益氣養(yǎng)血方對膝骨關(guān)節(jié)炎模型大鼠血清Wnt4和WIF1的影響

李翠葳++鄭喜++李兆福++祁燕++萬春平++李小絲++管政

【摘 要】目的：探討益氣養(yǎng)血方對膝骨關(guān)節(jié)炎大鼠血清Wnt4、WIF1水平及膝關(guān)節(jié)軟骨組織的影響，揭示其治療骨關(guān)節(jié)炎的部分機(jī)制。方法：將70只SD大鼠隨機(jī)分為益氣養(yǎng)血方低、中、高劑量組，陽性對照組，模型對照組，空白對照組及假手術(shù)組，每組10只。除空白對照組和假手術(shù)組外，其余各組大鼠采用改良Hulth法構(gòu)建膝骨關(guān)節(jié)炎模型；假手術(shù)組僅切開關(guān)節(jié)囊，不切斷韌帶和半月板。造模成功后，益氣養(yǎng)血方低、中、高劑量組分別予益氣養(yǎng)血方1.89 g·kg-1·d-1、3.78 g·kg-1·d-1、7.56 g·kg-1·d-1灌胃，陽性對照組給予雙氯芬酸鈉腸溶片混懸液4 mg·kg-1·d-1灌胃，模型對照組、假手術(shù)組給予生理鹽水

2.5 mL·d-1灌胃，空白對照組不予任何藥物。給藥8周后，腹主動脈取血，檢測血清中Wnt4、WIF1的含量；取右膝關(guān)節(jié)，HE染色，并進(jìn)行病理評分。結(jié)果：與模型對照組比較，益氣養(yǎng)血方各劑量組及陽性對照組病理評分降低（P < 0.05）；與空白對照組、假手術(shù)組比較，模型對照組大鼠血清中Wnt4水平升高、WIF1水平降低（P < 0.05）；與模型對照組比較，益氣養(yǎng)血方中、高劑量組大鼠血清中Wnt4水平降低，WIF1水平升高（P < 0.05或P < 0.01）；與陽性對照組比較，益氣養(yǎng)血方中、高劑量對WIF1的上調(diào)作用更為明顯（P < 0.05）。結(jié)論：益氣養(yǎng)血方能延緩骨關(guān)節(jié)炎軟骨退變，保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨，其機(jī)制可能與下調(diào)Wnt4的表達(dá)，上調(diào)WIF1的水平，抑制關(guān)節(jié)軟骨退變相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 骨關(guān)節(jié)炎，膝；益氣養(yǎng)血方；軟骨形態(tài)；Wnt4；WIF1

【ABSTRACT】Objective：To investigate the effect of Yiqi Yangxue Fang（益氣養(yǎng)血方）on Wnt4 andWIF1in serum of rats with knee osteoarthritis，to reveal its mechanism in the treatment of osteoarthritis.Methods：Seventy SD rats were randomly divided into low，middle and high dose groups of Yiqi Yangxue Fang，a positive control group，a model control group，a blank control group and a sham operation group，10 rats in each group.Except for the blank control group and the sham operation group，the knee osteoarthritis models were established by modified Hulth method in the other groups.Only the joint capsule was cut open in the sham operation group，and the ligaments and menisci were not cut off.After modeling，rats in the low，medium and high dose group were respectively given intragastric administration of 1.89 g·kg-1·d-1，3.78 g·kg-1·d-1 and 7.56 g·kg-1·d-1 of Yiqi Yangxue Fang.The positive control group was given intragastric administration of 4 mg·kg-1·d-1 of Diclofenac Sodium Enteric-coated Tablets suspension.The model control group and the sham operation group were given 2.5 mL·d-1 of normalsaline.The blank control group wasn't given any drug.After 8 weeks of administration，the blood of abdominal aorta was collected to detect he contents of Wnt4 and WIF1 in serum.The right knee joint was taken for HE staining and pathological score.Results：Compared with the model group，the pathological scores of each group of Yiqi Yangxue Fang and the positive control group decreased（P < 0.05）.Compared with the sham operation group and the blank control group，the level of Wnt4 increased and the level of WIF1 decreased in the model control group（P < 0.05）.Compared with the model control group，the level of Wnt4 could be lowered and the level of WIF1 could be increased in the medium and high dose group of Yiqi Yangxue Fang（P < 0.05 or P < 0.01）.Compared with the positive control group，the medium and high dose of Yiqi Yangxue Fang are more obviously to up-regulate the level of WIF1（P < 0.05）.Conclusion：Yiqi Yangxue Fang can delay cartilage degeneration and protect articular cartilage，and its mechanism may be related to down regulation of Wnt4，up regulation of WIF1 level and inhibition of articular cartilage degeneration.

