身痛逐瘀湯對(duì)DOMS模型大鼠骨骼肌微損傷和炎癥因子的影響

馮宇 楊明會(huì) 竇永起 李紹旦 張印 王瑛 蒲香蓉

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身痛逐瘀湯對(duì)DOMS模型大鼠骨骼肌微損傷和炎癥因子的影響

馮宇 楊明會(huì) 竇永起 李紹旦 張印 王瑛 蒲香蓉

目的 探討身痛逐瘀湯治療延遲性肌肉酸痛癥(delayed onset muscle soreness, DOMS)的作用機(jī)理。方法 將81只雄性SD大鼠按照隨機(jī)原則分為運(yùn)動(dòng)模型組、西藥對(duì)照組、中藥實(shí)驗(yàn)組，每組27只。各組大鼠均進(jìn)行力竭游泳訓(xùn)練，負(fù)重為大鼠體質(zhì)量的3%。西藥對(duì)照組給予維生素C片及維生素E軟膠囊，中藥實(shí)驗(yàn)組給予身痛逐瘀湯治療。觀察各組大鼠血清骨骼肌微損傷指標(biāo)和炎癥因子變化。結(jié)果 中藥實(shí)驗(yàn)組DOMS大鼠血清肌酸激酶值在24、72小時(shí)顯著低于運(yùn)動(dòng)模型組及西藥對(duì)照組；乳酸脫氫酶值在24、48、72小時(shí)顯著低于運(yùn)動(dòng)模型組，其中24、48小時(shí)顯著低于西藥對(duì)照組；前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2)值在24、72小時(shí)顯著低于運(yùn)動(dòng)模型組。結(jié)論 身痛逐瘀湯可以降低DOMS模型大鼠骨骼肌微損傷程度，并抑制炎癥因子的釋放。

身痛逐瘀湯； 延遲性肌肉酸痛癥； 骨骼肌微損傷； 炎癥因子

延遲性肌肉酸痛癥(delayed onset muscular soreness，DOMS)多在運(yùn)動(dòng)后24小時(shí)出現(xiàn)，主要癥狀有肌肉僵硬、酸痛、腫脹，重者疼痛劇烈，活動(dòng)受限。上述癥狀在運(yùn)動(dòng)后24～72小時(shí)達(dá)到高峰，5～7天后疼痛基本消失[1]。因?qū)ζ溲芯枯^少，目前尚無(wú)完善、有效的預(yù)防及治療方法。本實(shí)驗(yàn)通過觀察身痛逐瘀湯對(duì)DOMS模型大鼠骨骼肌微損傷和炎癥因子的影響，為治療DOMS提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)采用健康雄性SPF級(jí)成年雄性SD大鼠81只，體質(zhì)量220～250 g。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分籠飼養(yǎng)，每籠5只，飼料為大鼠生長(zhǎng)期維持飼料，自由飲水、飲食；室內(nèi)溫度控制在(22±3)℃，濕度控制在50%，晝夜節(jié)律用日光燈控制，每天光照時(shí)間12小時(shí)(08：00～20：00)；每天更換飲水和飼料，每2天更換一次墊料；膳食平衡3天。

1.2 分組及給藥方法

按照隨機(jī)原則將動(dòng)物分為運(yùn)動(dòng)模型組(A組)、西藥對(duì)照組(B組)、中藥實(shí)驗(yàn)組(C組)，每組27只，共81只。

運(yùn)動(dòng)模型組(A組)：運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)后不應(yīng)用藥物治療，運(yùn)動(dòng)后25、49、73小時(shí)采集血清，標(biāo)記為A1、A2、A3組。西藥對(duì)照組(B組)：膳食平衡3天后行運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)，運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)后第0、24、48、72小時(shí)灌胃對(duì)照藥物共2 mL(維生素E和維生素C液體各1 mL)；并于運(yùn)動(dòng)后25、49、73小時(shí)采集血清，標(biāo)記為B1、B2、B3組。中藥實(shí)驗(yàn)組(C組)：膳食平衡3天行運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)，運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)后第0、24、48、72小時(shí)灌胃中藥2 mL；并于運(yùn)動(dòng)后25、49、73小時(shí)采集血清，標(biāo)記為C1、C2、C3組。

