不同濃度枯草芽孢桿菌對(duì)蛋雞血液生化指標(biāo)的影響

查翹楚，張力凡，韓超，葉密，陳輝，黃仁錄*，張建設(shè)，何曉中，李麗華

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河北保定071000；2.石家莊藁城區(qū)畜牧水產(chǎn)局，河北石家莊052160）

不同濃度枯草芽孢桿菌對(duì)蛋雞血液生化指標(biāo)的影響

查翹楚1，張力凡1，韓超1，葉密1，陳輝1，黃仁錄1*，張建設(shè)2，何曉中2，李麗華2

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河北保定071000；2.石家莊藁城區(qū)畜牧水產(chǎn)局，河北石家莊052160）

為研究不同濃度的枯草芽孢桿菌對(duì)蛋雞血液指標(biāo)的影響，試驗(yàn)選用體重相近的19周齡健康“大午金鳳”蛋雞240只，隨機(jī)分成4組，試驗(yàn)Ⅰ組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧；試驗(yàn)Ⅱ組飼喂基礎(chǔ)日糧+0.1%的枯草芽孢桿菌；試驗(yàn)Ⅲ組飼喂基礎(chǔ)日糧+0.5%枯草芽孢桿菌；第Ⅳ組飼喂基礎(chǔ)日糧+1%的枯草芽孢桿菌。預(yù)飼期7 d，試驗(yàn)期28 d。結(jié)果表明：試驗(yàn)中期和末期，甘油三酯各組之間差異不明顯（P＞0.05）；總蛋白第Ⅲ組顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；試驗(yàn)中期，尿素氮和尿酸第Ⅲ組均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；血氨第Ⅱ、Ⅲ組極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01），第Ⅳ組顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；IgA試驗(yàn)組極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）；IgM、IgG試驗(yàn)Ⅲ、Ⅳ組極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。試驗(yàn)?zāi)┢谀蛩氐冖蠼M均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；尿酸各組之間差異不顯著（P＞0.05）；血氨第Ⅲ組極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01），第Ⅳ組顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；IgA、IgM試驗(yàn)Ⅲ、Ⅳ組極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。IgG試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。由此表明，添加0.5%的枯草芽孢桿菌對(duì)血清指標(biāo)的影響比較顯著。

枯草芽孢桿菌；血液生化指標(biāo)；蛋雞

益生菌是指通過(guò)改善宿主腸道內(nèi)的微生態(tài)平衡，促進(jìn)宿主體內(nèi)有益菌的優(yōu)勢(shì)菌群建立，來(lái)達(dá)到促進(jìn)動(dòng)物健康，提高動(dòng)物免疫力的一系列細(xì)菌的統(tǒng)稱。益生菌能夠刺激動(dòng)物產(chǎn)生干擾素，提高腸道免疫球蛋白濃度，從而減輕腸道炎性反應(yīng)，改善腸黏膜功能，穩(wěn)定腸道，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)機(jī)能（Erika等，2001）。枯草芽孢桿菌作為益生菌的一種，在一定程度上能夠刺激免疫器官重量的增加，提高動(dòng)物機(jī)體內(nèi)抗體和免疫球蛋白水平，從而加強(qiáng)細(xì)胞和體液免疫機(jī)能；同時(shí)自身可以合成一部分酶類，如蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶等，彌補(bǔ)動(dòng)物內(nèi)源性消化酶分泌的不足，促進(jìn)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收（張揚(yáng)等，2003）。本試驗(yàn)以19周齡“大午金鳳”蛋雞為研究對(duì)象，旨在研究不同濃度的枯草芽孢桿菌對(duì)蛋雞血液生化指標(biāo)影響，為枯草芽孢桿菌作為飼料添加劑在蛋雞中的應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料枯草芽孢桿菌：來(lái)自河北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科技學(xué)院，枯草芽孢桿菌含量約為1.0× 107cfu/g。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物健康、體重相近的19周齡“大午金鳳”蛋雞。

1.3 試驗(yàn)日糧日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（表1）參照NRC（1994）蛋雞營(yíng)養(yǎng)需要。

