表達量,分析miR-346表達量改變對鼻咽癌細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲等惡性腫瘤生物學(xué)特征的影響。

    1 材料與方法

    1.1材料 DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清購自美國Hyclone公司,CO2培養(yǎng)箱購自美國Forma公司,dNTP Mix、Taq DNA Polymerase、GeneRulerTM100 bp DNA Ladder、QIAqucik Gel Extraction Kit、質(zhì)粒小提試劑盒、細胞裂解液均購自美國Fermentas公司;胰蛋白酶購自美國DIBCO公司;碘化丙啶、超速離心機購自美國Sigma公司;PCR儀購自美國Bio-Rad公司,F(xiàn)ACSCalibur流式細胞儀購自美國BD公司,酶標(biāo)儀購自上海賽默飛世爾公司,抗BrdU 抗體、miR-346抑制物(Inhibitor)以及陰性對照質(zhì)粒均購自上海吉瑪生物公司;二甲基亞砜(DMSO)購自碧云天生物技術(shù)公司;基質(zhì)膠(Matrigel)購自美國BD Biosciences公司。

    1.2方法

    1.2.1組織獲取和細胞培養(yǎng) 63例鼻咽癌組織以及34例鼻咽部非癌組織均來自安徽省蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科。所有標(biāo)本均為鼻咽部活檢取得,并經(jīng)病理學(xué)檢查確診,入選者均知情同意,此前均未接受放化療治療,組織獲取后置于液氮中保存。6株人鼻咽癌細胞系HONE1、6-10B、CNE-1、C666-1、CNE-2、SUNE-1以及1株人正常鼻咽部永生化上皮細胞株NP69購自上海中科院細胞所。細胞均培養(yǎng)于10%胎牛血清培養(yǎng)基中,培養(yǎng)條件為:5%CO2、37℃、飽和濕度細胞培養(yǎng)箱,每隔48~72 h,用0.25%的胰酶消化對數(shù)期細胞并進行細胞傳代,細胞傳代2~3代用于后續(xù)實驗。

    1.2.2實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time PCR) 取凍存的組織約0.1 g,置于冰凍的研缽中加液氮充分研磨成細粉,放入離心管并加入裂解液,離心后靜置;用預(yù)冷的PBS洗滌細胞加入裂解液,靜置10 min至細胞裂解完全。收集細胞裂解液并按照試劑盒提取細胞和組織中總RNA,配制miRNA反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液對總RNA中的miRNA進行反轉(zhuǎn)錄。冰上配制miR-346的qPCR反應(yīng)液,混勻后加入PCR反應(yīng)管中,離心并將混合物加入多孔板,多孔板置于PCR儀中,兩步法進行退火反應(yīng):95℃預(yù)變性10 min,95℃變性15 s,60℃退火1 min,擴增40個循環(huán)。繪制光譜和溶解曲線,軟件分析樣品的Ct值,以U6為內(nèi)參,2-ΔΔCt法計算miR-346表達量。

    1.2.3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 為了研究miR-346的生物學(xué)功能,本研究選取人鼻咽癌細胞系中表達量居中的兩種細胞系。另外,由于鼻咽癌組織和鼻咽癌細胞系中miR-346均高表達,因此采取miR-346 inhibitor進行轉(zhuǎn)染。miR-346 inhibitor為miR-346抑制物,是一種慢病毒載體,可以通過感染腫瘤細胞將外源的shRNA或外源基因整合并抑制miR-346表達,由上海吉瑪生物公司合成,序列:上游:5′-TTACTCCAGAGGGCGTCACTCATGTTCAAGAGACATGAGTGAC-GCCCTCTGGAGTATTTTTTC-3′下游:5′-TCGAGA-AAAAATACTCCAGAGGGGCGTCACTCATGTCTCTT-GAACATGAGTGACGCCCTCTGGAGTAA-3′。具體方法為:將細胞種植于多孔板中,取兩個EP管,分別加入5 μl LipofectamineTM2000+100 pmol miR-346 inhibitor和5 μl LipofectamineTM2000+陰性質(zhì)粒(對照組),加入培養(yǎng)基至終體積為2 ml。取轉(zhuǎn)染后細胞重復(fù)Real-time PCR實驗。

    1.2.4Brdu-ELISA 對數(shù)生長期細胞,胰腺酶消化后制備細胞單懸液,控制濃度為1×105個/ml,加入多孔板,每孔加入1 ml,細胞轉(zhuǎn)染后加入BrdU標(biāo)記液,室溫孵育4 h后加入抗BrdU 抗體,PBS洗滌3次,加入底物液顯色并終止反應(yīng)。每組設(shè)5個副孔用于測定轉(zhuǎn)染后1~5 d細胞增殖情況。采用酶標(biāo)儀測定450 nm波長處的吸光值。

