不同藥劑處理甜瓜果斑病帶菌種子對(duì)幼苗的防病效果

萬秀琴，王惠林,，宋揚(yáng)帆，張長通，楊 航，邱火箭

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)與園藝學(xué)院 烏魯木齊 830052； 2.國家瓜類工程研究技術(shù)中心 新疆昌吉 831100）

不同藥劑處理甜瓜果斑病帶菌種子對(duì)幼苗的防病效果

萬秀琴1，王惠林1,2，宋揚(yáng)帆1，張長通1，楊 航1，邱火箭2

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)與園藝學(xué)院 烏魯木齊 830052； 2.國家瓜類工程研究技術(shù)中心 新疆昌吉 831100）

為篩選出有效防治細(xì)菌性果斑病的種子處理劑，選用BX6（有機(jī)銅類）、九醋酮等9種新型殺菌劑及3%噻霉酮、雙氧水、蘇納米等8種常用殺菌劑，采用平板抑菌圈法比較其抑菌效果，并觀測(cè)比較其中的有效處理對(duì)甜瓜幼苗發(fā)病情況及生長的影響。結(jié)果表明，平板抑菌試驗(yàn)中，抑菌效果表現(xiàn)最好的是過氧乙酸（1∶50倍液），其余依次是30%雙氧水（1∶50倍液）、BX6（原液）、硝鉀銅（原液）、九醋酮（原液）、蘇納米。從藥劑的抑菌效果、種子出苗率及幼苗生長綜合表現(xiàn)看，BX6（原液）處理20～30 min表現(xiàn)最佳，防治效果為72.2%～78.8%；其次是過氧乙酸（1∶50倍液）處理20～30 min，防治效果為71.5%～72.2%；雙氧水（1∶50倍液）處理30 min，防治效果達(dá)71.5%。綜上認(rèn)為，BX6、過氧乙酸、雙氧水在試驗(yàn)中防病效果較佳，可作為生產(chǎn)中防治甜瓜細(xì)菌性果斑病的種子處理劑。

甜瓜；細(xì)菌性果斑；藥劑；抑菌圈；防治效果

細(xì)菌性果斑病菌（Acidovorax avenaessp.Citrulli）是嚴(yán)重危害西瓜甜瓜的檢疫性病害[1]，近年來該病害已在我國新疆、海南、內(nèi)蒙古等地發(fā)生并呈逐漸嚴(yán)重的趨勢(shì)，對(duì)瓜類生產(chǎn)已構(gòu)成了極大威脅[2]。2010—2011年，新疆北疆部分西瓜甜瓜產(chǎn)區(qū)，果斑病在西瓜甜瓜上的發(fā)病率在60%以上，從病果上收集的種子，其幼苗的發(fā)病率為7%～100%[3]。該病通過種子帶菌進(jìn)行遠(yuǎn)距離傳播[4]，引起果實(shí)腐爛變褐，嫩莖、葉腐爛，幼苗坍塌死亡，損失超過80%，嚴(yán)重危害西瓜甜瓜等葫蘆科作物生產(chǎn)[5]。前人對(duì)新疆不同地區(qū)的甜瓜、籽瓜的種子進(jìn)行帶菌率測(cè)定，發(fā)現(xiàn)種子內(nèi)外都攜帶病原菌且病瓜種子帶菌率在25%～60%[6-8]。孔祥義等[9]證明果腐凈1號(hào)有很好的殺菌效果，但對(duì)甜瓜幼苗長勢(shì)及嫁接后長勢(shì)有一定的影響。翁曉梅等[10]和趙廷昌等[11]用2%～5%的鹽酸處理哈密瓜帶菌種子，對(duì)細(xì)菌性果斑病防治效果非常明顯，丁建軍等[12]用2%～8%的雙氧水浸泡帶菌種子15 min，既殺菌又提高種子的發(fā)芽率。目前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上防治細(xì)菌性果斑病常用農(nóng)用鏈霉素和銅制劑等藥劑，雖有一定的作用，但均未達(dá)到理想的防治效果[2]。筆者針對(duì)細(xì)菌性果斑病菌的防治，選用抑菌效果比較試驗(yàn)篩選出的有明顯抑菌作用的5種藥劑，觀測(cè)比較5種藥劑處理帶菌種子后對(duì)幼苗防病效果及生長的影響，以期篩選出防病效果理想并能促進(jìn)幼苗生長的藥劑和處理方法，為甜瓜種子處理及苗期防病提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)于2016年6—8月在新疆昌吉的新疆西域種業(yè)股份有限公司試驗(yàn)基地進(jìn)行，選用的種子材料為甜瓜新品系‘Vm 9-109’，由新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)與園藝學(xué)院提供，供試細(xì)菌性果斑病菌株由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)植物檢疫研究室提供，菌株代號(hào)為xjl 12。供試藥劑為國家瓜類工程技術(shù)研究中心自主研發(fā)配制的化學(xué)藥劑和生產(chǎn)中的常用藥劑，共17種，詳見表1。

