TGF-β1、PTEN在口腔鱗癌組織中的表達及意義①

楊永超，段 峰，張 璇

(1.佳木斯大學(xué)研究生學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007；2.佳木斯大學(xué)附屬第二醫(yī)院口腔醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154002)

TGF-β1、PTEN在口腔鱗癌組織中的表達及意義①

楊永超1，段 峰2，張 璇1

(1.佳木斯大學(xué)研究生學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007；2.佳木斯大學(xué)附屬第二醫(yī)院口腔醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154002)

目的：檢測TGF-β1及PTEN蛋白在口腔鱗癌(OSCC)和口腔癌旁正常組織中的表達，旨在探討兩者在OSCC發(fā)展過程中可能存在的機制。方法：采用免疫組化SABC法，檢測51例口腔鱗癌組織和18例口腔癌旁正常組織樣本中TGF-β1及PTEN蛋白的表達情況。結(jié)果：TGF-β1及PTEN在OSCC組織和癌旁正常組織中均有表達，TGF-β1在OSCC組織及癌旁正常組織中的表達率為67.2%、16.7%(P<0.05)；而PTEN表達率分別為39.2%、77.8%(P<0.05)；TGF-β1、PTEN在OSCC組織中的陽性率與年齡、性別以及吸煙指數(shù)無關(guān)(P>0.05)，但與臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)；PTEN的陽性率還與分化程度有關(guān)(P<0.05)；且TGF-β1與PTEN的表達呈負相關(guān)(r=-0.295，P<0.05)。結(jié)論:TGF-β1的高表達和PTEN的低表達可能與OSCC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，并有可能成為OSCC的臨床診斷依據(jù)。

TGF-β1；PTEN；口腔鱗癌

口腔鱗狀細胞癌(oralsquamouscellcarcinomaOSCC)是口腔頜面部最常見惡性腫瘤，比例約占90%[1]。雖然OSCC的臨床效果已逐漸提高，然而總的5年生存率卻很低。擴散和轉(zhuǎn)移是影響惡性腫瘤患者生存時間和生存質(zhì)量的主要因素之一[2]，其生存率高度依賴于腫瘤的診斷階段。轉(zhuǎn)化生長因子β1 (TGF-β1)一個調(diào)節(jié)細胞生長與分化、細胞凋亡的多功能因子，具有調(diào)節(jié)腫瘤生長等作用。第10染色體同源缺失性磷酸酶-張力蛋白基因(PTEN)是一種抑癌基因，在多種腫瘤中出現(xiàn)表達下調(diào)和缺失現(xiàn)象，提示PTEN在腫瘤的發(fā)展過程中可能起抑制作用。本實驗通過SABC法分別檢測在OSCC、癌旁正常組織中TGF-β1及PTEN的表達情況，旨在探討兩者在OSCC發(fā)展過程中可能存在的機制，進一步為臨床診斷治療提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

標本來源于2014-08～2016-03佳木斯大學(xué)附屬口腔醫(yī)院口腔頜面外科手術(shù)切除并且術(shù)后病理診斷為OSCC的成年患者，共51例。其中男30例，女21例；年齡>60歲組織標本31例；≤60歲組織標本20例；按照TNM分類標準進行臨床分期，Ⅰ～Ⅱ期33例，Ⅲ～Ⅳ期18例；伴有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例，未見淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37例；按照2005年WHO制定的標準分為高-中分化41例，低分化10例；吸煙指數(shù)≤400有29例，>400有22例。另取18例癌旁正常組織，并經(jīng)HE染色，鏡下觀察證明無任何黏膜疾病。上述患者均有完整的臨床病理學(xué)資料，術(shù)前3個月內(nèi)均未接受放化療治療。

1.2 試劑

兔抗人TGF-β1、PTEN親和純化抗體，SABC檢測試劑盒以及DAB顯色試劑盒，均購于武漢博士德生物有限公司。

1.3 免疫組化檢測

組織標本全部均經(jīng)10%福爾馬林固定；常規(guī)石蠟包埋后按照4μm厚度作連續(xù)切片；抗原熱修復(fù)；SABC法染色(染色步驟嚴格按照試劑盒說明書進行操作)。在相同條件下與已知的陽性切片作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。