    1.2.5流式細胞術(shù) 將轉(zhuǎn)染48 h后的細胞用PBS洗滌,超速離心機離心后棄上清液,孵育緩沖液洗滌后離心,100 μl Binding buffer重懸細胞,加入PI,避光4℃孵育20 min并不時振動。制備單細胞懸液,濃度為1×105個/ml,采用流式細胞儀測定細胞凋亡百分比。

    1.2.6Transwell小室實驗 Matrigel預(yù)先放入4℃冰箱融化過夜,無血清DMEM培養(yǎng)液稀釋Matrigel至1 mg/ml,每孔加入100 μl稀釋液至Transwell小室,包被1 h后洗滌。分別向鋪設(shè)(侵襲試驗)和未鋪設(shè)(遷移試驗)Matrigel的培養(yǎng)嵌室上部加入轉(zhuǎn)染24 h后的細胞懸液,每孔加入100 μl約2.5×104個,底部為正常培養(yǎng)基,5%CO2、37℃常規(guī)培養(yǎng)24 h后吸去嵌室內(nèi)的液體并用聚甲醛固定,結(jié)晶紫染色,PBS漂洗,倒置顯微鏡下選取5個視野計算細胞數(shù)。

    2 結(jié)果

    2.1組織和各細胞株中miR-346表達量比較 與鼻咽非癌組織比較,鼻咽癌組織中miR-346表達量顯著升高(3.124±0.832 vs 5.993±1.139,t=2.493,P=0.000,圖1A);與正常人鼻咽部上皮細胞NP69比較,各鼻咽癌細胞株中miR-346相對表達量均顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05,圖1B)。

    2.2轉(zhuǎn)染miR-346 inhibitor對兩種鼻咽癌細胞株miR-346表達量的影響 選擇6種鼻咽癌細胞株中miR-346表達量居中的兩種,分別為CNE-1和CNE-2,轉(zhuǎn)染miR-346 inhibitor后,CNE-1(圖2A)和CNE-2(圖2B)兩種鼻咽癌細胞株miR-346相對表達量均顯著降低,與NC組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

    圖1 組織和各細胞株中miR-346表達量比較Fig.1 miR-346 expression in tissue and cells of naso-pharyngeal carcinomaNote:*.P<0.05.

    2.3下調(diào)miR-346表達對鼻咽癌細胞增殖的影響 Brdu-ELISA檢測結(jié)果顯示,CNE-1(圖3A)和CNE-2(圖3B)兩種鼻咽癌細胞轉(zhuǎn)染miR-346 inhibitor下調(diào)miR-346表達后鼻咽癌細胞的增殖受到抑制,在第3天差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

    2.4下調(diào)miR-346表達對鼻咽癌細胞凋亡的影響 流式細胞儀檢測結(jié)果顯示,下調(diào)miR-346表達后CNE-1和CNE-2兩種鼻咽癌細胞的凋亡顯著增加,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見圖4。

    2.5下調(diào)miR-346表達對鼻咽癌細胞遷移的影響 由圖5可知,下調(diào)miR-346表達后CNE-1和CNE-2兩種鼻咽癌細胞的遷移細胞數(shù)均明顯低于NC組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

    2.6下調(diào)miR-346表達對鼻咽癌細胞侵襲的影響 由圖6可知,下調(diào)miR-346表達后CNE-1和CNE-2兩種鼻咽癌細胞的侵襲細胞數(shù)均明顯低于NC組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

    圖2 轉(zhuǎn)染miR-346 inhibitor降低鼻咽癌細胞株miR-346表達Fig.2 Expression of miR-346 reduced after transfection miR-346 inhibitor in nasopharyngeal carcinoma cell linesNote:*.P<0.05.

    圖3 下調(diào)miR-346表達抑制鼻咽癌細胞增殖Fig.3 Down-regulate of miR-346 significantly suppressed growth of nasopharyngeal carcinoma cellsNote:*.P<0.05.

    圖4 下調(diào)miR-346表達促進鼻咽癌細胞凋亡Fig.4 Down-regulate of miR-346 significantly promoted apoptosis of nasopharyngeal carcinoma cellsNote:*.P<0.05.

    圖5 下調(diào)miR-346表達抑制鼻咽癌細胞遷移Fig.5 Down-regulate of miR-346 significantly suppressed migration of nasopharyngeal carcinoma cellsNote:*.P<0.05.

    圖6 下調(diào)miR-346表達抑制鼻咽癌細胞侵襲Fig.6 Down-regulate of miR-346 significantly suppressed invasion of nasopharyngeal carcinoma cellsNote:*.P<0.05.

