尖銳濕疣復(fù)發(fā)患者的細(xì)胞因子及淋巴細(xì)胞亞群的變化規(guī)律研究

莫友 王建琴 方銳華 吳江 許劍榮 李群

尖銳濕疣復(fù)發(fā)患者的細(xì)胞因子及淋巴細(xì)胞亞群的變化規(guī)律研究

莫友1王建琴2*方銳華1吳江1許劍榮1李群1

目的探討尖銳濕疣復(fù)發(fā)患者的細(xì)胞因子及免疫功能的變化規(guī)律。方法選取我院皮膚科收治的87例尖銳濕疣患者。將患者分為初發(fā)組與復(fù)發(fā)組。初發(fā)組48例，復(fù)發(fā)組39例，選取同期體檢的42名健康者作為對照組。對3組人員的血清細(xì)胞因子IL?2、IL?4、IL?6及外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD8+、CD4+/CD8+分布水平進(jìn)行檢測及統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果3組患者的IL?2、IL?4、IL?6、CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞、CD4+/CD8+水平之間比較差異均具有顯著性（P＜0.05）。兩兩比較后發(fā)現(xiàn)，復(fù)發(fā)組患者的血清IL?2、IL?6、CD4+細(xì)胞、CD4+/CD8+水平均顯著低于初發(fā)組與對照組（P＜0.05），血清IL?4、CD8+細(xì)胞水平均顯著高于初發(fā)組與對照組（P＜0.05）；初發(fā)組患者的血清IL?2、IL?4、IL?6、CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞、CD4+/CD8+水平與對照組比較差異均無顯著性（P＞0.05）。結(jié)論尖銳濕疣復(fù)發(fā)患者存細(xì)胞免疫功能的失衡，細(xì)胞免疫功能低下可能是導(dǎo)致其反復(fù)發(fā)作的一個(gè)原因。

尖銳濕疣；細(xì)胞免疫；人類乳頭瘤病毒；細(xì)胞因子；T細(xì)胞亞群

尖銳濕疣（condyloma acuminatum，CA）是感染人乳頭瘤病毒（HPV）所致的良性增生性的性傳播疾病，發(fā)病率一直居高不下，并有逐年增高的趨勢［1，2］。尖銳濕疣也是肛腸醫(yī)生和泌尿外科醫(yī)生的頭痛問題，多年來在多科合作治療下，這個(gè)問題仍未解決。據(jù)研究表明［3，4］，HPV的重復(fù)感染與患者機(jī)體細(xì)胞免疫功能低下有關(guān)，患者無法有效產(chǎn)生特異的局部抗HPV的細(xì)胞免疫反應(yīng)。HPV在人體潛伏和復(fù)發(fā)的機(jī)制尚不清楚，除了病毒本身的因素外，細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)在尖銳濕疣復(fù)發(fā)患者的發(fā)病中可能起著一定的作用。我們檢測了尖銳濕疣患者外周血淋巴細(xì)胞中IL?2、IL?4、IL?6及外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的表達(dá)水平，以探討初發(fā)、復(fù)發(fā)HPV感染患者之間細(xì)胞免疫功能的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象

選取我院皮膚科2014年8月至2016年6月收治的87例CA患者，所有患者均符合衛(wèi)生部防疫司1991年制定的尖銳濕疣診斷標(biāo)準(zhǔn)。將患者分為初發(fā)組與復(fù)發(fā)組（復(fù)發(fā)組：患者去除疣體后，3個(gè)月內(nèi)有新生疣體再次出現(xiàn)）。初發(fā)組患者48例，復(fù)發(fā)組患者39例。初發(fā)組：男27例，女21例，年齡21?52歲，平均年齡（31.89±9.48）歲，病程1周?3個(gè)月，平均病程為（1.05±0.87）月；復(fù)發(fā)組：男22例，女17例，年齡22～50歲，平均年齡（32.67±8.42）歲，病程3個(gè)月～24月，平均病程為（4.58±2.47）月，發(fā)病次數(shù)在2?8次之間，平均發(fā)病次數(shù)為（4.58± 2.47）次。選取同期來我院進(jìn)行體檢的42名健康體檢者作為對照組，所有人員1個(gè)月內(nèi)均沒有感染性疾病，其中男性24例，女性18例，年齡20～52歲，平均年齡（32.14±10.21）歲。三組患者性別、年齡等比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑人白介素?2（Interleukin?2，IL?2）、人白介素?4（Interleukin?4，IL?4）、人白介素?6（Interleukin?6，IL?6）專用ELISA試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）；KHB ST?360型全自動(dòng)酶標(biāo)儀（上?？迫A公司）；FACSCalibur流式細(xì)胞儀（美國Becton Dickinson公司）；Simultest IMK?Lympho?cyte雙色淋巴細(xì)胞亞群分析試劑盒（美國Becton Dickinson公司）。

