分析葉酸代謝相關酶基因多態(tài)性與不良孕產(chǎn)的臨床關系

陸繼紅+施曉艷+萬金華

【摘要】 目的 探討葉酸代謝相關酶基因多態(tài)性與不良孕產(chǎn)的臨床關系。方法 80例不良孕產(chǎn)婦女作為不良孕產(chǎn)組， 80例正常生育婦女作為正常組。采集兩組婦女的口腔黏膜上皮細胞提取基因組DNA， 以聚合酶鏈式反應（PCR）技術(shù)進行基因多態(tài)性檢測。觀察兩組婦女的基因型分布特點， 并就其與不良孕產(chǎn)之間的關系展開分析。結(jié)果 不良孕產(chǎn)組婦女亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）基因C677T位點的TT突變純合型、A1298C位點的CC突變純合型， 甲硫氨酸合成酶還原酶（MTRR）基因A66G位點GG突變純合型基因頻率（47.50%、12.50%、18.75%）均高于正常組（21.25%、3.75%、7.50%）， 差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。不良孕產(chǎn)組婦女MTHFR基因C677T位點的CC野生純合型、A1298C位點的AA野生純合型， MTRR基因A66G位點的AA野生純合型基因頻率（21.25%、50.00%、41.25%）均低于正常組（36.25%、66.25%、58.75%）， 差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論 葉酸代謝相關酶基因多態(tài)性與不良孕產(chǎn)的發(fā)生有重要的關聯(lián)。

【關鍵詞】 亞甲基四氫葉酸還原酶；基因多態(tài)性；不良孕產(chǎn)；代謝相關酶

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.16.042

葉酸是一種水溶性維生素， 也是我們常說的維生素B9， 可以治療女性貧血， 更是預防胎兒神經(jīng)管畸形的重要物質(zhì)。葉酸在體內(nèi)需要經(jīng)過多重酶的催化才具有代謝活性， 其中關鍵的MTHFR、MTRR等酶的基因位點多態(tài)性會導致酶的活性降低， 從而造成葉酸代謝障礙， 引發(fā)一系列的疾病[1]。近年來， 臨床上針對葉酸代謝機制的研究越來越多， 很多研究指出[2]， 一部分婦女因葉酸代謝相關酶基因多態(tài)性導致不良孕產(chǎn)情況。本次研究以本院收集的160例婦女為研究對象， 探討葉酸代謝相關酶基因多態(tài)性與不良孕產(chǎn)的臨床關系。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院2014年12月～2016年12月收治的80例不良孕產(chǎn)婦女作為不良孕產(chǎn)組， 同期在本院檢查的80例正常生育婦女作為正常組。160例婦女年齡20～40歲， 平均年齡（30.4±4.5）歲；既往發(fā)生過48例習慣性流產(chǎn)、36例胎停、44例死胎、32例生育神經(jīng)管缺陷患兒；46例生育1次， 114例生育1次以上。排除意識障礙、外感染、解剖學因素、福氣雙方染色體異常者， 本次研究由患者及其家屬簽署同意書。

1. 2 方法

1. 2. 1 設備與試劑 采用PCR分析儀ABI7500， 采用的PCR試劑、引物均由美國ABI公司提供， DNA提取試劑盒購于德國Qiagen公司。葉酸代謝障礙相關的單核苷酸基因多態(tài)性位點包括MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRR A66G， 反應所用的基因多肽位點引物信息， MTHFR C677T上游引物：5'-GAA AAG CTG CGT GAT GAT G-3'， 下游引物5'-TTG AAG GAG AAG GTA TC-3'；MTHFR A1298C上游引物：5'-AAG AAC GAA GAC TTA AAA-3'， 下游引物：5'-TGG GGG GAG GAG CTG AC-3'； MTRR A66G上游引物：5'-AGG CAA AGG CCA TCG CA-3'， 下游引物：5‘-ATC CAT GTA CCA CAG CTT-3'[3]。

