LAIR—1與TGF—β在口腔扁平苔蘚患者外周血中表達的相關(guān)性研究

葛志強+梁歌之+廖程

【摘要】 目的：觀察LAIR-1與TGF-β在口腔扁平苔蘚（OLP）患者外周血中的表達情況，并探討其是否存在相關(guān)性。方法：選取筆者所在醫(yī)院2010年1月-2015年1月收治的80例OLP患者為甲組，同期選取40例健康體檢者為乙組，均采用流式細胞術(shù)檢測LAIR-1在OLP患者與健康體檢者外周血Treg上的表達水平，并選用ELISA檢測兩組外周血中TGF-β水平。結(jié)果：甲組患者外周血CD4+Foxp3+Treg細胞中LAIR-1陽性表達率與TGF-β表達水平均要顯著高于乙組（P<0.05），且兩者呈現(xiàn)出正相關(guān)性（r=0.43，P<0.05）。結(jié)論：在OLP患者外周血中，其LAIR-1與TGF-β表達水平均高于健康者，故認為OLP發(fā)病可能同LAIR-1與TGF-β有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 口腔； 扁平苔蘚患者； 外周血表達； 相關(guān)性

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.17.009 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2017）17-0020-03

LAIR-1 Correlation with TGF-β Expression in the Peripheral Blood of Patients with Oral Lichen Planus/GE Zhi-qiang，LIANG Ge-zhi，LIAO Cheng.//Chinese and Foreign Medical Research，2017，15（17）：20-22

【Abstract】 Objective：To observe the expression of LAIR-1 and TGF-β in peripheral blood of patients with oral lichen planus（OLP），and to explore whether there is correlation.Method：From January 2010 to January 2015，80 OLP patients admitted in our hospital were selected as group A，and 40 healthy subjects were selected as group B.Flow cytometry was used to detect LAIR-1 in OLP patients and healthy subjects of Treg in peripheral blood，the levels of TGF-β in peripheral blood were measured by ELISA.Result：The positive expression rate of LAIR-1 and the expression of TGF-β in CD4+Foxp3+Treg cells of group A patients were significantly higher than those in group B（P<0.05），and there was a positive correlation between them（r=0.43，P<0.05）.Conclusion：The expression of LAIR-1 and TGF-β in OLP patients is higher than that in healthy patients.Therefore，the incidence of OLP may be related to LAIR-1 and TGF-β.

【Key words】 Oral； Lichen planus； Peripheral blood expression； Correlation

First-authors address：Yulin Traditional Chinese Medicine Hospital，Yulin 537000，China

在臨床上，OLP病癥屬于口腔黏膜一種多見病癥，發(fā)病原因可能同機體免疫能力、精神、感染情況與內(nèi)分泌情況等有關(guān)，而對于該病癥的具體病理機制，就成為了臨床相關(guān)研究的重點所在，而且有大量研究發(fā)現(xiàn)，它是自身免疫性病癥的一種，多因患者本身對自體形成的抗原發(fā)生了免疫反應(yīng)，進而誘發(fā)自體組織損傷而誘發(fā)的，并有著反復發(fā)作與慢性遷延的特點。本研究觀察LAIR-1與TGF-β在OLP患者外周血中的表達情況，文章抽選筆者所在醫(yī)院收治的80例OLP患者作為觀察對象，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取筆者所在醫(yī)院于2010年1月-2015年1月收治的80例OLP患者作為甲組，所有患者均為初診，男30例，女50例，年齡27～65歲，平均（36±4）歲，且甲組均為OLP初診患者，并滿足以下標準：均經(jīng)臨床表現(xiàn)和組織病理學檢查被確診，即均為非潰爛期OLP患者，病程超過1年，就診前至少2個月未接受任何治療，如應(yīng)用激素等免疫抑制劑，未合并全身性疾病，如消化系統(tǒng)疾病、糖尿病等，并排除同時合并盤狀紅斑狼瘡或是白斑等其他類型的口腔黏膜疾?。煌谶x取40例健康體檢者作為乙組，男15例，女25例，年齡28～64歲，平均（35±5）歲，均自愿參與本次研究。兩組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），有可比性。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑與儀器 FITC、PE-CY5與PE標記的小鼠抗人Foxp3、CD4與LAIR-1單克隆抗體（mAb）及同型對照抗體（由美國BD Pharmingen公司提供），破膜試劑盒（由美國eBioscience公司提供），F(xiàn)icoll人淋巴細胞分離液（由天津灝洋生物制品科技有限公司提供），HumanTGF-β預(yù)包被ELISA試劑盒（由深圳達科為生物技術(shù)有限公司提供），流式細胞儀（由美國Beckman公司提供），全自動酶標儀（由美國Multiskan MS提供）[1]。

1.2.2 流式細胞術(shù)檢測法 利用該檢測法檢測LAIR-1在CD4+Foxp3+Treg上的表達情況，即有效采集兩組人員的新鮮外周血進行肝素抗凝，后用PBSA（含有0.6%抗凝劑的ACD-A的PBS）以1∶1的比例對采集到的外周血進行稀釋處理，并用Ficoll密度梯度法來分離出采集外周血的單個核細胞；進行細胞計數(shù)，并將其細胞密度調(diào)整到1.2×106細胞/ml，同時滅活血清，封閉FcR，而后分別應(yīng)用PE-CY5-CD4與PE-LAIR-1mAb與同型對照抗體實施表面熒光染色處理，并于室溫下避光孵育約20 min[2]；將PBS洗滌之后，對細胞進行固定破膜，同時選用FITC-Foxp3 mAb與同型對照抗體實施膜內(nèi)染色處理，同樣于室溫下避光約孵育30 min，最后在洗滌破膜緩沖液之后，加入500 μl固定液，并借助上流式細胞儀實施相應(yīng)檢測[3]。