1.2.1 細(xì)胞因子檢測方法3組患者均抽取空腹靜脈血5mL，新鮮外周血采用肝素鈉抗凝，放入離心機(jī)，采用2000 r/min轉(zhuǎn)速，離心15min后取血清進(jìn)行無菌分裝，置于冰箱冷凍（-20℃）保存。按照試劑盒說明書操作步驟，運(yùn)用ELISA法對兩組人員的IL?2、IL?4、IL?6進(jìn)行檢測。

1.2.2 T淋巴細(xì)胞亞群檢測方法3組患者均抽取空腹靜脈血2mL，加入肝素鈉抗凝，置于恒溫箱避光孵育20min，加入紅細(xì)胞裂解液2mL充分混勻，靜置5min，放入離心機(jī)，采用1000 r/min轉(zhuǎn)速，離心5min，棄去上清液，加入磷酸緩沖鹽溶液（PBS）2mL洗滌1次，再加入PBS液0.45mL混勻檢測。采用美國Becton Dickinson公司生產(chǎn)的FACSCalibur型流式細(xì)胞儀對其檢測，采用Flowjo（v7.6.2）軟件對檢測數(shù)據(jù)加以分析。

1.3 分析方法

采用軟件SPSS 19.0對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，檢測結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間均數(shù)比較采用F分析；多組間均數(shù)兩兩比較采用LSD?t檢驗(yàn)法，檢驗(yàn)P值，當(dāng)P＜0.05，為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

3組患者的血清IL?2、IL?4、IL?6、CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞、CD4+/CD8+水平之間比較差異均具有顯著性（P＜0.05），見表1。進(jìn)行兩兩比較后發(fā)現(xiàn)，復(fù)發(fā)組患者的血清IL?2、IL?6、CD4+細(xì)胞、CD4+/ CD8+水平均顯著低于初發(fā)組與對照組（P＜0.05），血清IL?4、CD8+細(xì)胞水平均顯著高于初發(fā)組與對照組（P＜0.05）；初發(fā)組患者的血清IL?2、IL?4、IL?6、CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞、CD4+/CD8+水平與對照組比較差異均無顯著性（P＞0.05），見表2。

表1 各組受試者血清IL?2、IL?4、IL?6、CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞、CD4+/CD8+水平比較

表1 各組受試者血清IL?2、IL?4、IL?6、CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞、CD4+/CD8+水平比較

組別初發(fā)組復(fù)發(fā)組對照組n 48 39 42 F P IL?2 /pg·mL-122.20±8.82 33.87±4.89 22.66±8.12 27.666 0.000 IL?4 /pg·mL-116.11±2.57 9.33±2.63 14.67±2.81 63.281 0.000 IL?6 /pg·mL-18.42±2.17 12.53±2.11 8.04±2.90 41.667 0.000 CD4+/% 38.87±5.87 44.97±5.84 38.17±5.51 18.574 0.000 CD8+/% 36.88±5.01 29.47±5.33 36.33±4.22 28.345 0.000 CD4+/CD8+/% 1.17±0.33 1.68±0.32 1.08±0.27 44.855 0.000

表2 各組受試者的血清IL?2、IL?4、IL?6、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平兩兩比較

3 討論

尖銳濕疣治療后極易復(fù)發(fā)，病情反復(fù)不愈是治療此病的最大難題。HPV反復(fù)感染的原因是由于機(jī)體不能建立有效的免疫反應(yīng)，尤其是局部細(xì)胞免疫反應(yīng)，且亞臨床感染的存在是尖銳濕疣復(fù)發(fā)的重要因素［5，6］。HPV感染機(jī)體組織細(xì)胞，尖銳濕疣發(fā)生后表皮與真皮內(nèi)局部發(fā)生的細(xì)胞免疫，主要表現(xiàn)在角質(zhì)形成細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞浸潤和朗格漢斯細(xì)胞數(shù)量發(fā)生變化。Th1細(xì)胞可以分泌IL?1、IL?2等，主要介導(dǎo)機(jī)體細(xì)胞免疫反應(yīng)與炎癥反應(yīng)，Th2細(xì)胞可以分泌IL?4、IL?6等，主要介導(dǎo)機(jī)體體液免疫反應(yīng)。CD4+細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子均參與發(fā)病，CA復(fù)發(fā)患者可能存在一定程度的細(xì)胞免疫缺陷。CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞的數(shù)量與CD4+/ CD8+的比值是衡量細(xì)胞免疫的重要指標(biāo)［7，8］。有學(xué)者認(rèn)為，尖銳濕疣患者淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量與功能可發(fā)生異常改變，并且Th1/Th2的失衡可能是造成尖銳濕疣反復(fù)發(fā)作的一個(gè)重要因素［8，9］。