【Keywords】osteoarthritis，knee；Yiqi Yangxue Fang（益氣養(yǎng)血方）；cartilage morphology；Wnt4；WIF1

骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）是臨床上中老年人常見的一種慢性、進(jìn)展性關(guān)節(jié)疾病，多由增齡、肥胖、勞損、創(chuàng)傷、關(guān)節(jié)先天性異常、關(guān)節(jié)畸形等因素引起關(guān)節(jié)軟骨變性、軟骨下骨硬化、關(guān)節(jié)邊緣和軟骨下骨反應(yīng)性增生、骨贅形成，產(chǎn)生無菌炎癥，可侵犯全身多個關(guān)節(jié)[1]。臨床上以膝骨關(guān)節(jié)炎（knee osteoarthritis，KOA）多見。最近研究表明，原發(fā)性O(shè)A在我國40歲以上人群中患病率為46.3%，

60歲人群比40歲人群的患病率高出一倍。本病的致殘率可達(dá)53%[2]。Wnt/β-catenin信號通路是骨代謝調(diào)控的重要途徑之一，在骨組織的形成、發(fā)育及骨重建過程中起關(guān)鍵作用，與OA的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[3-5]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，本病是風(fēng)、寒、濕三氣雜合入侵人體，使氣血凝滯不行，痹阻不通。吳生元[6]認(rèn)為，本病以肝脾腎虧、氣血不足為本，痰濁、瘀血、風(fēng)寒濕邪為標(biāo)，采用益氣養(yǎng)血、溫陽通絡(luò)等法進(jìn)行治療可取得不錯的療效。益氣養(yǎng)血方為吳氏經(jīng)驗方，臨床運(yùn)用30余年，療效較好。前期實驗表明，本方可以抑制ATDC5軟骨細(xì)胞凋亡，降低細(xì)胞上清液炎性因子白細(xì)胞介素-1β、腫瘤壞死因子-α產(chǎn)生及Bax蛋白表達(dá)，上調(diào)ATDC5軟骨細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)，從而發(fā)揮治療OA的作用[7]。

本研究是在前期研究基礎(chǔ)上，從調(diào)控Wnt通路相關(guān)分子角度進(jìn)一步探討益氣養(yǎng)血方對OA軟骨退變的作用及機(jī)制。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 SPF級SD雌性大鼠70只，2月齡，體質(zhì)量160～180 g，由成都達(dá)碩實驗動物有限公司提供，動物許可證號：SCXK（川）2015-030）。

質(zhì)量合格證號：No.0015199。由四川省實驗動物檢測中心檢測。飼養(yǎng)于云南省中醫(yī)醫(yī)院中心實驗室SPF級動物房[許可證號：SYXK（滇）-K2013-0002]。溫度（21±2）℃，濕度（55±5）%，

12 h光暗循環(huán)。飼料和水均由動物自由攝取，所有籠具、飼料和飲水均經(jīng)過121 ℃蒸汽滅菌處理。實驗期間均予SPF級普通飼料。

1.2 實驗藥物 益氣養(yǎng)血方由黃芪、黨參等14味中藥組成，由云南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中藥房提供。原藥材混合后加水煎煮3次，第1次10倍水，煎煮1 h，濾過。第2次7倍水，煎煮1 h，濾過。第3次3倍水，煎煮30 min，濾過。合并3次濾液，3000 r·min-1離心機(jī)離心10 min，60 ℃恒溫旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸餾濃縮制備浸膏，稱重，折合原藥材為每1克浸膏含生藥2.53 g。雙氯芬酸鈉腸溶片（北京諾華制藥有限公司，生產(chǎn)批號X1008）。

