直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者腫瘤組織CD44、CD166陽性表達的臨床意義

李幸

【摘要】 目的：探討直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者腫瘤組織中CD44與CD166陽性表達的臨床意義。方法：選取筆者所在醫(yī)院2013年1月-2016年12月筆者所在醫(yī)院收治146例直腸癌患者的腫瘤組織標(biāo)本，其中32例為肝轉(zhuǎn)移患者（轉(zhuǎn)移組），另外114例為未轉(zhuǎn)移患者（對照組），分別對各組樣本進行SP免疫組化染色法進行檢測，觀察兩組標(biāo)本組織中CD44、CD166陽性表達情況，并初步探討其陽性表達與患者腫瘤浸潤深度、腫瘤分化程度的相關(guān)性。結(jié)果：對照組和轉(zhuǎn)移組CD44陽性表達率分別為42.98%和71.87%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；對照組和轉(zhuǎn)移組CD166陽性表達率分別為36.84%和81.25%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；肝轉(zhuǎn)移患者中CD44和CD166陽性表達與浸潤深度有密切關(guān)系，腫瘤浸潤深度越深其陽性表達率越高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；而與分化程度無密切關(guān)聯(lián)。結(jié)論：CD44和CD166高陽性表達可作為直腸癌肝轉(zhuǎn)移的標(biāo)志性指標(biāo)，對直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者的早期診斷具有積極的作用，并且CD44和CD166高陽性表達與患者浸潤深度有密切的關(guān)系。

【關(guān)鍵詞】 直腸癌； 肝轉(zhuǎn)移； CD44； CD166； 陽性表達

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.17.014 文獻標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2017）17-0031-03

直腸癌是發(fā)生在齒狀線至直腸乙狀結(jié)腸交界處之間的癌，屬于消化道最常見的惡性腫瘤之一[1]。近年來隨著人們生活水平及飲食習(xí)慣的改變，直腸癌發(fā)病呈現(xiàn)出上升及年輕化趨勢，并且由于直腸癌發(fā)病位置較低且深入盆腔，雖較易診斷，但其解剖關(guān)系較為復(fù)雜，手術(shù)不易徹底清除，術(shù)后復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率較高，肝臟是直腸癌發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的主要靶器官之一，發(fā)生肝轉(zhuǎn)移后的直腸癌患者不僅病情更加復(fù)雜而且嚴(yán)重影響患者的治療及預(yù)后[2]。臨床研究顯示，單純直腸癌5年生存率約66%，而直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者3年生存率約12%[3]。早期的診斷與標(biāo)志物監(jiān)測對直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者的臨床治療與生命安全具有重要的意義與作用。CD44、CD166與直腸癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，為進一步探討二者在直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者腫瘤組織陽性表達的臨床意義，筆者針對146例直腸癌患者的腫瘤組織標(biāo)本（32例為肝轉(zhuǎn)移患者）進行研究探討，以為后期直腸癌患者肝轉(zhuǎn)移的臨床診斷提供基礎(chǔ)參考，現(xiàn)匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取筆者所在醫(yī)院2013年1月-2016年12月筆者所在醫(yī)院收治的146例直腸癌患者的腫瘤組織標(biāo)本，其中32例為肝轉(zhuǎn)移患者（轉(zhuǎn)移組），另外114例為未轉(zhuǎn)移患者（對照組），納入所有標(biāo)本對應(yīng)患者留取標(biāo)本前均未進行相關(guān)對應(yīng)治療，其中轉(zhuǎn)移組（32例）對應(yīng)患者男女比例（5∶3），年齡35～69歲，平均（58.29±9.46）歲，病程5～40個月，平均（20.63±10.96）個月；原發(fā)腫瘤大小：小于2 cm為6例，2～5 cm為11例，大于5 cm為15例；浸潤深度：T2 9例，T3 12例，T4 11例；分化程度：低分化腺癌17例，中分化腺癌10例，高分化腺癌5例；肝轉(zhuǎn)移部位：左側(cè)單葉4例，右側(cè)單葉11例，雙葉17例；轉(zhuǎn)移灶數(shù)量：單個6例，多個26例。對照組（114例）對應(yīng)患者男女比例（73∶41），年齡36～70歲，平均（56.87±8.92）歲，病程7～40個月，平均（21.47±11.58）個月；原發(fā)腫瘤大小：小于2 cm為15例，2～5 cm為32例，大于5 cm為67例；浸潤深度：T2 66例，T3 34例，T4 14例；分化程度：低分化腺癌63例，中分化腺癌39例，高分化腺癌12例。兩組患者性別、年齡、病程及浸潤深度等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）診斷明確且臨床病歷資料完整者；（2）經(jīng)CT、MRI或術(shù)中探查切除標(biāo)本病理檢查確診者；（3）患者年齡30～70歲者；（4）患者及其家屬對本研究知情并同意且簽署知情同意書者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他類型腫瘤者；（2）合并其他嚴(yán)重疾病或嚴(yán)重并發(fā)癥者；（3）惡性腫瘤既往病史者；（4）其他相關(guān)禁忌者。