表1 供試藥劑及濃度配比

1.2 方法

1.2.1 病原菌的培養(yǎng) 細(xì)菌性果斑病菌在KMB（20 g胰蛋白胨，1.5 g K2HPO4，1.5 g MgSO4·7H2O，10 g甘油，10 g瓊脂粉，定容到1 L）固體平板上進(jìn)行活化，28℃培養(yǎng)24 h，挑取單菌落接種于NB液體培養(yǎng)基中，220 r·min-1、28℃培養(yǎng)16～18 h。用分光光度計(jì)測(cè)定菌液懸浮液的OD值，并用滅菌水將菌液懸浮液濃度調(diào)到OD600為0.2～0.5備用[13]。

1.2.2 平板抑菌試驗(yàn) 采用抑菌圈法[14]，將普通濾紙打成直徑6 mm的圓片，裝在試管中密封高壓滅菌。將滅菌的KMB培養(yǎng)基（約9 mL）冷卻到45℃左右，加入1 mL已經(jīng)配制好的1×108cfu·mL-1的懸浮液，轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿使培養(yǎng)基與菌液混合均勻，靜置凝成平板。用鑷子將滅菌后的濾紙（3片/板）放在已凝固的平板培養(yǎng)基中，滴入10 μL配制好的藥液在濾紙片上。以無菌水為對(duì)照，最后將平板培養(yǎng)基倒置在28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后觀察，采用十字交叉法用直尺測(cè)量抑菌圈直徑。

1.2.3 種子處理試驗(yàn) 供試種子先在30℃下干燥12 h，再在65℃干熱條件（電熱恒溫箱）下處理72 h進(jìn)行干熱滅菌[15]，一部分種子用已經(jīng)配制好的1×108cfu·mL-1的懸浮液浸種2 h，然后陰干備用。將5種藥劑BX6、九醋酮、蘇納米、過氧乙酸、雙氧水按不同濃度配比及不同時(shí)間組合，處理帶有細(xì)菌性果斑病的種子，陰干備用。CK1為種子干熱處理后未進(jìn)行人工接菌，CK2為干熱處理后人工接菌未進(jìn)行藥劑處理。

育苗基質(zhì)用以V鋸末∶V蛭石=4∶1混合配制并高溫滅菌，播種在50孔穴盤中，穴盤經(jīng)84消毒液浸泡15 min后清洗干凈。每穴播2粒種子，每處理1個(gè)穴盤，設(shè)置3次重復(fù)，共計(jì)100粒，出苗后每天傍晚澆水，在真葉展開后噴施營養(yǎng)液以供幼苗生長。