1.3 主要試劑和設(shè)備 Wnt4、WIF1 ELISA試劑盒（美國R&D，生產(chǎn)批號E20160901A、E20160901C）；乙二胺四乙酸二鈉、復(fù)方金霉素軟膏（昆明振華制藥廠，生產(chǎn)批號20150701）；采血管、Bio-Rad 680酶標(biāo)儀（美國伯樂公司）；Megafugel 1.0R離心機(jī)、RM2235石蠟切片機(jī)、EG1150H + EG1130C組織包埋機(jī)、HI1210烘片機(jī)、DM2500正置顯微鏡、ASP300S全自動組織脫水機(jī)（德國萊卡儀器有限公司）。

2 方 法

2.1 動物分組與造模 將70只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為益氣養(yǎng)血方低、中、高劑量組，陽性對照組，模型對照組，空白對照組及假手術(shù)組，每組10只。除空白對照組及假手術(shù)組外，其余各組大鼠用改良Hulth法[8]造模，采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的水合氯醛腹腔麻醉后，碘伏消毒，均取右側(cè)膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)長約

1 cm切口，從髕韌帶內(nèi)側(cè)進(jìn)入關(guān)節(jié)腔，切斷前交叉韌帶、內(nèi)側(cè)副韌帶，切除內(nèi)側(cè)半月板，抽屜試驗陽性，關(guān)節(jié)復(fù)位后逐層縫合切口。假手術(shù)組入路同前，切開關(guān)節(jié)囊，暴露關(guān)節(jié)腔后，不切斷前交叉韌帶、內(nèi)側(cè)副韌帶，不做半月板切除，隨即縫合切口。復(fù)方金霉素軟膏涂抹傷口預(yù)防感染，連續(xù)給藥7 d?？瞻讓φ战M不做任何處理。

2.2 動物給藥 造模7周后，依據(jù)臨床常用劑量，按人與大鼠體表面積比計算大鼠臨床等效劑量，人按70 kg計算出大鼠用藥量益氣養(yǎng)血方高、中、低劑量組分別為7.56 g·kg-1·d-1、3.78 g·kg-1·d-1、1.89 g·kg-1·d-1（分別為臨床等效劑量、1/2等效劑量、1/4等效劑量），實驗時以雙蒸水按劑量配置成所需濃度；陽性對照組給予雙氯芬酸鈉腸溶片混懸液4 mg·kg-1·d-1灌胃；假手術(shù)組、模型對照組給予生理鹽水2.5 mL·d-1灌胃；空白對照組正常飼養(yǎng)，不予任何藥物。各組連續(xù)給藥8周。

2.3 標(biāo)本制備 采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的水合氯醛腹腔麻醉，腹主動脈取血，血液靜置4 h后，4 ℃ 3000 r·min-1離心機(jī)離心15 min，取上層血清，凍存-20 ℃，以備ELISA檢測。取右側(cè)膝關(guān)節(jié)，每組隨機(jī)選取5個關(guān)節(jié)，剩余關(guān)節(jié)凍存于-80 ℃冰箱，以備PCR檢測。剝離關(guān)節(jié)周圍組織，置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的中性甲醛溶液中固定，采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的EDTA脫鈣，常規(guī)脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，連續(xù)切片，厚度6 μm。