1.3 方法

1.3.1 主要試劑 D44與CD166單抗；聚合物輔助劑；二抗CD44/CD166試劑盒；免疫組化SP染色試劑盒；標(biāo)記抗山羊辣根酶 IgG多聚體；小牛血清；PBS緩沖液； DAB試劑盒。

1.3.2 實驗方法 對所有標(biāo)本進行厚4 μm連續(xù)兩張切片，并進行載玻片平鋪，65 ℃條件下過夜處理。根據(jù)免疫組化SP染色試劑盒操作說明采用SP免疫組化染色法分別對D44與CD166進行檢測，采用二甲苯進行脫蠟處理后，采用酒精進行梯度脫水，蒸餾水沖洗完成后采用PBS浸泡5 min。于高壓下采用枸櫞酸緩沖液進行抗原修復(fù)，高壓鍋噴氣3 min，完成后室溫下進行冷卻。室溫下采用百分之三H2O2孵育10 min，PBS 液振蕩清洗3 min（重復(fù)3次），將CD44/CD166羊抗人抗體采用1∶150的比例進行滴定，37 ℃條件下孵育2 h，完成后PBS沖洗2 min（重復(fù)3次），完成后滴加聚合物輔助劑，于37 ℃條件下孵育

20 min后PBS沖洗2 min（重復(fù)3次），完成后進行標(biāo)記抗山羊辣根酶IgG多聚體滴加，37 ℃條件下孵育20 min，再進行PBS沖洗2 min沖洗（重復(fù)3次），完成后進行DAB顯色，顯微鏡下控制染色程度，完成后流水沖洗10 min，蘇木素復(fù)染2 min后予以鹽酸酒精進行分化，流水沖洗10 min返藍。最后酒精梯度脫水，二甲苯透明，中性樹膠進行封片。

1.4 觀察指標(biāo)

（1）觀察兩組標(biāo)本組織中CD44、CD166陽性表達情況；（2）肝轉(zhuǎn)移患者中CD44陽性表達與患者浸潤深度、分化程度的相關(guān)性；（3）肝轉(zhuǎn)移患者中CD166陽性表達與患者浸潤深度、分化程度的相關(guān)性。

1.5 陽性判定標(biāo)準(zhǔn)

（1）CD44與CD166陽性：細胞質(zhì)、上皮細胞膜呈棕黃色；（2）CD44與CD166陰性：切片無陽性細胞[4]。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

采用統(tǒng)計學(xué)處理軟件SPSS 19.0對研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組標(biāo)本組織中CD44、CD166陽性表達情況

對照組和轉(zhuǎn)移組CD44陽性表達率分別為42.98%和71.87%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；對照組和轉(zhuǎn)移組CD166陽性表達率分別為36.84%和81.25%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 不同浸潤深度、分化程度肝轉(zhuǎn)移患者CD44陽性表達

結(jié)果顯示，肝轉(zhuǎn)移患者中CD44陽性表達與浸潤深度有密切關(guān)系，腫瘤浸潤深度越深其陽性表達率越高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；而CD44陽性表達與分化程度無密切關(guān)聯(lián)，見表2。