1.2.3 ELISA檢測法 采用ELISA檢測法對采集外周血中TGF-β水平進行檢測，即借助EDTA抗凝采血管采取兩組人員的1 ml外周血，對其進行離心處理，后取其血漿放于-70 ℃的溫度下進行保溫處理，然而參照HumanTGF-β預(yù)包被ELISA試劑盒的說明書所說進行操作，借助ELISA雙抗體夾心法來對細胞因子TGF-β表達水平進行有效檢測，并采用全自動酶標儀450 nm處檢測其A值[4]。

1.3 結(jié)果判定

LAIR-1與TGF-β均以細胞漿內(nèi)不同程度棕黃色顆粒的出現(xiàn)情況來判定其陽性反應(yīng)，并參照Bresalier半定量公式對其染色結(jié)果進行有效判定，具體為：隨機抽選5個典型高倍鏡視野（×400），確保每視野內(nèi)隨機擁有100個細胞，細胞計數(shù)為500個，其中，陰性“-”（0分），代表無顯著陽性細胞，弱陽性“+”（1分），代表陽性細胞計數(shù)少于5%，中度陽性“++”（2分），代表陽性細胞計數(shù)在6%～25%，強陽性“+++”（3分），代表陽性細胞計數(shù)在26%～50%，極強陽性“++++”（4分），代表陽性細胞計數(shù)大于50%[7-8]。

1.4 統(tǒng)計學處理

選用統(tǒng)計學軟件SPSS 18.0對本次數(shù)據(jù)加以處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

通過分析流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，甲組患者外周血中CD4+Foxp3+Treg細胞中LAIR-1陽性表達率要顯著高于乙組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；而從ELISA檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甲組患者外周血中TGF-β表達水平也要顯著高于乙組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1、表2。同時，經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，對于OLP患者，其外周血中LAIR-1在CD4+Foxp3+Treg細胞中的表達率同TGF-β表達呈現(xiàn)出正相關(guān)的關(guān)系（r=0.43，P<0.05），見圖1。

3 討論

LAIR-1作為一種免疫抑制性的受體，于“第8屆國際人白細胞分化抗原討論會”上獲得了“CD305”的編號，并發(fā)現(xiàn)LAIR-1分子可能在免疫應(yīng)答過程中參與比較廣泛[5]。Treg作為一類有著較好免疫抑制作用的T細胞，在維持自身耐受性中作用重大，而CD4+Foxp3+Treg則被公認為是調(diào)節(jié)性T細胞中一個最重要的表型特征，有大量研究發(fā)現(xiàn)，在眾多自身免疫性病癥中，如青少年原發(fā)性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡與自身免疫性肝炎中等，患者外周血中Treg細胞水平均呈現(xiàn)出一個下降趨勢，而這也說明，患有自身免疫性病癥的患者，其免疫抑制多表現(xiàn)不足。而OLP同樣作為一種自身免疫性病癥，據(jù)相關(guān)學者研究表示，OLP患者外周血中的CD4+Foxp3+Treg細胞水平要顯著高于健康組，而這也就表示，OLP患者的免疫抑制能力雖看起有所強化，但這可能僅僅只是機體出現(xiàn)的一種免疫調(diào)節(jié)機制[6]。在患有自身免疫性病癥患者體內(nèi)，其效應(yīng)性T細胞對Treg所具有的敏感性會有所下降，從而使得Treg細胞無法全面發(fā)揮它的抑制作用，進而出現(xiàn)了T細胞抵抗情況，而這也就較好的解釋“為什么OLP患者外周血中的Treg水平會有所升高”這個問題[7]。同樣的，本次研究結(jié)果也證實，OLP患者中外周血中，其異質(zhì)性的受體LAIR-1在CD4+Foxp3+Treg細胞上的表達水平，要顯著高于健康體檢者，而這也就表示，LAIR-1極有可能是Treg細胞發(fā)揮出其免疫抑制功能的一個重要介質(zhì)，且LAIR-1也可能是借助影響OLP患者的Treg細胞功而參與到OLP發(fā)病當中的[8]。

TGF-β作為一種有著多種生物學活性功能的細胞因子，日漸引起研究者的重視，且其生物學功能也比較廣泛，在細胞分化增殖、創(chuàng)傷組織修復與胚胎發(fā)育以及炎癥產(chǎn)生等方面均有涉及，更為重要的是，TGF-β還有著有效抑制免疫功能的作用[9-10]。而為研究其在OLP發(fā)病發(fā)展中所其的作用，有學者就是借助ELISA法對網(wǎng)狀型或糜爛性O(shè)LP患者中TGF-β1、Cyclin D1與Smad4的表達情況進行了研究，結(jié)果顯示，OLP患者TGF-β1表達水平要顯著高于正常黏膜組織表達[11]。而本研究得出，同乙組健康人員相比，甲組OLP患者外周血中的TGF-β水平，有明顯升高趨勢，而這也就說明了Treg細胞極有可能是借助刺激TGF-β的大量分泌來起到抑制患者免疫功能作用的[12]。另外，本研究結(jié)果還顯示，OLP患者外周血中LAIR-1在CD4+Foxp3+Treg細胞中的表達率同TGF-β表達水平，有著正相關(guān)性，也就是說，LAIR-1與TGF-β均可能參與到了OLP發(fā)生過程中。

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