終末期腎病患者高遷移率族蛋白-1與晚期氧化蛋白產(chǎn)物的研究①

滿中敏，劉艷姝，郭彩霞, 鮑江波

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，黑龍江 佳木斯 154003)

終末期腎病患者高遷移率族蛋白-1與晚期氧化蛋白產(chǎn)物的研究①

滿中敏，劉艷姝，郭彩霞, 鮑江波

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，黑龍江 佳木斯 154003)

目的:觀察終末期腎病(ESRD)患者血清高遷移率族蛋白-1 (HMGB-1)、超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)水平并評(píng)價(jià)其相關(guān)性。方法:選取ESRD患者60例(30例非血液透析和30例MHD治療患者：按透析齡分為長(zhǎng)期組、短期組)和30例健康體檢者。酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)檢測(cè)HMGB-l、AOPP，并記錄一般臨床資料。結(jié)果:①ESRD非血液透析組、MHD組與對(duì)照組相比，HMGB-1、hs-CRP、AOPP水平均增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。②MHD組與ESRD非血液透析組相比，HMGB-1、hs-CRP、AOPP水平均增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。③MHD長(zhǎng)期組與短期組相比，HMGB-1、hs-CRP、AOPP水平均增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。④相關(guān)性分析，在ESRD組中，血清HMGB-1水平與hs-CRP水平(r=0.762,P<0.01)呈正相關(guān)；血清AOPP水平與hs-CRP水平(r=0.843 ,P<0.01)呈正相關(guān)。結(jié)論：終末期腎病患者體內(nèi)存在微炎癥及氧化應(yīng)激狀態(tài)，血液透析會(huì)加重這種狀態(tài)，并且隨著透析齡的增高這種狀態(tài)越來(lái)越嚴(yán)重。

終末期腎病;HMGB-1;hs-CRP;AOPP;血液透析

現(xiàn)代腎臟替代療法使ESRD患者的生活質(zhì)量顯著提高,存活時(shí)間大大延長(zhǎng)(可長(zhǎng)達(dá)20余年)。MHD治療是ESRD患者最常見(jiàn)的替代治療方式之一，長(zhǎng)期MHD治療所引起的并發(fā)癥十分常見(jiàn)[l]。微炎癥和高氧化應(yīng)激均與ESRD的許多并發(fā)癥及其預(yù)后都緊密相關(guān)。因此，研究ESRD患者微炎癥及氧化應(yīng)激水平并積極干預(yù) ,對(duì)于延緩ESRD的進(jìn)展及其并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展極為重要。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015-09～2016-09在佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科就診的終末期腎病患者60例，其中未行血液透析治療患者30例(男15例，女15例)及MHD治療患者30例(男14例，女16例)。未行血液透析治療患者的原發(fā)病為：慢性腎小球腎炎(13例)糖尿病腎病(10例)高血壓腎損害(5例)多囊腎(2例)，MHD治療患者，長(zhǎng)期組15例原發(fā)病為：慢性腎小球腎炎(7例)糖尿病腎病(6例)高血壓腎損害(2例)；短期組15例原發(fā)病為：慢性腎小球腎炎(5例)糖尿病腎病(5例)高血壓腎損害(2例)間質(zhì)性腎炎(1例)痛風(fēng)性腎病(1例)病因未明(1例)。終末期腎病的診斷標(biāo)準(zhǔn)按照NKF—K/DOQI標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷和分期。排除近期發(fā)生過(guò)明顯感染或傳染性疾病；惡性腫瘤；結(jié)締組織疾病者；腎移植者；近期使用激素或免疫抑制劑；不愿參與研究者。正常對(duì)照組為30例在佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院健康體檢者。

1.2 方法

1.2.1 血液透析

所有MHD患者均在佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科血液透析室透析，MHD治療每周3次，MHD時(shí)間每次4～4.5h。

1.2.2 一般情況及標(biāo)本的采集、檢測(cè)

記錄研究對(duì)象的一般情況：姓名、性別、年齡、體重及MHD患者的透析齡等。研究對(duì)象均在體檢時(shí)或者入院后次日晨空腹采外周靜脈血,離心后取血清保存待測(cè)HMGB-l、hs-CRP、AOPP水平。采用酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)檢測(cè)人高遷移率族蛋白B1 (HMGB-l)、晚期氧化蛋白產(chǎn)物AOPP。生化及血常規(guī)指標(biāo)在佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)完成。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組一般情況的比較

ESRD未血液透析組，MHD組與正常健康對(duì)照組比較，年齡、性別、體重水平，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。未血液透析組與MHD組相比，年齡、性別、體重、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、胱抑素C水平，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組間一般請(qǐng)況的比較±s)

2.2 各組間血清HMGB-1、hs-CRP、AOPP水平的比較

2.2.1MHD組、ESRD組(非血液透析組)與正常對(duì)照組相比，HMGB-1、hs-CRP、AOPP水平均增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MHD組與非血液透析組相比，HMGB-1、hs-CRP、AOPP水平均增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組血清HMGB-1、hs- CRP、AOPP水平的比較