1.3 藥物制備

中藥水煎劑：桃仁9 g、紅花9 g、秦艽3 g、川芎6 g、甘草6 g、羌活3 g、沒藥6 g、當(dāng)歸9 g、五靈脂6 g、香附3 g、牛膝9 g、地龍6 g，煎煮二次，過濾后將兩次藥液混勻，濃縮至0.964 g/mL藥液，于4℃冰箱內(nèi)冷藏備用。

對(duì)照藥物：維生素C片(太原藥業(yè)制造，0.1 g/片)配制成2.57 mg/mL藥液，混勻后每只大鼠每天灌胃1 mL。維生素E軟膠囊(天津中央藥業(yè)生產(chǎn)，0.1 g/粒)：配制成7.71 mg/mL藥液，混勻后每只大鼠每天灌胃1 mL。

1.4 造模方法

各組大鼠均進(jìn)行一次力竭訓(xùn)練。讓實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在100 cm×50 cm×70 cm的玻璃缸中負(fù)重游泳，靜水深55 cm，水溫(33±2)℃，負(fù)重為大鼠體重的3%；上午9點(diǎn)開始進(jìn)行1次游泳運(yùn)動(dòng)，在游泳過程中，當(dāng)大鼠運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性明顯下降、出現(xiàn)反復(fù)下沉?xí)r，或當(dāng)大鼠浮在水面不運(yùn)動(dòng)時(shí)用木棒驅(qū)趕，使其維持運(yùn)動(dòng)狀態(tài)；當(dāng)下沉超過10秒，連續(xù)下沉3次即將動(dòng)物取出游泳缸用電吹風(fēng)吹干入籠[2]。

1.5 血清分離及檢測(cè)

在動(dòng)物麻醉情況下切開腹部，暴露出腹部動(dòng)脈，用10 mL一次性注射器從腹部動(dòng)脈取血，取血時(shí)間為早上11點(diǎn)；取8 mL血樣以3000 rpm速率離心15分鐘，抽取上清液。

生化檢測(cè)：全自動(dòng)生化分析儀和肌酸激酶(creatine kinase，CK)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)試劑盒測(cè)量CK、LDH的活性。ELISA檢測(cè)：標(biāo)準(zhǔn)品稀釋與加樣：按說(shuō)明書要求稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，并每孔加入50 μL，空白孔加入50 μL樣品稀釋液，前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為120 ng/L、60 ng/L、30 ng/L、15 ng/L、7.5 ng/L和0 ng/L。操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 身痛逐瘀湯可以降低DOMS模型大鼠的骨骼肌微損傷程度

中藥實(shí)驗(yàn)組DOMS大鼠血清CK值在24、72小時(shí)顯著低于相同時(shí)相的運(yùn)動(dòng)模型組(P<0.01)及西藥對(duì)照組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；LDH值在24、48、72小時(shí)顯著低于相同時(shí)相的運(yùn)動(dòng)模型組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，24、48小時(shí)顯著低于相同時(shí)相的西藥對(duì)照組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以上結(jié)果顯示中藥可以降低DOMS模型大鼠的肌酶數(shù)值，降低其骨骼肌微損傷程度。見表1、表2。

表1 三組大鼠CK值的比較

注： 與運(yùn)動(dòng)模型組比較，第24小時(shí)aP<0.01，第72小時(shí)bP<0.01；與西藥對(duì)照組比較，第24小時(shí)cP<0.01，第72小時(shí)dP<0.01。

表2 三組大鼠LDH值的比較

注： 與運(yùn)動(dòng)模型組比較，第24小時(shí)aP<0.01，第48小時(shí)bP<0.01，第72小時(shí)cP<0.01。與西藥對(duì)照組比較，第24小時(shí)dP<0.05，第48小時(shí)eP<0.05。

2.2 身痛逐瘀湯可以抑制DOMS模型大鼠炎癥因子的分泌

中藥實(shí)驗(yàn)組DOMS大鼠PGE2值在24、72小時(shí)顯著低于運(yùn)動(dòng)模型組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表3。以上結(jié)果顯示中藥可以降低DOMS模型大鼠的PGE2數(shù)值，說(shuō)明可以通過抑制炎癥因子的分泌來(lái)減輕骨骼肌疼痛程度。