1. 2. 2 DNA提取 采集兩組婦女的口腔黏膜上皮細胞， 用柱式抽提試劑盒抽提樣本DNA， 采用基因測序技術(shù)檢測葉酸代謝相關酶MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRR A66G的基因多態(tài)性。每個反應體系包括1 μl 20 ng/μl DNA模板， 5 μl 2×MasterMix， 0.5 μl 20×引物， 3.5 μl去水離子。每個反應體系的總體積為10 μl， 以95℃反應10 min， 后以92℃反應15 s， 60℃反應1 min， 以此進行20個循環(huán)后， 以89℃反應15 s， 60℃反應90 s再進行30個循環(huán)。結(jié)束后進行基因測序， 確定兩組婦女基因分型[4]。

1. 3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

不良孕產(chǎn)組婦女MTHFR基因C677T位點的TT突變純合型、A1298C位點的CC突變純合型， MTRR基因A66G位點GG突變純合型基因頻率（47.50%、12.50%、18.75%）均高于正常組（21.25%、3.75%、7.50%）， 差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。不良孕產(chǎn)組婦女MTHFR基因C677T位點的CC野生純合型、A1298C位點的AA野生純合型， MTRR基因A66G位點的AA野生純合型基因頻率（21.25%、50.00%、41.25%）均低于正常組（36.25%、66.25%、58.75%）， 差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

3 討論

隨著近年來臨床上針對葉酸代謝相關基因的多態(tài)性與出生缺陷、不良妊娠的關系的研究擴大， 國內(nèi)外針對育齡婦女葉酸代謝相關酶基因多態(tài)性的研究逐漸引起關注。MTHFR和MTRR是葉酸代謝過程中關鍵的酶， 前者能夠起到催化N5、N10-亞甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)化為N5-甲基四氫葉酸的作用， 后者可作為甲基供體， 在MTRR的催化下廣泛參與到體內(nèi)的甲基化反應中[5]。有研究指出， 葉酸代謝酶的活性降低， 可能導致同型半胱氨酸不能順利轉(zhuǎn)化為甲硫氨酸， 從而促使血漿中葉酸水平降低， 同型半胱氨酸濃度升高。這樣一來， 就容易引起患者血管內(nèi)皮細胞損傷和功能異常， 血小板粘附和聚集被激活， 引起胎盤血栓性病變[6]。

MTHFR位于1號染色體短臂， 有11個外顯子和10個內(nèi)含子， 其中最受關注的C677T和A1298C兩個基因突變位點是影響葉酸代謝障礙婦女的關鍵。MTRR位于5號染色體短臂， 有15個外顯子和14個內(nèi)含子， 以A66G基因多態(tài)性突變位點為常見[7]。本次研究結(jié)果顯示， 不良孕產(chǎn)組婦女MTHFR基因C677T位點的TT突變純合型、A1298C位點的CC突變純合型， MTRR基因A66G位點GG突變純合型基因頻率（47.50%、12.50%、18.75%）均高于正常組（21.25%、3.75%、7.50%）， 差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。不良孕產(chǎn)組婦女MTHFR基因C677T位點的CC野生純合型、A1298C位點的AA野生純合型， MTRR基因A66G位點的AA野生純合型基因頻率（21.25%、50.00%、41.25%）均低于正常組（36.25%、66.25%、58.75%）， 差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這說明， C677T多態(tài)性突變在MTHFR基因第4個外顯子的第677位核苷酸上細胞嘧啶突變?yōu)樾叵汆奏ぃ?表現(xiàn)為CC、CT、TT三種基因型。此突變導致基因位點處原本222位密碼子編碼的丙氨酸被纈氨酸替代， 酶熱穩(wěn)定性降低。A1298C多態(tài)性突變?yōu)镸THFR基因第7個外顯子上的第1298位核苷酸上腺嘌呤被細胞嘧啶替代， 表現(xiàn)為AA、AC、CC型， 促使該基因位點處429位密碼自編碼的谷氨酸被丙氨酸替代， 酶活性降低。A66G多態(tài)性突變導致甲硫氨酸被異亮氨酸替代， 酶活性降低[8]。

綜上所述， 葉酸代謝相關酶基因多態(tài)性與不良孕產(chǎn)的發(fā)生有重要的關聯(lián)。

參考文獻

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[8] 謝曉媛. 葉酸代謝酶MTHFR、MTRR基因多態(tài)性與原因不明復發(fā)性流產(chǎn)相關性研究. 天津醫(yī)科大學， 2015.