    3 討論

    作為一種頭頸部常見惡性腫瘤,鼻咽癌主要發(fā)生于鼻咽頂?shù)膫?cè)壁和前壁,能夠早期侵犯顱底和出現(xiàn)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。隨著診療技術(shù)水平的提高,早期鼻咽癌經(jīng)過規(guī)范化綜合治療后5年生存率可超過70%,但晚期鼻咽癌的5年生存率不足30%。目前臨床對于鼻咽癌的早期診斷以及預(yù)后評估尚缺乏特異性生物學(xué)標(biāo)志物,了解鼻咽癌發(fā)生發(fā)展的分子機制并找尋差異性表達的預(yù)測分子標(biāo)志物,通過研究其在鼻咽癌中的生物學(xué)功能,從而有望提高鼻咽癌的診治水平,延長生存期,改善患者預(yù)后。

    目前腫瘤常見的生物學(xué)行為包括潛力無限的復(fù)制能為、抗生長信號的不敏感、抵抗細胞死亡、組織浸潤和轉(zhuǎn)移、基因組的穩(wěn)定和突變等[9],但腫瘤究竟是如何發(fā)生和發(fā)展的,其中的具體機制仍然不明確。一般而言,腫瘤是一種基因疾病,致癌因素引起基因的改變,造成對腫瘤生長的失調(diào)。新近研究發(fā)現(xiàn),除了常見的蛋白編碼基因,一些非編碼的基因與腫瘤的關(guān)系也越來越密切[10]。miRNA是一類非編碼RNA,在進化上高度保守,通過特異性結(jié)合下游多個靶基因mRNA的3′-UTR區(qū),影響轉(zhuǎn)錄后基因水平。miRNA參與了包括細胞增殖、分化、生長、發(fā)育、凋亡等幾乎所有的生命活動,與包括腫瘤在內(nèi)的人類大多數(shù)疾病密切相關(guān),而在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中,miRNA扮演著促癌基因或者抑癌基因的角色[11]。

    miRNA表達改變受多種因素的影響,包括基因重排、染色體異常、基因突變和基因丟失。miRNA表達異常會影響受其調(diào)控的mRNA,從而調(diào)控編碼蛋白的表達。miRNA與腫瘤的關(guān)系,同一種miRNA或者同一個家族miRNA可以參與多種腫瘤的發(fā)生[12-14]。同一種miRNA在不同的腫瘤中能發(fā)揮抑癌或者癌基因不同的作用[15,16]。在同一種腫瘤中可以有多種miRNA表達異常[17,18]。

    miRNA正是通過這種全方位多層次的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控系統(tǒng)對腫瘤細胞的生長、分化、增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移進行調(diào)控,參與包括鼻咽癌在內(nèi)的幾乎所有惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。目前已知有超過30多種miRNA參與鼻咽癌的發(fā)病,而關(guān)于miR-346在鼻咽癌中的表達及生物學(xué)功能尚不清楚。本研究通過Real-time PCR檢測并比較了鼻咽癌組織和鼻咽部非腫瘤組織,6種鼻咽癌細胞系和正常人鼻咽部上皮細胞中miR-346表達量,結(jié)果發(fā)現(xiàn)鼻咽癌組織miR-346表達量高于鼻咽部非腫瘤組織,6種鼻咽癌細胞系miR-346表達量高于正常人鼻咽部上皮細胞。說明miR-346在鼻咽癌中高表達,可能發(fā)揮癌基因作用。為了進一步進行驗證,采用細胞瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù),通過轉(zhuǎn)染miR-346 inhibitor抑制鼻咽癌細胞中miR-346,分別對腫瘤細胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲四種生物學(xué)行為進行了觀察,結(jié)果發(fā)現(xiàn),下調(diào)miR-346表達會抑制鼻咽癌細胞增殖、遷移和侵襲,促進凋亡。以往研究認為[7],miR-346能夠調(diào)節(jié)卵泡輔助T細胞(Tfh)參與包括甲狀腺功能亢進在內(nèi)的自身免疫性疾病中,miR-346在甲亢患者血清中呈低表達,且與CD4(+)CXCR5(+) T細胞呈負相關(guān),而上調(diào)miR-346表達會導(dǎo)致CD4(+)CXCR5(+) T細胞衰減。近年來miR-346與腫瘤的關(guān)系逐漸被發(fā)現(xiàn)和重視,Guo和他的同事[8]對miR-346在宮頸癌中的作用進行了研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-346在宮頸癌中高表達,能夠促進宮頸癌細胞的遷移和侵襲,且能夠增強調(diào)節(jié)蛋白Argonaute2(Ago2)的表達。本研究與Guo等的研究得到相似的觀點,認為miR-346在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中扮演著癌基因的作用。