1.2.4 試驗(yàn)指標(biāo)的統(tǒng)計(jì) 調(diào)查統(tǒng)計(jì)幼苗發(fā)病率及病情，病情分級(jí)參考Hopkins等[16]的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，且略有改動(dòng)，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)如下。0級(jí)：植株無病斑；1級(jí)：葉片病斑較少，病斑面積占整棵植株面積的20%以下；3級(jí)：病斑較多，病斑面積占總面積的21%～40%；5級(jí)：病斑較多，病斑面積占總面積的41%～60%；7級(jí)：病斑很多或連成大斑，病斑面積占總面積的61%～80%；9級(jí)：病斑很多或連成大斑，胚軸或莖部有病斑，病斑面積占總面積的81%以上，植株死亡。

病情指數(shù)（DI）=（∑發(fā)病級(jí)數(shù)×發(fā)病株數(shù)）/（最高病級(jí)×總株數(shù)）×100；

防治效果/%=CK2病情指數(shù)-處理病情指數(shù)/ CK2病情指數(shù)×100[5]；

相對(duì)出苗率/%=處理出苗率/CK2出苗率× 100。

同時(shí)各處理在出苗后（子葉已完全展開）統(tǒng)計(jì)出苗率，并于第1片真葉平展期測(cè)量植株的株高、莖粗、葉綠素含量（SPAD值）、葉片長×寬，每重復(fù)測(cè)量10株，共3次重復(fù)。數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0進(jìn)行方差分析，并對(duì)平均數(shù)進(jìn)行Duncan’s多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同藥劑對(duì)甜瓜果斑病菌的抑菌效果

通過對(duì)供試殺菌劑平板抑菌試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較可知（表2，圖1），BX6（原液）、硝鉀銅（原液）、九醋酮（原液）、過氧乙酸（1∶50倍液）、雙氧水（1∶50倍液）都有較好的抑菌效果。其中過氧乙酸和雙氧水與對(duì)照的差異極顯著，試驗(yàn)中平均抑菌圈直徑表現(xiàn)最好，分別為21.7、17.3 mm，說明這2種殺菌劑對(duì)細(xì)菌性果斑病有較好的抑菌作用。BX6、黑蘭怪、九醋酮和蘇納米平均抑菌圈直徑為9.0～10.0 mm，與對(duì)照差異顯著，說明有抑菌作用，但各處理之間的抑菌效果無顯著差異。其余11種藥劑的表現(xiàn)與對(duì)照無顯著差異，說明抑菌作用不明顯。

表2 不同藥劑對(duì)甜瓜果斑病菌的抑菌效果

圖1 不同藥劑處理的甜瓜果斑病菌的抑菌圈（部分）

2.2 不同藥劑各處理對(duì)帶菌種子出苗率的影響

通過對(duì)不同藥劑處理的種子出苗率進(jìn)行比較可知（表3），BX6各處理的出苗率為88%～95%，均低于CK1的出苗率。BX6原液處理較CK2的相對(duì)出苗率大多大于100%；九醋酮各處理的出苗率為87%～90%，均低于CK1和CK2的出苗率，相對(duì)出苗率均小于100%；蘇納米各處理的出苗率為84%～95%，均小于CK1的出苗率，其中1∶50倍液處理10～20 min相對(duì)出苗率大于100%；過氧乙酸各處理的出苗率為84%～97%，其中1∶50倍液處理20～40 min相對(duì)出苗率大于100%；雙氧水 1∶50～1∶100倍液處理10～20 min的出苗率大于CK2，相對(duì)出苗率100%～104.3%。供試藥劑中平均出苗率最高的是雙氧水處理，其余處理依次是BX6、過氧乙酸、蘇納米，平均出苗率最低的是九醋酮處理。

