細(xì)胞蠟塊及免疫組化在肺腺癌癌性胸水診斷中的應(yīng)用

廖志東，朱文標(biāo)，鄭少秋，謝壽城

(1.梅州市中醫(yī)醫(yī)院病理科，廣東梅州514071；2.中山大學(xué)附屬梅州市人民醫(yī)院病理科，廣東梅州514031)

細(xì)胞蠟塊及免疫組化在肺腺癌癌性胸水診斷中的應(yīng)用

廖志東1，朱文標(biāo)2，鄭少秋2，謝壽城2

(1.梅州市中醫(yī)醫(yī)院病理科，廣東梅州514071；2.中山大學(xué)附屬梅州市人民醫(yī)院病理科，廣東梅州514031)

目的研究胸水沉渣包埋制成細(xì)胞蠟塊聯(lián)合免疫組化檢測(cè)對(duì)肺腺癌癌性胸水與非癌性胸水的診斷及鑒別診斷價(jià)值。方法選取梅州市人民醫(yī)院2015年1～12月經(jīng)組織病理確診的肺原發(fā)腺癌伴有胸水的患者57例及炎癥性胸水患者36例，采用胸水沉渣包埋制成細(xì)胞蠟塊，并行甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1(TTF1)、癌胚抗原(CEA)、天門冬氨酸蛋白酶A(NapsinA)、間皮細(xì)胞(MC)、鈣結(jié)合蛋白(CR)、腎母細(xì)胞瘤1(WT1)等6種免疫標(biāo)記的免疫組化檢測(cè)。結(jié)果癌性胸水細(xì)胞蠟塊中腫瘤細(xì)胞TTF1、CEA、NapsinA、MC、CR、WT1的陽性表達(dá)率依次為89.47%、78.94%、92.98%、17.54%、19.30%及7.54%；炎癥性胸水細(xì)胞蠟塊中間皮細(xì)胞TTF1、CEA、NapsinA、MC、CR、WT1的陽性表達(dá)率依次為8.33%、13.89%、22.22%、80.56%、97.22%及52.78%。癌性胸水中腫瘤細(xì)胞與炎癥性胸水中的間皮細(xì)胞的免疫組化表達(dá)率比較差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P?0.01)。結(jié)論胸水沉渣包埋制成細(xì)胞蠟塊聯(lián)合免疫組化檢測(cè)對(duì)肺腺癌癌性胸水的腫瘤細(xì)胞與炎癥性胸水中不典型間皮細(xì)胞的鑒別診斷有重要臨床意義。

肺腺癌；胸水；細(xì)胞蠟塊；免疫組化

胸腔積液是一種常見的多種臨床疾病的肺部臨床表征。胸腔積液良性與惡性的鑒別診斷是臨床病理常見的難點(diǎn)之一[1]，不典型增生間皮細(xì)胞與對(duì)肺腺癌細(xì)胞形態(tài)上有時(shí)非常相似，細(xì)胞學(xué)涂片難以區(qū)別，主觀性強(qiáng)，特別是低年資醫(yī)師，容易誤診[1-2]。本文通過聯(lián)合免疫組化染色方法及胸水沉渣包埋方法對(duì)兩者進(jìn)行鑒別診斷，提高對(duì)肺腺癌癌性胸水的診斷準(zhǔn)確性，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 胸水標(biāo)本收集梅州市人民醫(yī)院2015年1～12月經(jīng)臨床綜合檢查已確診病例肺原發(fā)腺癌患者伴胸水57例及肺炎患者伴胸水36例；57例肺原發(fā)腺癌患者胸水標(biāo)本中男性34例，女性23例，年齡20～90歲，平均(63±19.53)歲；36例肺炎患者胸水標(biāo)本中男性20例，女性16例，年齡18～88歲，平均(61±16.20)歲；兩組患者的性別和年齡比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 方法采用細(xì)胞沉渣包埋聯(lián)合免疫組化染色進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.1 沉渣包埋取胸水50 mL放置于試管，2500 r/min，離心10 min，用吸管吸出上清液丟棄，取沉渣加4%中性福爾馬林固定24 h，用濾紙將沉渣包好，常規(guī)脫水，石蠟包埋，常規(guī)切片，HE染色制片，觀察細(xì)胞形態(tài)。