表1 日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.4 試驗(yàn)分組與設(shè)計(jì)采取單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將240只健康、體重相近的19周齡“大午金鳳”蛋雞隨機(jī)分成4個(gè)組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15只雞，試驗(yàn)Ⅰ組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧；試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組為試驗(yàn)組，試驗(yàn)Ⅱ組飼喂基礎(chǔ)日糧和0.1%的枯草芽孢桿菌；試驗(yàn)Ⅲ組飼喂基礎(chǔ)日糧和0.5%的枯草芽孢桿菌；試驗(yàn)Ⅳ組飼喂基礎(chǔ)日糧和1%的枯草芽孢桿菌。預(yù)飼期為1周，試驗(yàn)期為4周。

1.5 飼養(yǎng)管理本試驗(yàn)在環(huán)境控制艙中進(jìn)行，兩層立體籠養(yǎng)，自由采食、自由飲水，溫度設(shè)定為20℃，濕度設(shè)定為60%，光照設(shè)定為16L∶8D。按照常規(guī)的防疫程序進(jìn)行清掃和消毒，定期接種疫苗，試驗(yàn)期間時(shí)時(shí)觀察雞群的健康狀況。

1.6 樣品的采集在試驗(yàn)期的第2周和第4周，以重復(fù)為單位，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取2只雞，翅下靜脈采血，用促凝管收集5 mL，在4～5℃下以3000 r/min離心10 min，吸取上清液，置于血清管內(nèi)，-20℃冷凍保存待測(cè)血清生化指標(biāo)。血液生化指標(biāo)主要包括甘油三酯（TG）、總膽固醇（TCHO）、總蛋白（TP）、尿酸（UA）、尿素氮（BUN）、血氨（BA）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）。

1.7 測(cè)定方法甘油三酯（TG）：采用試劑盒GPO-PAP酶法，單位g/L；總膽固醇（T-CHO）：采用試劑盒COD-PAP法測(cè)定，單位g/L；總蛋白（TP）：采用試劑盒法雙縮脲法（Biuret法）測(cè)定，單位g/L；尿酸（UA）：采用試劑盒酶比色法測(cè)定，單位μmol/L；尿素氮（BUN）：采用試劑盒OPA法測(cè)定，單位μmol/L；血氨（BA）：采用無(wú)蛋白濾液法測(cè)定，單位μmol/L。試劑盒購(gòu)自南京建成生物試劑有限公司，分析儀器采用Microlab 300半自動(dòng)生化分析儀。IgA、IgM、IgG：采用酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒檢測(cè)，試劑盒購(gòu)自南京建成生物試劑有限公司，分析儀器采用酶標(biāo)儀。

1.8 數(shù)據(jù)整理與分析首先利用Microsoft office excel 2007軟件進(jìn)行初步的數(shù)據(jù)整理，然后采用IBM SPSS Statistics 21.0軟件對(duì)各個(gè)因素進(jìn)行單因素方差分析，再用LSD進(jìn)行多重的比較分析。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”來(lái)表示，以P＜0.05來(lái)表示差異顯著，以P＜0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

由表2可知，試驗(yàn)第2周時(shí)，甘油三酯各組之間差異不明顯（P＞0.05），但試驗(yàn)組均低于對(duì)照組；第Ⅲ組總膽固醇較對(duì)照組降低34.86%（P＜0.05）；第Ⅲ組總蛋白較對(duì)照組提高42.06%（P＜0.05）；試驗(yàn)第4周時(shí)，甘油三酯和膽固醇各組之間差異不明顯（P＞0.05），但試驗(yàn)組均低于對(duì)照組；第Ⅲ組總蛋白較對(duì)照組提高19.05%（P＜0.05）。