表3 三組大鼠PGE2的比較

注： 與運(yùn)動(dòng)模型組比較，第24小時(shí)aP<0.05，第72小時(shí)bP<0.05。

3 討論

研究認(rèn)為DOMS主要由直接的機(jī)械損害和炎癥因素導(dǎo)致。機(jī)械損害主要表現(xiàn)于運(yùn)動(dòng)性骨骼肌微損傷。在運(yùn)動(dòng)過程中，由于肌細(xì)胞膜受到損傷，細(xì)胞膜通透性增加，引起血液中肌酶增高和肌紅蛋白含量增加[3]，主要檢測(cè)指標(biāo)有CK和LDH。炎癥因素表現(xiàn)在劇烈運(yùn)動(dòng)后PGE2等炎癥因子的大量釋放[2]，刺激外周神經(jīng)等感受器導(dǎo)致疼痛。西醫(yī)療法常用非甾體類抗炎藥物、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑和抗氧化劑等藥物，但臨床療效不確定，也存在不良反應(yīng)等問題。

中醫(yī)以其毒副作用小，療效佳在DOMS的治療方面發(fā)揮重要的作用[4-5]。中醫(yī)認(rèn)為：由大運(yùn)動(dòng)量引起的DOMS屬中醫(yī)痛癥范疇，多由“經(jīng)脈不通，氣血瘀滯”引起，這與目前眾多中醫(yī)學(xué)者在臨床上對(duì)DOMS的認(rèn)識(shí)相吻合[6-8]，治宜行氣活血、通絡(luò)止痛。身痛逐瘀湯是清代名醫(yī)王清任創(chuàng)制的活血名方，記錄于《醫(yī)林改錯(cuò)》中，具有行氣活血、通絡(luò)止痛的功效。方中桃仁、紅花、當(dāng)歸、川芎可活血祛瘀，沒藥、五靈脂、香附可行氣血、止疼痛，牛膝、地龍可疏通經(jīng)絡(luò)，秦艽、羌活可祛風(fēng)除濕，甘草可調(diào)和諸藥。諸藥聯(lián)用，共奏行氣活血、通絡(luò)止痛之功效。經(jīng)查閱資料，未見活血法治療DOMS的實(shí)驗(yàn)文章報(bào)道，所以本團(tuán)隊(duì)開展實(shí)驗(yàn)研究，初步探討并明確活血法(身痛逐瘀湯)治療DOMS的療效機(jī)制。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)身痛逐瘀湯治療DOMS的主要機(jī)理有以下兩方面：(1)降低DOMS模型大鼠的骨骼肌微損傷程度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示中藥實(shí)驗(yàn)組DOMS大鼠血清CK值在24、72小時(shí)顯著低于運(yùn)動(dòng)模型組及西藥對(duì)照組；LDH值在24、48、72小時(shí)顯著低于運(yùn)動(dòng)模型組，其中24、48小時(shí)顯著低于西藥對(duì)照組，證明身痛逐瘀湯可以明顯降低DOMS模型大鼠CK、LDH值，有效保護(hù)骨骼肌的微損傷，而且療效優(yōu)于維生素C、維生素E等抗氧化劑。(2)抑制炎癥因子的釋放。中藥實(shí)驗(yàn)組DOMS大鼠PGE2值在24、72小時(shí)顯著低于運(yùn)動(dòng)模型組，證明身痛逐瘀湯可以有效抑制DOMS大鼠炎癥因子的釋放，減輕DOMS疼痛癥狀。本實(shí)驗(yàn)首次明確了活血法(身痛逐瘀湯)治療DOMS的部分作用機(jī)理，為中藥復(fù)方治療DOMS提供科學(xué)依據(jù)。但限于實(shí)驗(yàn)中難以評(píng)價(jià)受損骨骼肌的疼痛程度，無(wú)法明確活血法(身痛逐瘀湯)治療DOMS的臨床療效，本研究團(tuán)隊(duì)擬進(jìn)一步開展臨床試驗(yàn)，通過測(cè)定身痛逐瘀湯降低DOMS患者骨骼肌疼痛程度和收縮功能的恢復(fù)程度來(lái)綜合評(píng)價(jià)其療效，并進(jìn)一步在臨床上推廣應(yīng)用。

[1] 郝春麗，楊雋，張曉軍.延遲性肌肉酸痛的發(fā)生機(jī)制和防治措施[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2013，36(1)：100-101.