2.3 不同浸潤深度、分化程度肝轉(zhuǎn)移患者CD166陽性表達

結(jié)果顯示，肝轉(zhuǎn)移患者中CD166陽性表達與浸潤深度有密切關(guān)系，腫瘤浸潤深度越深其陽性表達率越高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；而CD166陽性表達與分化程度無密切關(guān)聯(lián)，見表3。

3 討論

近年來，直腸癌發(fā)病率逐年上升，并有年輕化的趨勢，這與社會因素、遺傳因素與飲食因素具有密切的聯(lián)系[5]。直腸癌肝轉(zhuǎn)移是直腸癌患者遠處轉(zhuǎn)移最常見的類型，并且由于直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者早期癥狀不明顯，容易被臨床和患者忽視而延誤病情。臨床研究顯示，直腸癌患者臨床確診時肝轉(zhuǎn)移率高達25%，且肝轉(zhuǎn)移是嚴(yán)重影響患者預(yù)后的重要因素[6]。Schindl等[7]的研究中表示，直腸癌肝轉(zhuǎn)移術(shù)后5年生存率僅為19.7%，并且直腸癌肝轉(zhuǎn)移后患者手術(shù)切除率較低。在這種情況下，肝轉(zhuǎn)移早期的診斷與相關(guān)腫瘤干細胞的檢測具有重要的臨床意義。

CD44為細胞表面糖基化黏附分子，廣泛存在于多種細胞中，CD44基因由高度保守的19～20個外顯子構(gòu)成，在11號染色體短臂上，經(jīng)轉(zhuǎn)錄后生成CD44s（標(biāo)準(zhǔn)型）或CD44v（變異型）兩種蛋白，在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展過程中CD44呈現(xiàn)高表達，同時在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中起到促進作用[8]。CD166是一種免疫球蛋白，屬于超基因家族中的一員，不僅能夠與機體淋巴細胞的抗原CD6特異性結(jié)合，表現(xiàn)為同嗜性黏附、同型間結(jié)合，而且可以呈異嗜性黏附、異型間結(jié)合，其在腫瘤組織中呈高表達狀態(tài)，而且能夠調(diào)節(jié)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移[9]。另一方面，結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移過程中，腫瘤自身可分泌多種蛋白酶，可降解基底膜和細胞外基質(zhì)，基底膜被降解后，可向周圍組織間質(zhì)遷移，經(jīng)脈管進入血液、淋巴循環(huán)并逃避免疫系統(tǒng)的攻擊，最后伴隨血液循環(huán)或淋巴循環(huán)到達繼發(fā)部位，于繼發(fā)部位組織發(fā)生黏附，形成克隆并增生生長，繼而促使微血管生成，加速轉(zhuǎn)移瘤的形成[10]。在本文研究中，轉(zhuǎn)移組CD44和CD166陽性表達率分別為71.87%和81.25%，均表現(xiàn)為高陽性表達，而未發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者中，二者陽性表達率均性對較低，結(jié)果提示，CD44和CD166高陽性表達可作為直腸癌肝轉(zhuǎn)移的標(biāo)志性指標(biāo)。在直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者CD44和CD166的研究中，司志英等[11-12]在各自的研究中表示，CD44和CD166高陽性表達與患者性別、年齡、病程及腫瘤大小無明顯關(guān)聯(lián)，而與浸潤深度和分化程度可能相關(guān)，為進一步證實其結(jié)論，本文對肝轉(zhuǎn)移患者中CD44和CD166陽性表達與患者浸潤深度、分化程度的相關(guān)性進行初步探討，結(jié)果顯示，肝轉(zhuǎn)移患者中CD44和CD166陽性表達與浸潤深度有密切關(guān)系，而與分化程度無密切關(guān)聯(lián)。

綜上所述，CD44和CD166高陽性表達可作為直腸癌肝轉(zhuǎn)移的標(biāo)志性指標(biāo)，對直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者的早期診斷具有積極的作用，并且CD44和CD166高陽性表達與患者浸潤深度有密切的關(guān)系。

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