注：與正常對(duì)照組比較，a1、a2P<0.05；與非血液透析組比較，bP<0.05。

2.2.2MHD組不同透析齡長(zhǎng)期組與短期組相比，HMGB-1、hs-CRP、AOPP水平均增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 MHD組不同透析齡長(zhǎng)期組與短期組HMGB-1、

2.3 各指標(biāo)相關(guān)性的分析

在ESRD組中，血清HMGB-1水平與hs-CRP水平(r=0.762 ,P<0.01)呈正相關(guān)；血清AOPP水平與hs-CRP水平(r=0.843 ，P<0.01)呈正相關(guān)。

3 討論

目前普遍認(rèn)為，各種原發(fā)及繼發(fā)性腎臟疾病本身就存在免疫功能的異常。腎間質(zhì)纖維化是各種腎臟疾病慢性進(jìn)展直至終末期的共同病理表現(xiàn)，同時(shí)也是所有腎臟疾病慢性發(fā)展的最終結(jié)果，涉及多種細(xì)胞、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞外基質(zhì)及其相互作用[2]。ESRD是各種慢性腎臟病的終末期，在腎臟功能下降及腎臟自身?yè)p害為前提下，機(jī)體免疫應(yīng)答已發(fā)生異常。2000年Schoming提出“微炎癥狀態(tài)”的概念以來(lái)，受到了廣泛關(guān)注。有研究表明，ESRD患者在未行MHD治療時(shí)，其腎臟病本身就能引起微炎癥狀態(tài)，主要因素是腎臟排泄及內(nèi)分泌功能的衰竭。一些研究同時(shí)也表明，MHD治療與這種微炎癥狀態(tài)存在相關(guān)性，考慮可能與透析膜生物不相容性，透析液的污染，透析血管通路的類(lèi)型及感染等有關(guān)，這些均會(huì)加重體內(nèi)微炎癥反應(yīng)。

C反應(yīng)蛋白是一種正相急性反應(yīng)蛋白，廣泛應(yīng)用于感染狀態(tài)的臨床檢測(cè)，隨著檢測(cè)技術(shù)的高速發(fā)展，以高靈敏度著稱(chēng)的超敏C反應(yīng)蛋白(highsensitiveC-reactiveprotein，hs-CRP)出現(xiàn)，是公認(rèn)的反映ESRD微炎癥狀態(tài)的最佳指標(biāo)。Oetega等[3]研究結(jié)果表明慢性腎衰竭患者在行透析治療前血清CRP水平就已經(jīng)升高，Yeun等[4]通過(guò)對(duì)MHD患者血清CRP的檢測(cè)，結(jié)果顯示其中30%高于正常。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)MHD以及ESRD未性血液透析患者血清hs-CRP檢測(cè)同時(shí)于正常對(duì)照組對(duì)比，分別為(10.48±2.78)mg/L、(5.56±1.01)mg/L、(2.02±0.20)mg/L，與上訴試驗(yàn)結(jié)果相符。本實(shí)驗(yàn)還創(chuàng)新性的分析了長(zhǎng)期透析組與短期透析組的hs-CRP分別為(12.90±1.65、8.07±0.89)mg/L，證實(shí)隨著透析齡的增加，微炎癥狀態(tài)逐漸加重。

高遷移率族蛋白-1(HMGB-1)廣泛存在于真核生物體細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，可作為轉(zhuǎn)錄和生長(zhǎng)因子的DNA結(jié)合蛋白，分子量為30kDa。近年來(lái)被作為組織損傷的促炎癥介質(zhì)，HMGB-1可由固有免疫細(xì)胞如巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞主動(dòng)分泌，當(dāng)受到內(nèi)毒素刺激時(shí)，HMGB-1可有受損及壞死的細(xì)胞被動(dòng)釋放，去激活和誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)。2008年Bruchfeld[5]對(duì)未開(kāi)始行血液透析的慢性腎臟病患者血清HMGB-1的檢測(cè)，并且與正常對(duì)照組相比,HMGB-1水平顯著升高，并且和hs-CRP呈顯著相關(guān)。本研究通過(guò)對(duì)ESRD患者包括(非血液透析和MHD)與正常健康對(duì)照組血清HMGB-1的對(duì)比，證明ESRD患者體內(nèi)存在微炎癥反應(yīng)，血液透析加重這種微炎癥狀態(tài)，隨著透析齡的增高更加明顯。與hs-CRP進(jìn)行相關(guān)性的分析，兩者成顯著相關(guān)，同樣與上訴實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符，再次證明了HMGB-1可以作為評(píng)價(jià)MHD患者微炎癥狀態(tài)的新指標(biāo)。

