前列通片抑制腫瘤細胞生長作用的實驗研究

吳燕梅，吳鋼，尹震

（廣州白云山中一藥業(yè)有限公司，廣東廣州510530）

前列通片抑制腫瘤細胞生長作用的實驗研究

吳燕梅，吳鋼，尹震

（廣州白云山中一藥業(yè)有限公司，廣東廣州510530）

目的研究前列通片對前列腺癌的體內(nèi)和體外抑制效果。方法選用3株前列腺癌腫瘤細胞對前列通片含藥血清進行體外抑瘤試驗。根據(jù)體外試驗篩選PC-3細胞株，制作80只的PC-3荷瘤裸鼠。篩選腫瘤直徑約100 mm，相對均一的50只荷瘤裸鼠，隨機分為模型（溶媒）對照組、陽性對照組、前列通低、中、高劑量組，10只/組。每只動物按照20 mL/kg體積灌胃給藥，1次/d，連續(xù)32 d。結(jié)果體外篩選：前列通片含藥血清（濃度為20%，10%，5%）對PC-3細胞存活率分別為47.6%、87.2%、112.9%；對22 RV1細胞的存活率分別為90.9%、89.6%、85.3%，對DU145細胞的存活率分別為82.7%、106.3%、100.4%。體內(nèi)實驗：與模型對照組比較，前列通片低劑量組腫瘤重量未見顯著降低，腫瘤生長抑制率18.5%，前列通片中、高劑量組及陽性對照組腫瘤重量顯著降低（P＜0.05），腫瘤生長抑制率分別為40.3%、23.8%、62.6%。結(jié)論在本實驗條件下，前列通片含藥血清對PC-3細胞抑制效果較為明顯。2.04 g/kg的前列通片對PC-3前列腺癌裸鼠移植瘤有一定的抑制作用。

前列通片；前列腺癌；PC-3細胞；腫瘤生長抑制率

前列通片是治療前列腺疾病的復(fù)方中成藥，其組方來源于廣東省名老中醫(yī)關(guān)濟民的經(jīng)驗方，目前主要用于治療前列腺炎及前列腺增生。既往研究顯示前列通片具有消炎鎮(zhèn)痛，活血祛瘀的藥理作用[1]，還具有抑制前列腺增生的藥理作用[2]。前列腺炎與前列腺增生是前列腺癌發(fā)生的危險因素[3]，前列通片治療前列腺炎以及前列腺增生有較好的效果，而前列腺炎、前列腺增生與前列腺癌的發(fā)生有一定的關(guān)系，本實驗著重探討前列通片對前列腺癌腫瘤細胞的抑制作用。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗細胞（1）種類及來源：PC-3人前列腺癌細胞，來源于中山大學(xué)細胞庫；DU 145人前列腺癌細胞，來源于中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會細胞庫；22 RV1人前列腺癌細胞，來源于中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會細胞庫。（2）培養(yǎng)條件：37℃，5%CO2，選用DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加10%胎牛血清，1%雙抗。

1.1.2 實驗藥物前列通片（廣州白云山中一藥業(yè)有限公司，批號：V00028）,主要由廣東王不留行，黃芪，車前子，關(guān)黃柏，兩頭尖，蒲公英，澤蘭，琥珀，八角茴香油，肉桂油組成；氟他胺片（上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司，批號：150902）。

1.1.3 實驗動物（1）含藥血清體外抗腫瘤實驗：SPF級雄性KM小鼠25只，體質(zhì)量21.6～26.0 g，由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供。生產(chǎn)許可證號：SCXK（粵）2013-0002。質(zhì)量合格證號：44007200024982。（2）體內(nèi)抗腫瘤實驗：清潔級雄性BALB/c裸鼠80只，周齡范圍：4～6周，由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供。生產(chǎn)許可證號：SCXK（粵）2013-0002。質(zhì)量合格證號：44007200027975。（3）動物飼養(yǎng)條件：5只/小箱，群養(yǎng)。采用10 h：14 h晝夜間斷照明；飼養(yǎng)室條件始終保持穩(wěn)定，以保證試驗結(jié)果的可靠性。自由進食飲水，顆粒飼料和飲用水均由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供的。