2.4 檢測指標(biāo)及方法

2.4.1 形態(tài)學(xué)觀察 大體觀察，HE染色，光鏡下觀察，每個標(biāo)本取5張切片，每張切片顯微鏡下放大200×，選取5個視野。參照Mankin評分法[9]設(shè)置以下評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行關(guān)節(jié)軟骨病理評分。軟骨結(jié)構(gòu)：光滑如常，0分；表層破壞，1分；血管翳及表層破壞，2分；淺層裂隙形成達(dá)移行層，3分；裂隙局限性深達(dá)骨質(zhì)輻射層，4分；深達(dá)骨質(zhì)鈣化層軟骨，5分；全層軟骨缺損，6分。軟骨細(xì)胞：數(shù)量如常排列整齊，0分；數(shù)量彌漫性增多，1分；出現(xiàn)大量集簇細(xì)胞團(tuán)，2分；數(shù)量明顯減少，3分?；|(zhì)染色：均勻，層次分明清楚，0分；不均勻，層次分明清楚，1分；不均勻，部分層次不清，2分；不均勻，重度染色，3分；失染，4分。潮線完整性：完整，1分；有血管翳生成，2分。

2.4.2 ELISA法檢測大鼠血清Wnt4、WIF1表達(dá)水平 按照試劑盒說明書。操作如下：①從-20 ℃冰箱中取出冰凍血清，室溫解凍備用。將試劑盒從4 ℃冰箱取出，室溫平衡20 min。②選用96 T板，設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔和待測樣品孔。標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50 μL，樣品孔加入待測樣品10 μL，再加樣本稀釋液40 μL，空白孔不加。

③除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔均加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100 μL，用封板膜密封。④37 ℃恒溫箱溫育60 min后，揭掉封板膜，棄去液體，在吸水紙上拍干，每孔加足量的洗滌液，靜置1 min，將洗滌液甩去，吸水紙上拍干，如此反復(fù)5次（注意洗板時要甩盡液體，拍干，以免影響結(jié)果）。⑤每孔加入底物溶液100 μL，37 ℃避光溫育15 min。每孔依次加終止液50 μL，終止反應(yīng)（此時顏色改變，一般顏色越深說明陽性程度越高）。⑥在加入終止液的15 min內(nèi)用酶聯(lián)儀在450 nm波長處測定各孔的光密度（OD值）。同時繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以表示，組間比較采用t檢驗，多組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，符合正態(tài)分布和方差齊性檢驗采用LSD法檢驗，方差不齊則采用校正t檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 大體形態(tài)觀察 空白對照組可見關(guān)節(jié)面平滑完整，關(guān)節(jié)軟骨光潔，半透明，質(zhì)地堅韌富有彈性，無裂隙，膝關(guān)節(jié)未見腫脹及萎縮，關(guān)節(jié)囊未見增厚，滑膜無充血粘連，關(guān)節(jié)液量少清澈。模型對照組可見滑膜增厚充血，軟骨表層糜爛纖維化，觸之較軟，脛骨平臺可見增生，關(guān)節(jié)囊增厚，關(guān)節(jié)積液明顯增多，渾濁黏稠；陽性對照組滑膜充血較輕，軟骨顏色變淺，軟骨表面粗糙，局部潰瘍、纖維化，關(guān)節(jié)液量較多，渾濁。益氣養(yǎng)血方各劑量組滑膜較模型對照組充血較輕，軟骨表層比較光滑，未見明顯裂隙與增生，關(guān)節(jié)積液量少。

3.2 HE染色 空白對照組、假手術(shù)組可見軟骨表層光滑，平整，軟骨細(xì)胞排列整齊，染色分布均勻，潮線完整，無明顯細(xì)胞集簇現(xiàn)象；模型對照組軟骨表層潰瘍變薄，局部裂隙缺損，軟骨細(xì)胞排列不整齊，局部細(xì)胞集簇明顯，局部細(xì)胞數(shù)量減少，染色不均勻；陽性對照組軟骨層變薄，表層欠光滑、裂隙，軟骨細(xì)胞排列尚整齊，少量集簇，染色不均勻、輕度缺失，潮線完整；益氣養(yǎng)血方低劑量組軟骨表層不光滑，部分潰瘍，軟骨細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞集簇，基質(zhì)染色不均勻，潮線完整；益氣養(yǎng)血方中劑量組軟骨表層欠光滑，局部有表淺的裂隙，軟骨細(xì)胞排列較規(guī)則，局部細(xì)胞集簇，基質(zhì)染色尚均勻，潮線較完整；益氣養(yǎng)血方高劑量組軟骨表層較光滑，軟骨細(xì)胞集簇，無明顯裂隙，潮線完整。見圖1。