1.2.2 免疫組化采用SP法檢測(cè)，檢測(cè)試劑盒均購于福州邁新生物公司，步驟按試劑盒說明書進(jìn)行，所選擇CEA、TTF1、NapsinA、MC、CR、WT1鼠抗單克隆抗體及試劑盒均來自福州邁新生物公司。所有抗體均在同一張切片上設(shè)置了陽性對(duì)照及陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定CEA、NapsinA、CR陽性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)，棕黃色，顆粒狀；TTF1、WT1陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核，棕黃色；MC陽性表達(dá)定位于細(xì)胞膜，棕黃色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn)，以P?0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)沉渣包埋與常規(guī)細(xì)胞學(xué)涂片相比較，沉渣包埋切片中細(xì)胞更加豐富，所有的細(xì)胞都在同一平面上，與組織學(xué)切片相似，結(jié)構(gòu)清晰，堆聚成團(tuán)狀或環(huán)狀，無常規(guī)涂片的細(xì)胞重疊性，結(jié)構(gòu)清晰，無常規(guī)涂片細(xì)胞立體感，見圖1。

2.2 免疫組化免疫組化顯示肺腺癌胸水沉渣中癌細(xì)胞表達(dá)情況：CEA陽性率為89.47%、TTF1為78.94%、NapsinA為92.98%、MC為17.54%、CR為19.30%、WT1為7.54%；炎癥性胸水沉渣增生間皮細(xì)胞表達(dá)情況：CEA陽性率為8.33%、TTF1為13.89%、NapsinA為22.22%、MC為80.56%、CR為97.22%、WT1為52.78%。癌性胸水中腫瘤細(xì)胞與炎癥性胸水中的間皮細(xì)胞的免疫組化表達(dá)率比較差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P? 0.01)，見表1。肺原發(fā)腺癌胸水沉渣包埋免疫組化結(jié)果與肺腺癌組織學(xué)免疫組化表達(dá)結(jié)果相一致。不典型增生的間皮細(xì)胞胸水沉渣包埋免疫組化結(jié)果與胸膜活檢間皮細(xì)胞免疫組化表達(dá)結(jié)果相一致，見圖2。

圖1 胸水細(xì)胞蠟塊切片HE染色(×200)

圖2 胸水細(xì)胞蠟塊免疫組化表達(dá)(×200)注：A：TTF1；B：CEA；C：NapsinA；D：MC；E：CR；F：WT1；紅色箭頭示癌細(xì)胞，黑色箭頭示間皮細(xì)胞。

表1 肺腺癌性胸水與炎癥伴間皮細(xì)胞不典型增生性胸水免疫組化結(jié)果

3 討論

在胸腔積液中，腫瘤細(xì)胞學(xué)檢查肺腺癌與反應(yīng)性不典型增生胸膜間皮細(xì)胞在細(xì)胞形態(tài)上非常相似[3]，需要有較特異性的指標(biāo)來協(xié)助診斷，減少診斷醫(yī)師的主觀意識(shí)。常規(guī)細(xì)胞學(xué)涂片檢查具有方便簡(jiǎn)潔的特點(diǎn)，但是，由于涂片技術(shù)及人為因素，造成細(xì)胞涂片厚薄不一，細(xì)胞重疊，結(jié)構(gòu)欠清晰，細(xì)胞變性及血性背景遮掩腫瘤細(xì)胞等特點(diǎn)，給診斷醫(yī)師帶來干擾和困惑[4]。我們采用胸水沉渣包埋方法，可以排除上述各種原因帶來的不便，同時(shí)還可以聯(lián)合免疫組化應(yīng)用得到客觀的特異性強(qiáng)的明確的診斷依據(jù)而減少了人為主觀因素。