1.4 結(jié)果判定

標本組織細胞中出現(xiàn)黃色或黃褐色為陽性著色。TGF-β1的表達產(chǎn)物位于細胞質(zhì)及細胞核中；PTEN的表達產(chǎn)物位于細胞質(zhì)及細胞膜中。本實驗結(jié)果根據(jù)標本切片的著色強度以及陽性細胞數(shù)在總細胞數(shù)中的占比這兩方面進行綜合分析判定。判定OSCC細胞的著色強度：無著色(-)，淡黃色(+)，黃色()，黃褐色()。判定陽性O(shè)SCC細胞占比：400倍顯微鏡下在切片中隨機選擇5個細胞視野，陽性細胞占比≤10%(-)，11%～25%(+)，26%～49%()；≥50%()；(-)、(+)、()、()分別代表0分、1分、2分、3分。每張切片的總分按著色強度與陽性細胞百分比兩項分值相加得出。陰性(<2分)，陽性(≥2分)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS21.0軟件，采用卡方進行組間數(shù)據(jù)比較；使用Spearman秩相關(guān)檢驗分析指標之間的關(guān)系。均以α=0.05為檢驗標準。

2 結(jié)果

2.1TGF-β1、PTEN在OSCC、癌旁正常組織中的表達

TGF-β1蛋白、PTEN蛋白在OSCC組織中陽性表達率分別為62.7%(32/51)、39.2%(20/51)；在癌旁正常組中陽性表達率為16.7%(3/18)、77.8%(14/18)。組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 TGF-β1、PTEN在OSCC組織中的表達與病理因素之間的關(guān)系

與同組比較*P>0.05，與同組比較**P<0.05，a患者手術(shù)時的中位年齡。

免疫組化SABC法檢測OSCC組織中TGF-β1、PTEN的表達，見圖1～2。

圖1TGF-β1(× 400)

圖2 PTEN (× 400)

2.2TGF-β1、PTEN在OSCC組織中的表達與病理因素之間的關(guān)系

TGF-β1、PTEN在OSCC組織中陽性表達率與年齡、性別以及吸煙指數(shù)無關(guān)(P>0.05)，與臨床分期、頸淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。PTEN的陽性率還與分化程度有關(guān)(P<0.05)。見表1。

2.3TGF-β1、PTEN在OSCC組織中表達關(guān)系

在51例OSCC組織標本中，TGF-β1與PTEN同時為陽性和陰性表達的分別為9例，8例；TGF-β1陽性表達，PTEN為陰性表達為23例；TGF-β1陰性表達，PTEN為陽性表達為11例。聯(lián)合檢測TGF-β1、PTEN在OSCC組織中的表達水平，兩者呈負相關(guān)關(guān)系(r=-0.295，P<0.05)，見表2。

表2 TGF-β1、PTEN在OSCC組織中表達關(guān)系

3 討論

轉(zhuǎn)化生長因子(transforminggrowthfactor,TGF)β是一組調(diào)節(jié)細胞生長與分化、細胞凋亡的多功能生長因子家族，在腫瘤的形成等過程中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)規(guī)范的TGF-β途徑主要是通過Smad蛋白的表達完成信號傳導(dǎo)；而非規(guī)范TGF-β信號通路是通過MAPK信號通路完成傳導(dǎo)，在細胞遷移以及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中此信號通路具有至關(guān)重要的作用[3]。TGF-β1是TGF-β家族中重要成員之一，研究表明TGF-β1可調(diào)節(jié)細胞周期，促進血管生成以及腫瘤細胞的免疫逃逸[4，5]。在腫瘤的形成過程中TGF-β1發(fā)揮著相反的作用：在腫瘤生長早期，TGF-β1可作為腫瘤的抑制物，使腫瘤細胞生長停止，抑制腫瘤發(fā)展；但隨著腫瘤的進展，TGF-β1成為促進腫瘤生長的促進因子，促進腫瘤的生長，浸潤和轉(zhuǎn)移[6]。本實驗結(jié)果顯示TGF-β1在OSCC組中的陽性表達率為62.7%，而癌旁正常組為16.7%(P<0.05)，可見TGF-β1蛋白表達是下調(diào)的，提示TGF-β1可能促進OSCC的發(fā)生。在不同TNM分期中，TGF-β1蛋白的表達量分別Ⅰ～Ⅱ為51.5%，Ⅲ～Ⅳ為83.3%(P<0.05)；同時伴頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中其陽性表達率(85.7%)明顯高于頸淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組(54.1%)(P<0.05)，表明TGF-β1表達率升高與腫瘤的臨床分期、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示其可作為判斷病情進展的一個依據(jù)。但TGF-β1在OSCC組織中的表達與年齡、性別以及吸煙指數(shù)均無關(guān)(P>0.05)。有文獻報道[7]，TGF-β1蛋白的高表達與分化程度相關(guān)。本實驗對不同分化程度的OSCC組織進行分析，發(fā)現(xiàn)低分化組的TGF-β1蛋白陽性表達率(80.0%)比高-中分化組(58.5%)高，但差異無顯著性(P>0.05)，此結(jié)果可能受抗體稀釋濃度、實驗步驟等多種因素影響。

