室溫下不同血液標(biāo)本及存放時間對神經(jīng)元特異性烯醇化酶檢測結(jié)果的影響

郭健

【摘要】 目的：分析研討室溫下不同血液標(biāo)本及存放時間對神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）檢測結(jié)果的影響。方法：隨機(jī)采集25名健康體檢者的血樣本，空腹采集靜脈血，將每份血液分別用肝素抗凝管（設(shè)為對照組）和促凝劑管/分離膠管（設(shè)為研究組），在1 h內(nèi)離心，并檢測血液標(biāo)本中NSE水平，再將標(biāo)本存放于室溫（25±0.5）℃中，分別測定存放2、3、4 h時的NSE水平。結(jié)果：對照組血液樣本在室溫下放置1～4 h時NSE水平均明顯高于研究組，組間數(shù)據(jù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；研究組血液標(biāo)本在室溫下存放不同時間點(diǎn)的NSE檢測結(jié)果對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；對照組血液標(biāo)本在室溫下存放2、3、4 h時NSE檢測結(jié)果均顯著高于1 h時，且4 h時NSE檢測結(jié)果均高于2、3 h，組間數(shù)據(jù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：室溫存放4 h內(nèi)的促凝管/分離膠管血液樣本，其重復(fù)性較好，檢測結(jié)果可靠，可作為臨床樣本復(fù)核、檢測，為分析前檢測質(zhì)量提供科學(xué)合理依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 神經(jīng)元特異性烯醇化酶； 血液標(biāo)本； 室溫； 存放時間； 檢測結(jié)果

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.11.038 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2017）11-0070-02

神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）主要是參與糖酵解途徑中的一種甘油分解而出的最后的酶，其存在于神經(jīng)內(nèi)分泌組織以及神經(jīng)組織中[1]。并且NSE在腦組織細(xì)胞中的活性最高，其次神經(jīng)分泌組織和外周神經(jīng)組織的活性居中，可作為神經(jīng)元損傷的一種標(biāo)志物，同時也可作為一種腫瘤標(biāo)志物用在垂體腺瘤、小細(xì)胞肺癌及神經(jīng)母細(xì)胞癌等疾病的診斷中。由于血小板和紅細(xì)胞也有著NSE同工酶共存在，若全血標(biāo)本存放周期延長或者有溶血現(xiàn)象出現(xiàn)時，這是NES同工酶將會釋放至細(xì)胞外，因此引起血清中NES水平明顯偏高[2]。為了減少影響NSE分析的因素，此次將25名健康體檢者的血樣本納入討論中，其目的則在于分析室溫下不同血液標(biāo)本及存放時間對神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）檢測結(jié)果的影響，具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取來筆者所在醫(yī)院參與健康體檢者25名，男18名，女7名，年齡26～59歲，平均（43.17±5.09）歲。每位體檢者分別應(yīng)用肝素鋰真空采血管（對照組）和促凝劑/分離膠（研究組）收集血液標(biāo)本。

1.2 方法

儀器：羅氏全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)；試劑：采取新購買的配套試劑。兩組均嚴(yán)格依照正規(guī)操作方式，于空腹?fàn)顟B(tài)下，采集4 ml靜脈血，抗凝管采集后，及時充分混勻，將標(biāo)本均放置于室溫（25±0.5）℃內(nèi)，在1 h內(nèi)離心，檢測NSE水平，血液標(biāo)本無溶血及明顯黃疸、脂血；離心后再將標(biāo)本存放于室溫（25±0.5）℃中，分別測定存放2、3、4 h時的NSE水平。血液標(biāo)本每次檢測時，均要對其上層血漿或血清進(jìn)行混勻，對每份樣本檢測2次，并取其平均值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS 13.0軟件分析所得數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

對照組血液樣本在室溫下放置1～4 h時NSE水平均明顯高于研究組，組間數(shù)據(jù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；研究組血液標(biāo)本在室溫下存放不同時間點(diǎn)的NSE檢測結(jié)果對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；對照組血液標(biāo)本在室溫下存放2、3、4 h時NSE檢測結(jié)果均顯著高于1 h時，且4 h時NSE檢測結(jié)果均高于2、3 h，組間數(shù)據(jù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

*與存放1 h對比，P<0.05；#與存放2 h對比，P<0.05；△與存放3 h對比，P<0.05

3 討論

NES為烯醇化酶中的一種同工酶，而烯醇化酶是五種同工酶構(gòu)成，各自由γ、β、α這三種亞基構(gòu)成的二聚體，在這里面由兩個γ亞基組成的二聚體存在于神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞，故稱之為NSE。NSE不僅作為反映腦損傷的程度的重要指標(biāo)之一，而且也是神經(jīng)母細(xì)胞瘤臨床診斷敏感度和特異性、小細(xì)胞肺癌較好的腫瘤標(biāo)志物[3]。