    綜上所述,本研究結(jié)果初步表明,miR-346作為一種癌基因參與鼻咽癌的發(fā)生和發(fā)展,人為干預(yù)miR-346表達會影響鼻咽癌細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲等生物學(xué)行為。本研究尚存在以下不足:首先,未進行體內(nèi)動物實驗進一步驗證miR-346在鼻咽癌中的生物學(xué)功能;其次,未對miR-346在鼻咽癌中發(fā)揮作用的靶基因進行預(yù)測和驗證,這將會在今后研究的中進一步改善。

    [1] Dawson CW,Port RJ,Young LS.The role of the EBV-encoded latent membrane proteins LMP1 and LMP2 in the pathogenesis of nasopharyngeal carcinoma (NPC)[J].Semin Cancer Biol,2012,22(2):144-153.

    [2] Atighechi S,Ahmadpour Baghdadabad MR,Mirvakili SA,etal.Human papilloma virus and nasopharyngeal carcinoma:pathology,prognosis,recurrence and mortality of the disease[J].Exp Oncol,2014,36(3):215-216.

    [3] Sperber H,Beem A,Shannon S,etal.miRNA sensitivity to Drosha levels correlates with pre-miRNA secondary structure[J].RNA,2014,20(5):621-631.

    [4] Zhang J,Zhao H,Gao Y,etal.Secretory miRNAs as novel cancer biomarkers[J].Biochim Biophys Acta,2012,1826(1):32-43.

    [5] Rocci A,Hofmeister CC,Pichiorri F.The potential of miRNAs as biomarkers for multiple myeloma[J].Expert Rev Mol Diagn,2014,14(8):947-959.

    [6] Chen Y,Du J,Zhang Z,etal.MicroRNA-346 mediates tumor necrosis factor α-induced downregulation of gut epithelial vitamin D receptor in inflammatory bowel diseases[J].Inflamm Bowel Dis,2014,20(11):1910-1918.

    [7] Chen J,Tian J,Tang X,etal.MiR-346 regulates CD4+CXCR5+T cells in the pathogenesis of Graves′ disease[J].Endocrine,2015,49(3):752-760.

    [8] Guo J,Lv J,Liu M,etal.miR-346 up-regulates argonaute 2 (AGO2) protein expression to augment the activity of other microRNAs (miRNAs) and contributes to cervical cancer cell malignancy[J].J Biol Chem,2015,290(51):30342-30350.

    [9] Gadbail AR,Mankar Gadbail MP,Hande A,etal.Tumor angiogenesis:role in locally aggressive biological behavior of ameloblastoma and keratocystic odontogenic tumor[J].Head Neck,2013,35(3):329-334.

    [10] Yu W,Qiao Y,Tang X,etal.Tumor suppressor long non-coding RNA,MT1DP is negatively regulated by YAP and Runx2 to inhibit FoxA1 in liver cancer cells[J].Cell Signal,2014,26(12):2961-2968.

    [11] Tutar Y.miRNA and cancer;computational and experimental approaches[J].Curr Pharm Biotechnol,2014,15(5):429.

    [12] Hu CB,Li QL,Hu JF,etal.miR-124 inhibits growth and invasion of gastric cancer by targeting ROCK1[J].Asian Pac J Cancer Prev,2014,15(16):6543-6546.

    [13] Wan HY,Li QQ,Zhang Y,etal.MiR-124 represses vasculogenic mimicry and cell motility by targeting amotL1 in cervical cancer cells[J].Cancer Lett,2014,355(1):148-158.

    [14] Feng T,Shao F,Wu Q,etal.miR-124 downregulation leads to breast cancer progression via LncRNA-MALAT1 regulation and CDK4/E2F1 signal activation[J].Oncotarget,2016,7(13):16205-16216.

    [15] Xie H,Lee L,Scicluna P,etal.Novel functions and targets of miR-944 in human cervical cancer cells[J].Int J Cancer,2015,136(5):E230-E241.

    [16] Christensen LL,Tobiasen H,Holm A,etal.MiRNA-362-3p induces cell cycle arrest through targeting of E2F1,USF2 and PTPN1 and is associated with recurrence of colorectal cancer[J].Int J Cancer,2013,133(1):67-78.

    [17] Tang H,Deng M,Tang Y,etal.miR-200b and miR-200c as prognostic factors and mediators of gastric cancer cell progression[J].Clin Cancer Res,2013,19(20):5602-5612.

    [18] Zhu ED,Li N,Li BS,etal.miR-30b,down-regulated in gastric cancer,promotes apoptosis and suppresses tumor growth by targeting plas minogen activator inhibitor-1[J].PLoS One,2014,9(8):e106049.