3.3 各組大鼠關(guān)節(jié)軟骨病理評分比較 模型對照組的病理評分明顯高于空白對照組、假手術(shù)組（P < 0.05），益氣養(yǎng)血方各劑量組及陽性對照組低于模型對照組（P < 0.01），益氣養(yǎng)血方中、高劑量組病理評分低于陽性對照組（P < 0.05或P < 0.01）。見表1。

3.4 各組大鼠血清Wnt4、WIF1水平比較 與空白對照組、假手術(shù)組比較，模型對照組大鼠血清中Wnt4水平升高，WIF1水平降低（P < 0.05或P < 0.01）；與模型對照組比較，益氣養(yǎng)血方中、高劑量組大鼠血清中Wnt4水平降低，WIF1水平升高（P < 0.05），其中高劑量組更為明顯（P < 0.01）；與陽性對照組比較，益氣養(yǎng)血方中、高劑量對WIF1的上調(diào)作用更為明顯（P < 0.05）。見表2。

4 討 論

目前，KOA尚缺乏有效的治療手段，臨床常用非甾體抗炎藥、糖皮質(zhì)激素、改善病情抗風(fēng)濕藥等治療。陽性對照藥物雙氯芬酸鈉腸溶片為非甾體抗炎藥，通過抑制環(huán)氧合酶（COX）的活性，使前列腺素的合成減少，從而減輕或控制炎癥反應(yīng)。有研究表明，雙氯芬酸可以抑制Wnt/β-catenin信號傳導(dǎo)，同時減少β-catenin/TCF依賴性基因的表達(dá)且能夠促進(jìn)人OA軟骨細(xì)胞分泌Ⅱ型膠原[10]，從而減少軟骨基質(zhì)的降解丟失，保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨；但對β-catenin蛋白水平的影響不明顯[11]。氨基葡萄糖能夠促進(jìn)蛋白多糖的合成，提高軟骨細(xì)胞的修復(fù)能力，抑制溶酶體酶、金屬蛋白酶、膠原酶和磷脂酶A2等水解酶的釋放，減少關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)的降解破壞，從而保護(hù)和修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨；但對Wnt/β-catenin通路是否有作用未見報道，本研究旨在研究益氣養(yǎng)血方通過Wnt/β-catenin信號通路干預(yù)OA的機(jī)理，故以COX-2抑制劑雙氯芬酸鈉腸溶片為陽性對照藥物。

經(jīng)典的Wnt/β-catenin信號通路可以調(diào)節(jié)機(jī)體很多生物學(xué)過程如細(xì)胞增殖、分化、凋亡、衰老等[12]，在軟骨、骨代謝及骨骼系統(tǒng)發(fā)生發(fā)展的全過程及OA的病程中起著重要作用[13]。Wnt4是Wnt信號通路中的重要因子之一，其表達(dá)增高可激活下游的β-catenin過量表達(dá)，促使關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞過度成熟、分化及凋亡，使存在于軟骨基質(zhì)中的各種蛋白酶的表達(dá)及活性增加，從而加重細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的降解、關(guān)節(jié)軟骨的退變和最終骨贅的形成[14]。WIF1即Wnt信號通路抑制因子1，為Wnt拮抗物家族成員之一，可以直接與Wnt相結(jié)合，阻斷Wnt與受體蛋白復(fù)合物的結(jié)合途徑，促使細(xì)胞質(zhì)中的β-catenin不斷磷酸化而難以積累，從而阻斷Wnt/β-catenin信號通路的活化[15-16]，減少ECM的降解和關(guān)節(jié)軟骨的破壞。本研究表明，模型對照組大鼠關(guān)節(jié)軟骨表層潰瘍變薄，HE染色關(guān)節(jié)軟骨表面缺損裂隙，細(xì)胞集簇，基質(zhì)染色不均勻，提示關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)降解，關(guān)節(jié)軟骨退變；益氣養(yǎng)血方各劑量組和陽性對照組在關(guān)節(jié)軟骨表層肉眼觀察、HE染色關(guān)節(jié)軟骨退變有明顯改善，病理評分降低（P < 0.05），表明益氣養(yǎng)血方可以改善KOA大鼠病理評分，保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨。