1.1.4 主要實驗儀器與試劑（1）主要實驗儀器：JEA3001電子天平，精度0.1 g，上海浦春計量儀器有限公司；BS224S電子分析天平：德國Sartouius，感量，0.1 mg。（2）主要試劑：RPMI1640培養(yǎng)液，批號8116019，有效期至：201701，GIBCO公司產(chǎn)品；DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基，批號8115160、8115348，有效期至：201606、201610，GIBCO公司產(chǎn)品；血清，批號：12211119、NCS00615-2，有效期至：201709、202006，GIBCO、AusGeneX公司產(chǎn)品；雙抗，批號：1124A14、5122301001100，有效期至：201512、201703，杭州吉諾、GENVIEW公司產(chǎn)品；0.25胰蛋白酶-EDTA，批號：57300101100、61110101100，GENVIEW公司產(chǎn)品；PBS，批號：5AB001100，有效期至：201712，BOSTER公司產(chǎn)品；MTT：批號：M7905，MP公司產(chǎn)品。

1.2 實驗方法

1.2.1 前列通片含藥血清體外抗腫瘤實驗選用3株前列腺癌腫瘤細胞進行試驗，細胞用相適合的培養(yǎng)基培養(yǎng)，傳代，通過觀察確定狀態(tài)良好，納入實驗。將3株腫瘤細胞轉(zhuǎn)代培養(yǎng)，待處于對數(shù)生長期時，消化計數(shù)，制成細胞懸液，調(diào)整細胞密度為1×104個/mL，于96孔板鋪板培養(yǎng)，每孔100μL。37℃，5%CO2，培養(yǎng)24 h后，棄去原培養(yǎng)基，每種細胞分別加入200μL相應(yīng)濃度的含藥血清培養(yǎng)基。陽性對照組和溶媒對照組的血清終濃度均為10%，前列通組含藥血清終濃度為分別為5%，10%，20%。培養(yǎng)48 h，每孔加入20μL，5 mg/mL的MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后棄去上清，每孔加150μLDMSO，充分震蕩混勻，用酶標(biāo)儀，于570 nm及630 nm進行檢測。

1.2.2 前列通片的體內(nèi)抗腫瘤實驗根據(jù)體外實驗結(jié)果，選取PC-3前列腺癌腫瘤細胞進行培養(yǎng)，待細胞生長至對數(shù)期，消化計數(shù)，制成細胞懸液，調(diào)整細胞密度至2×107個/mL，于裸鼠左肩背部皮下注射細胞懸液，每只0.1 mL。待腫瘤長至5 mm左右，選取腫瘤大小較為均勻的50只荷瘤鼠，根據(jù)腫瘤大小隨機分成5組，模型（溶媒）對照組，陽性對照組，供試品高、中、低劑量組，10只/組。供試品高（4.08 g/kg）、中（2.04 g/kg）、低（1.02 g/kg）劑量組，模型（溶媒）對照(0.5% CMC-Na)組和陽性對照組（125 mg/kg）。灌胃體積均為20 mL/kg，1次/d，連續(xù)32 d。每周稱動物體質(zhì)量，每周測量腫瘤的長徑、短徑3次。實驗結(jié)束時，頸脫臼處死，剝離腫瘤稱重，拍照，完整剝離腫瘤稱重，計算腫瘤生長抑制率。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法對各組裸鼠的體質(zhì)量、腫瘤體積、腫瘤重量等指標(biāo)進行統(tǒng)計處理并列表說明；將原始數(shù)據(jù)以“x±s”表示，利用單因素方差分析進行模型（溶媒）對照組與其它給藥組間的差異顯著性檢驗。給藥組腫瘤生長抑制率≥40%，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 前列通片含藥血清體外抗腫瘤實驗前列通片含藥血清（濃度為20%，10%，5%）對PC-3細胞存活率分別為47.6%、87.2%、112.9%；對22RV1細胞的存活率分別為90.9%、89.6%、85.3%，對DU145細胞的存活率分別為82.7%、106.3%、100.4%。見表1。

3.2 前列通片的體內(nèi)抗腫瘤實驗與模型對照組比較，前列通片低劑量組腫瘤重量未見顯著降低，腫瘤生長抑制率18.5%，前列通片中、高劑量組及陽性對照組腫瘤重量顯著降低（P＜0.05），腫瘤生長抑制率分別為40.3%、23.8%、62.6%。且前列通片中劑量組和陽性對照組腫瘤生長抑制率大于40%。見表2。

表1 前列通片含藥血清對三種前列腺癌體外抗腫瘤活性（♂，x±s）Table 1The inhibitive effect in vitro of the 3 strains of prostate cancer cells with Qianlietong tablets containing serum（♂，x±s）

表2 前列通片對PC-3荷瘤裸鼠腫瘤重量及腫瘤生長抑制率（♂，x±s）Table 2 The effect of Qianlietong tablets containing serum on tumor weight and tumor growth inhibition rate of PC tumor-bearing nude mice（♂，x±s）