    [收稿2016-11-03 修回2017-01-05]

    (編輯 張曉舟)

    ExpressionandbiologicalfunctionsofmiR-346innasopharyngealcarcinoma

    JIANGCheng-Yi,WANGHong-Tao,JIANGTao,XUYa-Jia,XIALin.DepartmentofOtorhinolaryngology,theFirstAffiliatedHospitalofBengbuMedicalCollege,Bengbu233004,China

    Objective:To explore the expression and biological functions of miR-346 in nasopharyngeal carcinoma.Methods:63 cases nasopharyngeal carcinoma tissue and 34 cases nasopharyngeal non-cancer tissues were collected,the miR-346 expression were detected by Real-time PCR between nasopharyngeal carcinoma tissue and nasopharyngeal non-cancer tissues,6 strains of human nasopharyngeal carcinoma cell lines and 1 strain of normal nasopharyngeal epithelial cell immortalized NP69.Two cell lines with middle expression levels in human nasopharyngeal carcinoma cells lines were selected,and transfected into miR-346 inhibitor,the control group (NC group) were with negative control plasmid transfection,miR-346 expression in two groups were detected by Real-time PCR,the proliferation,apoptosis were detected by Brdu-ELISA and flow cytometry,the migration and invasion were detected by Transwell Chambers experiments.Results:Compared with the nasopharyngeal non-cancer tissues,the miR-346 expression in nasopharyngeal carcinoma tissues was significantly increased (P=0.000);compared with the normal nasopharyngeal epithelial cells NP69.the miR-346 expression in human nasopharyngeal carcinoma cell lines was significantly increased (P<0.05).The CNE-1 and CNE-2 were chose,after the miR-346 inhibitor transfection,the miR-346 expression were significantly lower compared with NC group,the difference was statistically significant (P<0.05).The proliferation of two kinds of nasopharyngeal carcinoma cell CNE-1 and CNE-2 were restrained after transfection,the difference showed statistically significant 3 days after transfection (P<0.05).The apoptosis increased significantly,and the migration cell numbers and invasion cell numbers decreased significantly compared with NC group,the differences were statistically significant(P<0.05).Conclusion:miR-346 is overexpression in nasopharyngeal carcinoma,down-regu-lation of miR-346 inhibits the proliferation,migration,invasion,promotes the apoptosis,miR-346 may act as a oncogene and play an important role in the pathogenesis of nasopharyngeal carcinoma.