本研究結(jié)果表明，復(fù)發(fā)組患者的血清IL?2、IL?6、CD4+、CD4+/CD8+水平均顯著低于初發(fā)組與對照組（P＜0.05），血清IL?4、CD8+細(xì)胞水平均顯著高于初發(fā)組與對照組（P＜0.05）。發(fā)生這一現(xiàn)象的機(jī)制可能為：①IL?2能夠促進(jìn)NK細(xì)胞活性增強(qiáng)；②IL?2還能夠促進(jìn)淋巴因子活化，從而增強(qiáng)殺傷細(xì)胞的活性。進(jìn)而提升其破壞病毒感染的靶細(xì)胞的能力。由于尖銳濕疣患者IL?2表達(dá)水平較為低下，其促進(jìn)NK細(xì)胞活化的能力不足，并且促進(jìn)淋巴因子活化殺傷細(xì)胞的能力也隨之降低，從而導(dǎo)致機(jī)體溶解與破壞病毒感染的靶細(xì)胞的綜合能力降低，從而造成尖銳濕疣的復(fù)發(fā)。本研究發(fā)現(xiàn)，初發(fā)組與對照組的指標(biāo)比較有一定變化，但I(xiàn)L?2、IL?4、IL?6、CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞、CD4+/CD8+水平與對照組比較，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異均無顯著性（P＞0.05），發(fā)生這一現(xiàn)象的原因可能是尖銳濕疣初發(fā)患者的細(xì)胞免疫功能可能在病毒活躍、復(fù)制的刺激下會(huì)有一定程度的改變，但是由于對病毒的免疫反應(yīng)尚未建立，因此血清中細(xì)胞因子及T淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量改變無明顯差異。

綜上，尖銳濕疣復(fù)發(fā)患者存在一定程度的細(xì)胞免疫功能的失衡，并且隨著病情的反復(fù)失衡狀態(tài)愈加嚴(yán)重。但機(jī)體免疫功能的正常維持，是一個(gè)錯(cuò)綜復(fù)雜過程，是各因素之間互相制約和調(diào)節(jié)的結(jié)果。因此，對于尖銳濕疣患者細(xì)胞因子及CD4+/CD8+淋巴細(xì)胞極化的變化在尖銳濕疣病程中的作用尚待進(jìn)一步研究。

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Study on the changes of cytokines and lym phocyte subsets in recurrent patientsw ith condyloma acum inatum

MO You，WANG Jianqin，F(xiàn)ANG Yuehua，WU Jiang，XU Jianrong，LIQun.1Depart?ment ofDermatology，Guangzhou First People′s Hospital，Guangzhou，510180；2Guangzhou Institute of Dermatology，Guangzhou 510095，China.Corresponding author：WANG Jianqin，jianqinwang@tom.com

Objective To investigate the changes of cytokines and immune function in patients with recurrent condyloma acuminatum.M ethods A total of 87 patients with condyloma acuminatum were included in this study，and were assigned to two groups，primary group（n=48），recurrent groups（n=39）.Another 42 healthy subjects were selected as controls（control group）.The peripheral blood levels of CD4+T?lymphocyte，CD8+T?lymphocyte，CD4+/CD8+ratio and the levels of IL?2，IL?4，IL?6 were detected and analyzed statistically.Results There were significant differences in the levels of IL?2，IL?4，IL?6，CD4+T?lymphocyte，CD8+?T lymphocyte，CD4+/CD8+ratio between the three groups（all P valueswere less than 0.05）.Serum IL?2，IL?6，CD4+/CD8+ratio in the patientswith relapsewere sig?nificantly lower than those in the control group（all P valueswere less than 0.05）.Therewas no signifi?cant difference in serum IL?2，IL?4，IL?6，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+levels between the initial group and the control group（all P valuesweremore than 0.05）.Conclusion In patientswith recurrent condylo?ma acuminatum，there is an imbalance of cellular immune function，and this cellular immune dysfunc?tionmay be a cause of recurrentattacks

condyloma acuminata；cellular immunity；human papillomavirus；cytokines；T cell subsets

R759.5

A

10.3969/j.issn.1009?976X.2017.03.029

2017?04?25）

1510180廣州廣州市第一人民醫(yī)院皮膚科；2510095廣州廣州市皮膚防治所

*通訊作者：王建琴，Email：jianqinwang@tom.com