表3 不同藥劑各處理對(duì)甜瓜出苗率的影響

2.3 不同藥劑各處理對(duì)甜瓜幼苗發(fā)病情況的影響

人工接菌種子通過供試藥劑不同濃度及時(shí)間處理，由幼苗的發(fā)病率及病情指數(shù)試驗(yàn)結(jié)果可知（表4），發(fā)病中期和末期各處理的發(fā)病率和病情指數(shù)基本表現(xiàn)為隨著藥劑處理濃度及處理時(shí)間的增加而降低，不同藥劑之間防治效果差異顯著。從發(fā)病中期調(diào)查統(tǒng)計(jì)的結(jié)果來看，雙氧水（1∶50倍液）處理30～40 min，防治效果為85.7%～87.0%，防病效果最好，顯著高于其余處理。由發(fā)病末期的試驗(yàn)結(jié)果可知，防治效果最好的是BX6原液處理20～40 min，防治效果為72.2%～78.8%，顯著高于其余處理。將防治效果大于70%作為篩選依據(jù)，從發(fā)病中期和發(fā)病末期來看，BX6和雙氧水在發(fā)病中期和末期都有較好的防病效果，說明藥效的持續(xù)時(shí)間長，防治效果明顯。

表4 不同藥劑各處理對(duì)甜瓜幼苗發(fā)病情況的影響

2.4 不同藥劑各處理對(duì)甜瓜幼苗生長情況的影響

由表5可知，BX6（原液）處理10 min，雙氧水（1∶50倍液）處理10、20 min，過氧乙酸（1∶50倍液）處理10 min后的株高與CK2相比無顯著性差異，其余處理的株高均低于CK2；BX6（原液）處理20～30 min，雙氧水（1∶25～1∶75倍液）處理15 min后的莖粗較CK2相比顯著增加；藥劑處理后的葉綠素含量變化無規(guī)律，同一藥劑各處理間差異明顯；各藥劑處理后真葉（長×寬）較CK2無明顯差異。

表5 不同藥劑各處理對(duì)甜瓜幼苗生長的影響

3 討論與結(jié)論

平板抑菌試驗(yàn)的結(jié)果表明，BX6、硝鉀銅、九醋酮3種新型殺菌劑和常用藥劑過氧乙酸、30%雙氧水對(duì)甜瓜果斑病病原菌均有較好的抑制作用（抑菌圈＞10 mm）。張靜[17]的研究發(fā)現(xiàn)，過氧乙酸處理瓜類細(xì)菌性果斑病種子有較好的防治作用；賈云鶴等[18]研究表明雙氧水對(duì)果斑病病原菌有較好的抑制作用；在本試驗(yàn)中，30%琥膠肥酸銅的抑菌作用不明顯，與張路生等[19]研究認(rèn)為30%琥膠肥酸銅抑制效果較差，不適于防治瓜類果斑病的試驗(yàn)結(jié)論一致；張國裕等[20]用鏈霉素等藥劑處理西葫蘆帶菌種子，結(jié)果顯示鏈霉素的抑菌效果并不明顯，與本研究結(jié)果一致。

從試驗(yàn)的防治效果、種子出苗率及對(duì)幼苗生長綜合來看，表現(xiàn)最好的藥劑處理是BX6（原液）20～30 min，其次是過氧乙酸（1∶50倍液）處理20～30 min，30%雙氧水（1∶50倍液）處理30 min。藥劑BX6防治效果明顯，且對(duì)幼苗生長有一定的促進(jìn)作用，在生產(chǎn)中可考慮作為防治細(xì)菌性果斑病的種子包衣劑。理想的種子處理劑，不但防病效果顯著，且不影響幼苗的生長，通常根據(jù)出苗率、株高、莖粗等生長指標(biāo)來說明種子活力的高低[21]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著藥劑濃度及時(shí)間的增加，發(fā)病率和病情指數(shù)在降低，但幼苗的生長卻受到抑制，因此藥劑的使用濃度及處理時(shí)間需控制在一定范圍內(nèi)，否則會(huì)影響種子出苗，還可能會(huì)降低防治效果[6]。前人研究發(fā)現(xiàn)，在相同的育苗環(huán)境中，種子內(nèi)部的細(xì)菌性果斑病菌含量越多，發(fā)病率和病情指數(shù)越高，所以它們可作為評(píng)價(jià)藥劑防治效果的依據(jù)[22]。