    miR-346;Nasopharyngeal carcinoma;Proliferation;Apoptosis;Migration;Invasion

    10.3969/j.issn.1000-484X.2017.06.006

    ①本文受2015年度安徽省高等學(xué)校自然科學(xué)研究一般項目(No.KJ2015B019by)資助。

    ②蚌埠醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室,蚌埠233030。

    蔣成義(1975年-),男,碩士,副主任醫(yī)師,副教授,主要從事耳鼻咽喉頭頸外科腫瘤診治研究,E-mail:jiangchengyi23@163.com。

    R739.63

    A

    1000-484X(2017)06-0833-05

    猜你喜歡
    生物學(xué)研究
    FMS與YBT相關(guān)性的實證研究
    2020年國內(nèi)翻譯研究述評
    遼代千人邑研究述論
    谷稗的生物學(xué)特性和栽培技術(shù)
    視錯覺在平面設(shè)計中的應(yīng)用與研究
    科技傳播(2019年22期)2020-01-14 03:06:54
    初中生物學(xué)糾錯本的建立與使用
    初中生物學(xué)糾錯本的建立與使用
    EMA伺服控制系統(tǒng)研究
    新版C-NCAP側(cè)面碰撞假人損傷研究
    Keller-Segel生物學(xué)方程組周期解的爆破
    久久久精品94久久精品| 亚洲视频免费观看视频| 永久网站在线| 色吧在线观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久久久精品免费免费高清| av.在线天堂| 亚洲国产av新网站| 国产免费视频播放在线视频| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产精品成人在线| 青青草视频在线视频观看| 国产黄色视频一区二区在线观看| h视频一区二区三区| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲国产av新网站| 国产成人免费无遮挡视频| 性色av一级| 久久这里有精品视频免费| 精品人妻在线不人妻| 99国产综合亚洲精品| 在线天堂最新版资源| 观看av在线不卡| 久久影院123| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲第一av免费看| 边亲边吃奶的免费视频| 欧美另类一区| 少妇 在线观看| 欧美97在线视频| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产成人精品婷婷| 黄色视频在线播放观看不卡| 伦理电影免费视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 日韩电影二区| 亚洲av中文av极速乱| 国产精品免费大片| 九色亚洲精品在线播放| 18禁国产床啪视频网站| 久久99蜜桃精品久久| 久久ye,这里只有精品| a级毛片黄视频| 亚洲第一av免费看| 麻豆av在线久日| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲av日韩在线播放| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产 精品1| 一区福利在线观看| 超色免费av| 制服人妻中文乱码| 飞空精品影院首页| videosex国产| 亚洲av.av天堂| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久久久国产网址| av片东京热男人的天堂| 一本大道久久a久久精品| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 老司机影院毛片| 日本wwww免费看| 丰满少妇做爰视频| 国产乱人偷精品视频| 色网站视频免费| 日韩大片免费观看网站| av女优亚洲男人天堂| 久久狼人影院| freevideosex欧美| 日本av手机在线免费观看| 亚洲av综合色区一区| 十八禁网站网址无遮挡| 欧美日韩一级在线毛片| av在线播放精品| 777久久人妻少妇嫩草av网站| av一本久久久久| 亚洲成色77777| 香蕉精品网在线| 成人影院久久| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 久久久a久久爽久久v久久| 一本大道久久a久久精品| 国产 一区精品| 国产xxxxx性猛交| 国产成人av激情在线播放| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产精品一区二区在线观看99| 中文字幕人妻熟女乱码| 国产成人免费无遮挡视频| 久久精品国产a三级三级三级| 人体艺术视频欧美日本| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产日韩欧美视频二区| 国产在线免费精品| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 在现免费观看毛片| 国产精品不卡视频一区二区| 国产成人91sexporn| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国产成人精品无人区| √禁漫天堂资源中文www| 亚洲精品第二区| 亚洲久久久国产精品| 最黄视频免费看| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲人成网站在线观看播放| 只有这里有精品99| av国产精品久久久久影院| 国产在线一区二区三区精| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产亚洲欧美精品永久| 99热全是精品| 99精国产麻豆久久婷婷| 午夜久久久在线观看| 国产成人aa在线观看| 自线自在国产av| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| av在线播放精品| √禁漫天堂资源中文www| 伦理电影大哥的女人| 国产一级毛片在线| 亚洲国产欧美网| 国产成人免费观看mmmm| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 97人妻天天添夜夜摸| 久久久久久人人人人人| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产精品三级大全| 欧美成人午夜精品| 久久国产精品大桥未久av| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 1024香蕉在线观看| 黄色一级大片看看| 久久99一区二区三区| 亚洲美女黄色视频免费看| av片东京热男人的天堂| 久久久久久久精品精品| 午夜日韩欧美国产| 韩国av在线不卡| 午夜福利视频在线观看免费| 深夜精品福利| 一级片免费观看大全| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产成人精品婷婷| 超碰成人久久| 亚洲国产成人一精品久久久| 熟女av电影| 久久婷婷青草| 69精品国产乱码久久久| 我要看黄色一级片免费的| 午夜福利一区二区在线看| 一区在线观看完整版| av国产久精品久网站免费入址| 美女中出高潮动态图| 街头女战士在线观看网站| 91精品伊人久久大香线蕉| 在线观看一区二区三区激情| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 欧美 日韩 精品 国产| 在线天堂最新版资源| 国产片内射在线| 久久久久久久国产电影| 久久久亚洲精品成人影院| 制服人妻中文乱码| 丰满迷人的少妇在线观看| 99国产精品免费福利视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产片特级美女逼逼视频| xxxhd国产人妻xxx| 日韩中文字幕视频在线看片| 麻豆av在线久日| 午夜福利在线观看免费完整高清在| av视频免费观看在线观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的| xxx大片免费视频| 日本色播在线视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 日本av手机在线免费观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 咕卡用的链子| 欧美+日韩+精品| 亚洲av.av天堂| 韩国av在线不卡| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产一区二区 视频在线| 97在线人人人人妻| 这个男人来自地球电影免费观看 | av在线播放精品| 免费少妇av软件| 香蕉国产在线看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 蜜桃在线观看..