3 討論

近年來，我國前列腺癌的發(fā)病率呈現(xiàn)明顯持續(xù)增長趨勢，前列腺癌正成為嚴重影響我國男性健康的泌尿系惡性腫瘤，有研究顯示1998～2008年中國男性前列腺癌發(fā)病率的年均增加比例為12.07%[4]。中醫(yī)藥在前列腺癌的治療領(lǐng)域尚屬起步階段，在提高患者生活質(zhì)量、延緩腫瘤轉(zhuǎn)移與進展方面有巨大潛力與發(fā)展前景，目前較多醫(yī)家認可前列腺癌主要的病因病機腎氣虧虛、瘀血敗精聚積下焦，而病變初期多為濕熱下注、濕熱蘊結(jié)，治宜清熱解毒、利濕散結(jié)[5]。司富春等[6]研究表明前列腺癌用藥頻數(shù)最高的藥物集中在補虛藥、清熱藥、利水滲濕藥和活血化瘀藥。前列通片主要由廣東王不留行，黃芪，車前子，關(guān)黃柏，兩頭尖，蒲公英，澤蘭，琥珀，八角茴香油，肉桂油等組成，具有清利濕濁，化瘀散結(jié)的功能，與前列腺癌病變初期的病機相符，其組成主要由補虛藥與清熱藥組成，與前列腺癌用藥頻數(shù)最高的藥物也相符。本實驗研究也證實了前列通片含藥血清對PC-3細胞抑制效果較為明顯，2.04 g/kg的前列通片對PC-3前列腺癌裸鼠移植瘤的有一定的抑制作用。

綜上所述，本實驗提示前列通片應(yīng)用于治療前列腺癌可能有一定的效果，但是尚需進一步的研究證實。

參考文獻

[1]刑益元,葉木榮,廖慧芳，等.前列通片的藥理作用研究[J].中藥材，1998，21（9）：469-472.

[2]田少鵬,梁海清,倪依東，等.前列通片對前列腺增生的抑制作用[J].中草藥,2005,36（10）：1538-1539,1568.

[3]胡俊丹,胡云飛,吳洋，等.國人前列腺炎、前列腺增生與前列腺癌的關(guān)系[J].臨床泌尿外科雜志,2008,23（4）：294-296.

[4]韓蘇軍,張思維,陳萬青，等.中國前列腺癌發(fā)病現(xiàn)狀和流行趨勢分析[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2013,18（4）：330-334.

[5]蘇淼毅,程惠華.中醫(yī)藥治療前列腺癌的新進展[J].環(huán)球中醫(yī)藥，2012，5（2）：152-156.

[6]司富春，杜超飛.前列腺癌的中醫(yī)證候和方藥規(guī)律分析[J].中華中醫(yī)藥雜志,2015,30(2)：581-585.

Effect of Qianlietong tablets on inhibition of tumor cell growth

Wu Yan-mei，Wu Gang，Yin Zhen
（Guangzhou Baiyunshan Zhongyi Pharmaceutical Co.,Ltd，Guangzhou，Guangdong，510530,China）

ObjectiveTo observe the effect of Qianlietong tablets on inhibition of tumor cell growth.MethodsObserve the inhibitive effect in vitro of the 3 strains of prostate cancer cells with Qianlietong tablets containing serum.According to the experimental results,80 PC-3 tumor bearing nude mice were produced.50 tumor bearing nude mice which the tumor diameter was about 100mm were randomly divided into model control group,positive control group,Qianlietong low,medium and high dose groups,10 rats in each group.Each animal was administered orally in accordance with the volume of 20 mL/kg,1 times/day,32 days in a row.ResultsQianlietong tablets containing serum(concentration of 20%,10%,5%) on PC-3 cell survival rate were 47.6%,87.2%,112.9%,on 22 RV1 cell survival rate were 90.9%,89.6%,85.3%,on DU 145 cell survival rate were 82.7%,106.3%,100.4%.Compared with the model control group,the tumor growth inhibition rate of the low dose group was 18.5%.The tumor weight of the high dose group and the positive control group was significantly decreased(P＜0.05).The tumor growth inhibition rate was 40.3%, 23.8%,62.6%,respectively.ConclusionUnder the experimental conditions,Qianlietong tablets containing serum on PC-3 cell inhibitory effect is more obvious.Qianlietong tablets has a certain inhibitory effect on the prostate cancer with PC-3 in nude mice.

Qianlietong tablets；Prostatic cancer；PC-3；Tumor growth inhibition rate

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.18.011

尹震，E-mail：will_yuchen@163.com