肺腺癌細(xì)胞與反應(yīng)性不典型增生胸膜間皮細(xì)胞的診斷不僅僅是依據(jù)細(xì)胞學(xué)形態(tài)，還需要結(jié)合應(yīng)用免疫組化檢查才能更好地做出正確的診斷[5-7]。肺腺癌與反應(yīng)性不典型增生胸膜間皮細(xì)胞，細(xì)胞學(xué)形態(tài)相近，均可以排列形成管狀、片狀、團(tuán)塊狀、腺腔樣，細(xì)胞核大，可有異型性，胞漿豐富，染色質(zhì)深染等，光鏡下很難鑒別。細(xì)胞沉渣包埋石蠟切片能夠較好地區(qū)別兩者，聯(lián)合免疫組化一般可以明確診斷及判斷來源。同時(shí)，與涂片相比較，沉渣包埋石蠟塊可長(zhǎng)期保存，可行免疫組化、特殊染色及基因分析，對(duì)于晚期肺癌患者，可以代替組織學(xué)標(biāo)本，臨床應(yīng)該廣泛[5-8]。

免疫組化肺腺癌組選用TTF-1、NapsinA和CEA單克隆抗體，TTF-1是分子量為38～40 kDa的核蛋白，在成人組織中主要分布在內(nèi)胚層分化的甲狀腺濾泡細(xì)胞，間腦局部和呼吸道上皮中，在肺小細(xì)胞癌及肺原發(fā)型腺癌中高表達(dá)。結(jié)果顯示：本組TTF-1在肺腺癌中陽性率為89.47%，不典型增生間皮細(xì)胞中陽性率為8.33%，表明TTF-1可作為診斷肺腺癌與不典型增生間皮細(xì)胞相鑒別的特異性指標(biāo)。NapsinA是一種胃酶樣天冬氨酸蛋白酶，分子量接近38 kDa的單鏈蛋白，該蛋白在人類肺和腎組織中高表達(dá)，在部分TTF-1陰性的低分化肺腺癌中亦有表達(dá)。本組57例肺腺癌陽性率為92.98%，不典型增生間皮細(xì)胞中陽性率為22.22%。CEA是一種在胎兒腸道產(chǎn)生的癌胚抗原，在成人結(jié)腸正常黏膜上皮及其他組織中表達(dá)率極低，在胃腸道腺癌和肺腺癌中有較高表達(dá)，本組例肺腺癌陽性率為78.94%，不典型增生間皮細(xì)胞中陽性率為13.89%。不典型增生胸膜間皮細(xì)胞組選用了間皮細(xì)胞相對(duì)特異的抗體MC、CR和WT1，MC主要表達(dá)于間皮細(xì)胞，腺上皮一般不表達(dá)，而且腺上皮若表達(dá)側(cè)在胞漿上，不是間皮細(xì)胞的細(xì)胞膜位置。在本組中不典型增生的間皮細(xì)胞陽性率為80.56%，腺癌中陽性率為17.54%。Wieczorek等[9]研究顯示，MC在反應(yīng)性間皮細(xì)胞中具有較高的敏感性和特異性，是間皮細(xì)胞較好的一個(gè)指標(biāo)，是鑒別腺癌細(xì)胞及間皮細(xì)胞的較好標(biāo)記物。CR是一種細(xì)胞內(nèi)結(jié)合蛋白，屬于激動(dòng)蛋白C超家族，表達(dá)于正常和腫瘤性間皮細(xì)胞中，在本組中間皮細(xì)胞的陽性率為97.22%，腺癌中陽性率為19.30%。因此，MC和CR結(jié)合使用能較好的鑒別胸水中的不典型增生間皮細(xì)胞與腺癌細(xì)胞。WT1是一種抑癌基因，和腎母細(xì)胞瘤等腫瘤的發(fā)生有關(guān)，在間皮細(xì)胞、卵巢漿液性腫瘤中表達(dá)。在本組不典型增生間皮細(xì)胞中的陽性率為52.78%，在腺癌中的陽性率為7.54%，因此，它在間皮細(xì)胞增生與肺腺癌的鑒別診斷中具有一定意義?？傊?，CEA、TTF1、NapsinA、MC、CR、WT1等一組免疫組化抗體，對(duì)反應(yīng)性不典型增生胸膜間皮細(xì)胞與肺腺癌的診斷與鑒別診斷有重要意義。

綜上所述，常規(guī)涂片中未能明確診斷的胸水，沉渣包埋切片聯(lián)合免疫組化檢查能夠提供良好的形態(tài)學(xué)診斷及特異性標(biāo)記物，對(duì)反應(yīng)性不典型增生胸膜間皮細(xì)胞與肺腺癌的診斷與鑒別診斷具有重大意義。胸水沉渣包埋制成細(xì)胞蠟塊技術(shù)明顯提高了惡性胸腔積液的診斷率，這是一個(gè)簡(jiǎn)單實(shí)用的技術(shù)，實(shí)用性強(qiáng)，基層醫(yī)院都可以開展，值得推廣。

[1]張燕,孫耕耘.惡性胸腔積液的臨床診斷及治療進(jìn)展[J/CD].中華肺部疾病雜志(電子版),2013,6(1)：63-66.