| av片东京热男人的天堂| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 高清黄色对白视频在线免费看| xxxhd国产人妻xxx| 国产淫语在线视频| 亚洲伊人久久精品综合| 三级国产精品片| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲av在线观看美女高潮| 一级片免费观看大全| 91精品伊人久久大香线蕉| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产欧美亚洲国产| 免费看不卡的av| 国产在线一区二区三区精| 少妇熟女欧美另类| 黄片播放在线免费| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 在线观看一区二区三区激情| 久久久久久免费高清国产稀缺| av视频免费观看在线观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 蜜桃国产av成人99| 日韩人妻精品一区2区三区| 国产免费视频播放在线视频| a级片在线免费高清观看视频| 美女国产视频在线观看| 晚上一个人看的免费电影| 中文天堂在线官网| av电影中文网址| 99国产精品免费福利视频| 大片电影免费在线观看免费| 韩国精品一区二区三区| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲av免费高清在线观看| www.av在线官网国产| 国产精品免费大片| 国产日韩欧美在线精品| 国产麻豆69| 亚洲精品成人av观看孕妇| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产综合精华液| 国产xxxxx性猛交| 最新中文字幕久久久久| 超碰97精品在线观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 91精品国产国语对白视频| 两个人免费观看高清视频| 亚洲国产av影院在线观看| 久久久精品区二区三区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产精品久久久久久精品电影小说| 亚洲中文av在线| 国产高清国产精品国产三级| 国产av一区二区精品久久| 亚洲av.av天堂| 一区二区三区激情视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 国产男女超爽视频在线观看| 电影成人av| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 最近中文字幕2019免费版| 久久毛片免费看一区二区三区| 日韩一区二区视频免费看| 成年美女黄网站色视频大全免费| 国产成人a∨麻豆精品| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 91久久精品国产一区二区三区| 日本91视频免费播放| 免费观看a级毛片全部| 亚洲国产最新在线播放| 宅男免费午夜| 97在线视频观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产国语露脸激情在线看| 人妻系列 视频| 日本免费在线观看一区| 性色avwww在线观看| 国产欧美亚洲国产| 青青草视频在线视频观看| 久久这里有精品视频免费| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 久久久欧美国产精品| xxx大片免费视频| av线在线观看网站| 99热国产这里只有精品6| 国产精品国产三级国产专区5o| av.在线天堂| av卡一久久| 国产成人一区二区在线| 青春草亚洲视频在线观看| 成年动漫av网址| 国产一区二区在线观看av| 国产精品蜜桃在线观看| 2022亚洲国产成人精品| 韩国av在线不卡| 中文字幕人妻丝袜制服| 丰满少妇做爰视频| 国产av精品麻豆| 国产1区2区3区精品| 国产精品二区激情视频| 欧美少妇被猛烈插入视频| 欧美av亚洲av综合av国产av | 国产熟女欧美一区二区| 国产成人午夜福利电影在线观看| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 久久久国产精品麻豆| 日韩av在线免费看完整版不卡| 少妇人妻久久综合中文| 日韩av免费高清视频| 国产av国产精品国产| 另类精品久久| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 边亲边吃奶的免费视频| 久久久久人妻精品一区果冻| 蜜桃国产av成人99| 性高湖久久久久久久久免费观看| 日韩大片免费观看网站| 欧美日韩av久久| 免费在线观看完整版高清| 99热国产这里只有精品6| 春色校园在线视频观看| 午夜福利乱码中文字幕| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产综合精华液| 新久久久久国产一级毛片| 国产成人精品久久二区二区91 | 少妇人妻久久综合中文| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 看十八女毛片水多多多| 午夜福利视频精品| 美女高潮到喷水免费观看| 制服人妻中文乱码| 亚洲男人天堂网一区| 国产视频首页在线观看| 亚洲,欧美精品.| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲视频免费观看视频| 久久综合国产亚洲精品| 捣出白浆h1v1| 卡戴珊不雅视频在线播放| 不卡视频在线观看欧美| 校园人妻丝袜中文字幕| 大香蕉久久网| 久久精品国产综合久久久| 不卡视频在线观看欧美| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 久久久久精品性色| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲经典国产精华液单| 日韩av在线免费看完整版不卡| 在线观看三级黄色| 男男h啪啪无遮挡| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲图色成人| 亚洲国产精品999| 国产有黄有色有爽视频| 日韩av在线免费看完整版不卡| 最黄视频免费看| 大片电影免费在线观看免费| 五月天丁香电影| 国产精品久久久av美女十八| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 色吧在线观看| 亚洲三级黄色毛片| 精品一区在线观看国产| 国产毛片在线视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 在线观看免费高清a一片| 久久久国产精品麻豆| 大片免费播放器 马上看| 欧美最新免费一区二区三区| av电影中文网址| 黄频高清免费视频| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 韩国高清视频一区二区三区| av福利片在线| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 美女中出高潮动态图| 午夜久久久在线观看| 久久久精品免费免费高清| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产伦理片在线播放av一区| 国精品久久久久久国模美| 精品酒店卫生间| 国产免费视频播放在线视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 精品福利永久在线观看| 免费黄色在线免费观看| 成人黄色视频免费在线看| 久久久久久久国产电影| av片东京热男人的天堂| 亚洲国产看品久久| 国产亚洲最大av| 国产成人一区二区在线| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 成人免费观看视频高清| 国产精品久久久久成人av| 亚洲一码二码三码区别大吗| 久久精品夜色国产| 一区在线观看完整版| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产国语露脸激情在线看| 欧美 日韩 精品 