ESRD患者體內(nèi)大量代謝產(chǎn)物的蓄積，導(dǎo)致內(nèi)環(huán)境失衡，從而影響了氧自由基的清除。國(guó)內(nèi)外研究表明，由于血液透析過(guò)程中多種因素的影響，MHD患者較未行血液透析治療的ESRD患者氧化應(yīng)激狀態(tài)更為顯著。AOPP是 1996年Witko-Sarsat等[6]在慢性腎衰竭患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，隨后作為新型的尿毒癥毒素及評(píng)價(jià)氧化應(yīng)激的可靠指標(biāo)，受到廣泛關(guān)注。ESRD患者體內(nèi)AOPP水平顯著升高，伴隨腎功能的減退，慢性腎臟病患者體內(nèi)AOPP的潴留更加明顯，ESRD患者體內(nèi)AOPP水平較正常人增加2倍[7]。1998年Witko-Sarsat[8]等的研究結(jié)果顯示,MHD患者血清AOPP顯著升高。國(guó)內(nèi)研究同樣發(fā)現(xiàn)透析治療會(huì)升高ESRD血清AOPP的水平，相對(duì)于接受腹膜透析治療，MHD患者體內(nèi)AOPP水平升高更為顯著。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，MHD患者、ESRD未行血液透析患者血清AOPP分別為(85.40±11.72、44.12±6.16)umol/L高于正常對(duì)照組(21.19±3.14)umol/L，和上訴實(shí)驗(yàn)結(jié)論相符合。隨著透析齡的增加，AOPP的水平是增高的，MHD加重了氧化應(yīng)激狀態(tài)。同時(shí)通過(guò)對(duì)其與hs-CRP相關(guān)性分析，得出兩者呈正相關(guān),推測(cè)AOPP可能參與了炎癥反應(yīng)的進(jìn)程。

綜上所述，ESRD患者無(wú)論未行血液透析治療還是已接受MHD治療，HMGB-1、hs-CRP、AOPP均高于健康對(duì)照組，MHD會(huì)加重ESRD患者體內(nèi)的微炎癥和氧化應(yīng)激狀態(tài)，并且隨著透析齡的延長(zhǎng)這種狀態(tài)越來(lái)越嚴(yán)重。因此，積極控制ESRD患者體內(nèi)的微炎癥及高氧化應(yīng)激的狀態(tài)可能為減輕及減少其并發(fā)癥提供一個(gè)重要途徑。而HMGB-1、AOPP作為重要的炎癥及氧化應(yīng)激因子為這種可能提供了新的治療靶點(diǎn)。

[l]仇曉霜,蔡天蕊,趙春艷,等.維持性血液透析病人營(yíng)養(yǎng)管理前后的比較[J]．黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2013，36( 3) : 88-89

[2]劉艷姝，劉中柱，史為伍，等．活性維生素D3對(duì)UUO模型大鼠腎間質(zhì)骨形成蛋白 -7 表達(dá)的影響[J]． 黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2016，39(5):21-23

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A study of high mobility group box - 1 protein and advanced oxidized protein products in end-stage renal disease

MANZhong-min,LIUYan-shu,GUOCai-xia,BAOjiang-bo

(Department of Nephrology，the First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154003，China)

Objective: To observe the level of HMGB-1，hs-CRP and AOPP in patients with end-stage renal disease, and to analyze their relevance. Methods: Sixty patients with end-stage renal disease were enrolled (including 30 non-hemodialysis patients and 30 maintenance hemodialysis patients. MHD group was divided into long-term and short-term groups according to dialysis ages. )and 30 cases accepted healthy physical examination. Serum HMGB-1 and AOPP were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).And the general clinical data of patients were recorded. Result:①The levels of HMGB-1, hs-CRP and AOPP in the ESRD group (non-hemodialysis group and hemodialysis group) were higher than those in the normal control group，and the difference was statistically significant (P<0.05).②MHDandESRDgrousp(non-hemodialysisgroup)werecompared,andHMGB-1,hs-CRP,AOPPlevelswereincreased;andthedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05). ③Comparedthelong-termandshort-termgroup,HMGB-1,hs-CRP,AOPPlevelsinhemodialysisgroupwereincreased,andthedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05). ④ThecorrelationAnalysisinESRDgroup,serumHMGB-1levelsandandhs-CRPlevels(r=0.762,P<0.01)werepositivelycorrelated;andserumAOPPlevelsandhs-CRPlevels(r=0.843,P<0.01)werepositivelycorrelated. Conclusion: The presence of a high end-stage in micro-inflammation and oxidative stress in patients with renal failure, hemodialysis could aggravate this state, and this state could get worse with the extension of the duration of dialysis.

ESRD；HMGB-1；hs-CRP；AOPP；hemodialysis

佳木斯大學(xué)研究生科技創(chuàng)新項(xiàng)目，編號(hào)：YM2016-049。

滿中敏(1988～) 女，山東滕州人，在讀碩士研究生。

劉艷姝(1971～) 女，黑龍江佳木斯人，碩士，副主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail：liuyanshu1015@sina.com。

R

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1008-0104(2017)03-0050-03

2017-03-02)