目前西北地區(qū)西瓜甜瓜制種生產(chǎn)中用于防治種子攜帶細(xì)菌性果斑病的主要藥劑為蘇納米，本次試驗(yàn)結(jié)果表明，其藥劑防治效果并不理想，這與孔祥義[9]等的試驗(yàn)結(jié)果基本一致，本試驗(yàn)中雙氧水、九醋酮、BX6在防病效果上均優(yōu)于蘇納米。本試驗(yàn)中供試藥劑的防病效果均未達(dá)到100%，可能與細(xì)菌性果斑病菌的侵染特點(diǎn)和藥效作用時(shí)間有關(guān)。在人工接菌時(shí)可能會(huì)使一部分病菌進(jìn)入種子內(nèi)部，藥劑處理種子只能殺死種皮上的病菌，不能完全殺死種子內(nèi)部的病菌，若藥效持續(xù)作用時(shí)間短，部分內(nèi)部攜帶病菌的種子出苗后會(huì)引發(fā)病害，導(dǎo)致后期發(fā)病情況加重。因此采用單一的種子藥劑處理無法達(dá)到徹底滅菌的效果，對(duì)果斑病的防治還有一定的局限性，進(jìn)一步研究開發(fā)新型的復(fù)合型的種子處理劑對(duì)防治細(xì)菌性果斑病具有重要意義。

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Control efficacy of seedling disease of different medicament treatments on melon seed infected with bacterial fruit blotch

WAN Xiuqin1，WANG Huilin1,2，SONG Yangfan1，ZHANG Changtong1，YANG Hang1，QIU Huojian2
(1.College of Forestry and Horticulture，Xinjiang Agriculture University，Urumqi 830052，Xinjiang，China;2.National Engineering Technological Research Center for Cucurbits，Changji 831100，Xinjiang，China)

Bacterial fruit blotch(BFB)of cucurbits is serious seed-borne diseases，seed treatment is an effective measure to avoid the occurrence of seed and seedling diseases prevention and control.The effective chemical for preventing and controlling bacterial fruit blotch were tested.Nine kinds of new bactericides(BX6,“JiuCuTong”etc)，and 8 kinds of commonly used bactericides(3%Tethiamethoxam，hydrogen peroxide,etc)were tested.The bacteriostatic effect of these chemicals were compared by used with tablet bacteriostatic circle method.The effects on the incidence and growth of seedlings of melon inoculated seeds treated with 5 chemicals were observed and compared.In the tablet bacteriostatic experiment，peracetic acid(1∶50)is the best of bacteriostatic effect，the rest in turn is 30%hydrogen peroxide(1∶50),BX6(stock solution)，“XIAOJIATONG”(1∶50),“JiuCuTong”(stock)，Tsunami（1∶50）.on the whole，the test results of 5 chemicals treatment in the control effect，seed germination rate and seedling growth，it showed that chemical BX6(stock solution) treated for 20-30 min was the best in the control effect，reached 72.2%-78.8%，followed by peracetic acid(1∶50)treatment for 20-30 min，with 71.5%-72.2%efficacy,hydrogen peroxide(1∶50)treatment for 30min，the with 71.5%efficacy.The results showed that the BX6,peracetic acid,hydrogen peroxide 3 kinds of bactericides had better effect of preventing disease,and could be considered as the seed treatment agent to control the bacterial fruit blotch.

Cucurbits;Bacterial fruit blotch;Bactericide;Bacteriostatic ring;Control effect

2016-12-16；

：2017-02-28

蔬菜商業(yè)化育種技術(shù)研究與示范子課題西瓜甜瓜健康種子生產(chǎn)關(guān)鍵技術(shù)集成與示范（2014BAD01B0805）

萬秀琴，女，在讀碩士研究生，研究方向?yàn)槲鞴咸鸸线z傳育種。E-mail：1003597195@qq.com

王惠林，男，副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)槲鞴咸鸸峡共∮N。E-mail：wanghuilin@126.com