国产| 最新的欧美精品一区二区| a级毛片在线看网站| 搡老乐熟女国产| 一区二区日韩欧美中文字幕| 十分钟在线观看高清视频www| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 国产黄色免费在线视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 性高湖久久久久久久久免费观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 久久亚洲国产成人精品v| 性色avwww在线观看| 午夜免费观看性视频| 日韩av免费高清视频| 精品视频人人做人人爽| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产极品粉嫩免费观看在线| 美女视频免费永久观看网站| 国产一区二区三区av在线| 激情视频va一区二区三区| 老鸭窝网址在线观看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 在线天堂最新版资源| 最近手机中文字幕大全| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 精品少妇内射三级| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 女性被躁到高潮视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国精品久久久久久国模美| 欧美人与善性xxx| 男女高潮啪啪啪动态图| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲国产av影院在线观看| 久久精品久久久久久久性| 国产黄色免费在线视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲成国产人片在线观看| 两个人免费观看高清视频| 色视频在线一区二区三区| av有码第一页| 在线 av 中文字幕| 亚洲精品,欧美精品| 熟妇人妻不卡中文字幕| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 我的亚洲天堂| 在线天堂最新版资源| 亚洲欧美一区二区三区国产| av福利片在线| 欧美在线黄色| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲成色77777| 国产老妇伦熟女老妇高清| 久久99精品国语久久久| 伊人久久国产一区二区| 黑人猛操日本美女一级片| 日本黄色日本黄色录像| 婷婷色综合www| 日韩av在线免费看完整版不卡| 飞空精品影院首页| 国产精品人妻久久久影院| 18+在线观看网站| 国精品久久久久久国模美| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 欧美在线黄色| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲第一区二区三区不卡| 人妻系列 视频| 日本wwww免费看| 成年女人在线观看亚洲视频| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 日本免费在线观看一区| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 一区二区日韩欧美中文字幕| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 男女免费视频国产| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产一区亚洲一区在线观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲综合精品二区| 只有这里有精品99| 丁香六月天网| 久久午夜综合久久蜜桃| 99精国产麻豆久久婷婷| 欧美成人午夜精品| 亚洲av.av天堂| 久久久欧美国产精品| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲欧美精品自产自拍| 在线 av 中文字幕| a级毛片在线看网站| 久热久热在线精品观看| 国产男人的电影天堂91| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 丰满迷人的少妇在线观看| 久久久久精品人妻al黑| 国产精品嫩草影院av在线观看| 免费人妻精品一区二区三区视频| 丁香六月天网| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 香蕉丝袜av| 久久精品久久久久久久性| 桃花免费在线播放| 蜜桃在线观看..| 国产免费一区二区三区四区乱码| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲精品一区蜜桃| 久久午夜综合久久蜜桃| 在线天堂最新版资源| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 日日撸夜夜添| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产免费一区二区三区四区乱码| 2022亚洲国产成人精品| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 精品第一国产精品| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 亚洲国产精品999| 一本大道久久a久久精品| 国产精品无大码| 国产又爽黄色视频| 国精品久久久久久国模美| 中文天堂在线官网| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 国产高清国产精品国产三级| 欧美激情高清一区二区三区 | 丁香六月天网| 观看美女的网站| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲内射少妇av| 国产在线免费精品| 国产精品99久久99久久久不卡 | av国产久精品久网站免费入址| 2022亚洲国产成人精品| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 免费观看性生交大片5| 精品福利永久在线观看| av线在线观看网站| 精品第一国产精品| 制服丝袜香蕉在线| 久久久久久久国产电影| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产熟女欧美一区二区| 国产精品久久久久久久久免| 高清av免费在线| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲国产精品成人久久小说| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| kizo精华| 热99国产精品久久久久久7| 久久精品国产自在天天线| 人妻 亚洲 视频| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲av中文av极速乱| 波多野结衣av一区二区av| 人人澡人人妻人| 亚洲精品aⅴ在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 在线观看三级黄色| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 秋霞在线观看毛片| 日韩中文字幕视频在线看片| 美女高潮到喷水免费观看| 少妇熟女欧美另类| 大码成人一级视频| 国产一区二区激情短视频 | 免费在线观看黄色视频的| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 黄色配什么色好看| 最近2019中文字幕mv第一页| 99久久中文字幕三级久久日本| 欧美日本中文国产一区发布| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产麻豆69| 欧美人与善性xxx| 97人妻天天添夜夜摸| 十分钟在线观看高清视频www| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 一区二区av电影网| 亚洲,欧美,日韩| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产成人91sexporn| 国产探花极品一区二区| 欧美日韩精品网址| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| av有码第一页| 在线观看www视频免费|