[2]秦盠,朱娜,崔進(jìn).良惡性胸腔積液的臨床特征及預(yù)測(cè)因素分析[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2015,23(9)：1236-1238.

[3]呂鵬,張良明,耿冬梅,等.良惡性胸腔積液鑒別診斷的研究進(jìn)展[J].實(shí)用心腦肺血管病雜志,2011,19(5)：873-875.

[4]魏謹(jǐn),朱有珍.胸腔積液的細(xì)胞塊技術(shù)應(yīng)用體會(huì)[J].臨床肺科雜志, 2012,17(2)：352.

[5]周曉明,馮學(xué)威,趙立.胸腔積液脫落細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)相關(guān)抗體對(duì)胸膜轉(zhuǎn)移性肺腺癌和惡性胸膜間皮瘤的鑒別診斷價(jià)值[J].中國全科醫(yī)學(xué),2012,15(35)：4075-4078．

[6]羅麗花,張婉儀,劉惠娟,等.細(xì)胞塊聯(lián)合免疫組化在胸腔積液診斷中的應(yīng)用[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2015,31(8)：904-907.

[7]楊紅敏,李振芬.細(xì)胞塊切片免疫組化染色在胸腔積液病理診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].中外醫(yī)療,2014,33(1)：179,181.

[8]楊槐,劉祿,楊娜,等.肺惡性腫瘤伴胸腔積液細(xì)胞塊病理診斷價(jià)值[J].臨床醫(yī)藥實(shí)踐,2015,24(3)：233-235.

[9]Wieczorek TJ,Krane JF.Diagnostic utility of calretinin immunohistochemistry in cytologic cell block preparations[J].Cancer,2000,90 (5)：312-319．

Application of paraffin imbedded cell blocks technology combined with immunohistochemistry for in the diagnosis of lung adenocarcinoma with pleural effusion.

LIAO Zhi-dong1,ZHU Wen-biao2,ZHENG Shao-qiu2,XIE Shou-cheng2.
1.Department of Pathology,Meizhou Hospital of Traditional Chinese Medicine,Meizhou 514071, Guangdong,CHINA;2.Department of Pathology,Meizhou People's Hospital Affiliated to Sun Yat-sen University,Meizhou 514031,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo study the value of paraffin imbedded cell blocks technology combined with immunohistochemistry for diagnosis of lung adenocarcinoma with pleural effusion.MethodsFrom Jan.2015 to Dec.2015,57 patients clinically confirmed as lung adenocarcinoma with pleural effusion and 36 patients of pneumonia with pleural effusion were selected from Meizhou People’s Hospital.The paraffin imbedded cell blocks technology was applied,and immunohistochemistry was used to detect thyroid transcription factor 1(TTF1),carcino-embryonic antigen(CEA),aspartie proteinase A(NapsinA),mesothelial cells(MC),calretinin(CR),and Wilms Tumor Protein(WT1).ResultsThe positive rates were 89.47%for TTF1,78.94%for CEA,92.98%for NapsinA,17.54%for MC,19.30%for CR,and 7.54%for WT1 in lung adenocarcinoma with pleural effusion,as compared with 8.33%for TTF1,13.89%for CEA, 22.22%for NapsinA,80.56%for MC,97.22%for CR,and 52.78%for WT1 in pneumonia with pleural effusion(all P? 0.01).ConclusionParaflln imbedded cell blocks technology combined with immunohistochemistry has significant value in the differential diagnosis of lung adenocarcinoma with pleural effusion and pneumonia with pleural effusion．

Lung adenocarcinoma;Pleural effusion;Paraffin imbedded cell blocks;Immunohistochemistry

R734.2

A

1003—6350（2017）11—1773—03

2016-12-21)

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.11.018

廖志東。E-mail：hony96@163.com