NSE在臨床中應(yīng)用廣泛，但是其檢測的影響因素較多。NSE在紅細(xì)胞和血小板中同時存在，溶血標(biāo)本肯定會對NSE的檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。所以，在分離標(biāo)本的時候要盡可能地避免溶血，在臨床檢驗(yàn)中若是遇到了溶血標(biāo)本應(yīng)該及時退回重新采集，不然簽發(fā)檢驗(yàn)報告的時候必須予以注明。另外標(biāo)本在處理前的放置過程中，存放時間的延長、不同程度的振蕩、多次離心、溫度的改變等都可能會使紅細(xì)胞和血清中的NSE進(jìn)入血清當(dāng)中，導(dǎo)致NSE檢測結(jié)果的錯誤偏高[4-5]。NSE檢測要求在樣本采集完成后，應(yīng)該在1 h以內(nèi)離心樣本并完成NSE的測定。但是實(shí)際工作中往往達(dá)不到此要求，這是因?yàn)椴》坷锏难簶?biāo)本大多在凌晨6點(diǎn)開始采集，標(biāo)本被送去測定的時候至少已經(jīng)過了3 h，另外若是醫(yī)院規(guī)模過于龐大，則樣本NSE的測定需要推延到第2天送到總院集中測定，故臨床檢驗(yàn)中的NSE結(jié)果往往都是偏高的，這在一定程度上增加了患者的檢查負(fù)擔(dān)和心理壓力，因此在本試驗(yàn)中觀察了不同的采血管、標(biāo)本存放時間對NSE檢測結(jié)果的影響，以便能夠?yàn)榕R床提供更為精確的檢測結(jié)果。

本次研究結(jié)果顯示放置1 h的標(biāo)本的NSE檢測結(jié)果的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。當(dāng)標(biāo)本放置時間延長后，并且經(jīng)過了標(biāo)本的保存、送檢、處理等流程后，這時做的NSE檢測結(jié)果和陽性率都有了較大幅度的提高。將標(biāo)本在低溫下靜置幾小時，不經(jīng)過任何的處理流程直接進(jìn)行NSE的測定，其結(jié)果差異并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。另外在檢驗(yàn)中，使用血清分離膠可以有效地縮短血液凝固時間，離心完畢后形成的固化屏障隔離層同時可以使細(xì)胞和血清完全分離，保證了血清的成分不會受到細(xì)胞成分的影響。在日常工作中，醫(yī)院應(yīng)盡量使用分離膠采血管，同時臨床采血人員應(yīng)能夠正確使用采血管和及時送檢待檢測樣本，當(dāng)標(biāo)本送達(dá)實(shí)驗(yàn)室時，應(yīng)立即離心測定，這樣可以縮短標(biāo)本的放置時間，減少紅細(xì)胞和血清間的相互干擾，保證NSE檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性[6]。

綜上所述，檢測室溫存放4 h內(nèi)的促凝管/分離膠管血液樣本，其重復(fù)性較好，檢測結(jié)果可靠，可作為臨床樣本復(fù)核、檢測，為分析前檢測質(zhì)量提供科學(xué)合理依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]隋靖喆，李山，秦雪，等.標(biāo)本不同處理因素對神經(jīng)元特異性烯醇化酶測定的影響[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，25（14）：1950-1951.

[2] Tolan N V，Vidal-Folch N，Algeciras-Schimnich A，et al.Individualized correction of neuron-specific enolase （NSE） measurement in hemolyzed serum samples[J].Clinica Chimica Acta：International Journal of Clinical Chemistry and Applied Molecular Biology，2013，424（4546）：216-221.

[3]黃嫵姣，田春華，朱偉才，等.不同采血管、標(biāo)本處理過程以及存放時間對，NSE檢測結(jié)果的影響[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2016，13（15）：2090-2091.

[4]仇彩霞，江崇才，王盛楠，等.影響神經(jīng)元特異性烯醇化酶檢測的新因素[J].青島醫(yī)藥衛(wèi)生，2013，45（1）：19-21.

[5]謝軍，張俠，李紅林，等.不同血液標(biāo)本及存放時間對神經(jīng)元特異性烯醇化酶測定的影響[J].蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2013，38（12）：1654-1655.

[6] Torsetnes S B，L?vbak S G，Claus C，et al.Immunocapture and LC-MS/MS for selective quantification and differentiation of the isozymes of the biomarker neuron-specific enolase in serum[J].Journal of Chromatography，B.Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences，2013，929（7）：125-132.

（收稿日期：2016-12-23）