第10染色體同源缺失性磷酸酶-張力蛋白基因(PTEN)是被發(fā)現(xiàn)的第一個具有雙重磷酸酶活性的腫瘤抑制基因。研究發(fā)現(xiàn)PTEN蛋白具有蛋白性磷酸酯酶活性，通過選擇性抑制有絲分裂原激活蛋白激酶MAPK途徑，使細胞生長阻滯于G1期，抑制腫瘤細胞的生長，促進其程序性細胞死亡。同時還具有脂質(zhì)磷酸酶活性，構(gòu)成了PI3K/PTEN/AKT通路，從而抑制細胞增殖分化，調(diào)節(jié)細胞凋亡[8]。近十余年來，研究發(fā)現(xiàn)PTEN可通過抑制血管生成、抑制細胞外基質(zhì)降解、促進細胞分化等作用抑制腫瘤生成。PTEN蛋白的表達下降、缺失大多是在腫瘤進展的后期階段被發(fā)現(xiàn)，如子宮頸癌[9]等。本實驗結(jié)果顯示，在OSCC組中PTEN的陽性表達率為39.2%，明顯低于癌旁正常組(77.8%)(P<0.05)，提示PTEN蛋白表達降低或缺失可能促使細胞突變。在TNM分期中PTEN蛋白的表達率分別Ⅰ～Ⅱ為51.5%，Ⅲ～Ⅳ為16.7%(P<0.05)，表明PTEN的表達與OSCC的浸潤程度相關(guān)；發(fā)現(xiàn)OSCC分化程度降低，PTEN的陽性率也降低，低分化PTEN的陽性率為10% ，高-中分化陽性率為46.3%(P<0.05)，提示PTEN蛋白表達下調(diào)可能加劇了口腔鱗癌的惡化進程。同時無頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的OSCC中PTEN蛋白表達率(48.6%)高于有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(14.3%)，提示PTEN蛋白表達降低或缺失使OSCC易于轉(zhuǎn)移。此外PTEN在OSCC組織中的表達與年齡、性別以及吸煙指數(shù)皆無關(guān)(P>0.05)。以上結(jié)果與有關(guān)學(xué)者[10]在非小細胞肺癌組織中關(guān)于PTEN的研究相似。同時對TGF-β1、PTEN在OSCC組織中的表達水平進行聯(lián)合統(tǒng)計分析后，發(fā)現(xiàn)兩者呈負相關(guān)關(guān)系(r=-0.295，P<0.05)，兩者在OSCC組織中的表達具有拮抗性。推測在OSCC中TGF-β1可能是通過MAPK信號途徑來調(diào)節(jié)PTEN的表達，TGF-β1對PTEN的生成起到負向調(diào)節(jié)作用，使PTEN的抑癌作用減弱。

綜上所述，本實驗可得出TGF-β1在OSCC中呈高表達，而PTEN呈低表達，且與部分臨床病理因素關(guān)系密切，并且兩者的表達水平在口腔鱗癌組織中呈負相關(guān)；通過聯(lián)合檢測分析TGF-β1與PTEN在OSCC中的表達情況，對OSCC的臨床診斷具有一定的意義，有助于指導(dǎo)臨床治療，兩者有望成為診斷口腔鱗癌的檢測因子。

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佳木斯大學(xué)研究生科技創(chuàng)新項目，編號:LM2015-040。

楊永超(1990～)男，安徽馬鞍山人，在讀碩士研究生。

段峰(1972～)男，黑龍江齊齊哈爾人，學(xué)士，副教授，副主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:duanffeng60@sohu.com。

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1008-0104(2017)03-0072-03

2016-12-08)