[2] 吳云川，孫永，李怡，等.推拿對(duì)一次性力竭運(yùn)動(dòng)DOMS大鼠模型血清PGE2的影響[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，30(4)：386-388.

[3] 周越，李揚(yáng)，王瑞元，等.運(yùn)動(dòng)性骨骼肌損傷評(píng)價(jià)指標(biāo)血清CK、LDH、Mb的比較[J].中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志，2008，27(2)：206-208.[4] 張慧，時(shí)震宇，趙廣高，等.大蒜素與聯(lián)合抗氧化劑干預(yù)對(duì)運(yùn)動(dòng)員DOMS和CK-MM、CK等的影響[J].武漢體育學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，45(3)：59-62.

[5] 趙廣高，蘇全生，李新建，等.大蒜素與聯(lián)合抗氧化劑對(duì)一次大強(qiáng)度離心運(yùn)動(dòng)后運(yùn)動(dòng)員血清T-AOC等水平的影響[J].首都體育學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，24(2)：189-192.

[6] 李晟，李小剛.延遲性肌肉酸痛產(chǎn)生的機(jī)制及中醫(yī)治療[J].赤峰學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2009，25(7)：69-70.

[7] 張海平，劉建軍，董敏輝.延遲性肌肉酸痛的研究進(jìn)展[J].沈陽(yáng)體育學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，26(3)：52-55.

[8] 馬建，張?chǎng)?，劉波，?中藥消除運(yùn)動(dòng)性疲勞臨床研究之四—外用中藥“疲王霜”對(duì)女子重競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員肌肉酸痛的臨床療效觀察[J].中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志，2011，30(1)：67-69.

(本文編輯： 禹佳)

Effect ofShentongZhuyudecoction on skeletal muscle micro-injury and inflammatory factors of DOMS rats model

FENGYu，YANGMinghui，DOUYongqi，etal.

DepartmentofTraditionalChineseMedicine,PLAGeneralHospital，Beijing100853，China

Correspongdingauthor:YANGMinghui，E-mail：ymh9651@sina.com

Objective To explore the therapy mechanism ofShentongZhuyudecoction on DOMS. Methods 81 male SD rats were randomly divided into control group, western medicine control group and Chinese medicine treatment group. All rats were given exhausting swimming train with a load of 3% body weight. The western medicine control group was treated with vitamin C tablets and vitamin E soft capsules, the Chinese medicine treatment group was treated withShentongZhuyudecoction. The changes of CK, LDH, PGE2were observed. Results The level of CK in Chinese medicine treatment group was obviously lower than that of control group, western medicine control group in 24 hours and 72 hours. The level of LDH in Chinese medicine treatment group was obviously lower than that of control group, western medicine control group in 24 hours and 48 hours. The level of PGE2in Chinese medicine treatment group was obviously lower than that of control group in 24 hours and 72 hours. ConclusionShentongZhuyudecoction can lower the level of skeletal muscle micro-injury and inhibit the release of inflammatory factors.

ShentongZhuyudecoction; Delayed onset muscular soreness； Delayed onset muscle soreness; Inflammatory factors

100853 北京，中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院中醫(yī)內(nèi)科(馮宇、楊明會(huì)、竇永起、李紹旦、張印、王瑛、蒲香蓉)；中國(guó)人民解放軍93424部隊(duì)(王瑛)

馮宇(1978- )，碩士，主治醫(yī)師。研究方向：中西醫(yī)結(jié)合臨床。E-mail：fengwengang5097@sina.com

楊明會(huì)(1962- )，教授，主任醫(yī)師。研究方向：中醫(yī)及中西醫(yī)結(jié)合臨床及基礎(chǔ)研究。E-mail：ymh9651@sina.com

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674-1749.2017.04.008

2016-07-27)