Wnt4和WIF1作為Wnt/β-catenin信號通路上游因子，通過對Wnt信號及β-catenin水平的調(diào)控，調(diào)節(jié)機(jī)體細(xì)胞周期、ECM合成與降解及軟骨細(xì)胞的成熟、分化與凋亡[17]。Wnt4持續(xù)增高引起β-catenin持續(xù)表達(dá)，促使生長板軟骨細(xì)胞肥大及其終端分化，刺激基質(zhì)金屬蛋白酶分泌，致使關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)降解，加速關(guān)節(jié)軟骨破壞[13]。Wnt的異常活化使WIF1消耗增多、水平降低，β-catenin持續(xù)在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)積累，并向細(xì)胞核轉(zhuǎn)移，繼而與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，刺激Wnt信號下游靶基因轉(zhuǎn)錄[18]。本研究結(jié)果提示，模型對照組Wnt4水平明顯高于空白對照組和假手術(shù)組（P < 0.05），WIF1水平低于后兩者（P < 0.01）。與模型對照組比較，益氣養(yǎng)血方各劑量組和陽性對照組Wnt4水平均有所降低，WIF1的表達(dá)升高，但陽性對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。表明益氣養(yǎng)血方可以降低Wnt4的產(chǎn)生水平，增加WIF1的表達(dá)。

益氣養(yǎng)血方又名補(bǔ)中桂枝湯，以李東垣補(bǔ)中益氣湯與《傷寒論》桂枝湯合方化裁而成，具有益氣養(yǎng)血、補(bǔ)腎健脾、通經(jīng)活絡(luò)之功，臨床運(yùn)用30余年，取得較好的臨床療效，且無明顯不良反應(yīng)。方中以補(bǔ)中益氣湯調(diào)補(bǔ)脾胃、益氣養(yǎng)血，桂枝湯調(diào)和營衛(wèi)、通經(jīng)活絡(luò)，配以細(xì)辛散寒止痛，川芎行氣活血，骨碎補(bǔ)、淫羊藿補(bǔ)腎壯骨，標(biāo)本兼治。研究表明，本方可以改善OA患者臨床癥狀積分，降低紅細(xì)胞沉降率、C-反應(yīng)蛋白[19]；對體外培養(yǎng)的OA患者退變軟骨細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用，促使Aggrecan mRNA表達(dá)上調(diào)，下調(diào)COL-10 mRNA的表達(dá)[20]。本研究從Wnt信號通路上游調(diào)控分子角度探討益氣養(yǎng)血方對KOA大鼠血清Wnt4、WIF1水平及膝關(guān)節(jié)軟骨組織的影響，揭示其治療OA的部分機(jī)制。研究結(jié)果表明，益氣養(yǎng)血方可以有效延緩KOA大鼠關(guān)節(jié)軟骨的退變，改善KOA大鼠病理評分，推測其可能的作用機(jī)制是通過抑制Wnt4的表達(dá)，升高WIF1的水平，從而減少β-catenin的產(chǎn)生、積累，延緩KOA軟骨退變。但信號通路是一個復(fù)雜的協(xié)同系統(tǒng)，本方對滑膜及軟骨組織中相關(guān)因子下游相關(guān)靶基因如β-catenin及其他OA的相關(guān)信號通路的作用及其機(jī)制，還需進(jìn)一步研究和探討。

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收稿日期：2017-03-05；修回日期：2017-05-31