表2 枯草芽孢桿菌制劑對(duì)蛋雞甘油三酯、總膽固醇、總蛋白的影響g/L

由表3可知，試驗(yàn)第2周時(shí)，第Ⅲ組尿素氮和尿酸較對(duì)照組分別降低35.53%和24.91%（P＜0.05），第Ⅱ、Ⅳ組相對(duì)于對(duì)照組有降低趨勢(shì)；第Ⅱ、Ⅲ組血氨較對(duì)照組分別降低43.11%，52.64%（P＜0.01），第Ⅳ組較對(duì)照組降低30.12%（P＜0.05），試驗(yàn)第4周時(shí)，第Ⅲ組尿素氮較對(duì)照組降低47.42%（P＜0.05），第Ⅱ、Ⅳ組相對(duì)于對(duì)照組有降低趨勢(shì)；尿酸各組之間差異不顯著（P＞0.05）；第Ⅲ組血氨較對(duì)照組降低35.81%（P＜0.01），第Ⅳ組較對(duì)照組降低25.82%（P＜0.05）。

表3 枯草芽孢桿菌制劑對(duì)蛋雞尿素氮、尿酸、血氨指標(biāo)的影響μmol/L

由表4可知，試驗(yàn)第2周時(shí)，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組IgA分別較對(duì)照組提高58.45%、55.98%、41.93%（P＜0.01）；試驗(yàn)Ⅲ、Ⅳ組IgM分別較對(duì)照組提高22.14%，13.89%（P＜0.01）；試驗(yàn)Ⅲ、Ⅳ組IgG分別較對(duì)照組提高57.89%、40.26%（P＜0.01）；試驗(yàn)第4周時(shí)，試驗(yàn)Ⅲ、Ⅳ組IgA分別較對(duì)照組提高65.19%、28.03%（P＜0.01）；試驗(yàn)Ⅲ、Ⅳ組IgM分別較對(duì)照組提高34.72%、16.61%（P＜0.05）試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組IgG分別較對(duì)照組提高69.37%，67.29%、51.91%（P＜0.01）。

3 分析與討論

3.1 不同濃度枯草芽孢桿菌對(duì)血清中甘油三酯、膽固醇、總蛋白的影響血清蛋白指標(biāo)是機(jī)體蛋白質(zhì)合成代謝的一個(gè)重要標(biāo)志，其中血清總蛋白濃度高是蛋白質(zhì)代謝旺盛的表現(xiàn)，有利于促進(jìn)生長(zhǎng)和提高飼料轉(zhuǎn)化率。楚青惠（2014）在保育仔豬日糧中添加乳酸菌研究結(jié)果表明，血清總蛋白和甘油三酯與對(duì)照組相比均無(wú)顯著差異。吳俊峰等（2012）研究表明，在蛋雞飼料中添加枯草芽孢桿菌使血清中總蛋白含量呈增加趨勢(shì)。本試驗(yàn)研究表明，試驗(yàn)中期和末期，試驗(yàn)組中總蛋白質(zhì)含量均高于對(duì)照組，與前人的研究結(jié)果相一致，說(shuō)明添加枯草芽孢桿菌能夠增強(qiáng)蛋白質(zhì)的代謝水平。血清總膽固醇含量受參與膽固醇合成的關(guān)鍵酶-羥甲基戊二酸單酰輔酶A活性的影響，F(xiàn)ukushima（1995）報(bào)道，益生菌可以抑制膽固醇合成過(guò)程中的關(guān)鍵酶。李福彬（2010）研究結(jié)果表明，飼料中添加地衣芽孢桿菌能夠降低血清膽固醇含量，這與本試驗(yàn)研究結(jié)果相一致。由此可以表明枯草芽孢桿菌也可能通過(guò)抑制羥甲基戊二酸單酰輔酶A活性來(lái)降低血清膽固醇。

表4 枯草芽孢桿菌制劑對(duì)蛋雞IgA、IgM、IgG的影響μmol/L

3.2 不同濃度枯草芽孢桿菌對(duì)血清中含氮物濃度的影響蛋白質(zhì)進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)在多種酶的作用下生成氨基酸，氨基酸再經(jīng)分解代謝最終生成氨和其他物質(zhì)。氨是動(dòng)物體內(nèi)的有毒物質(zhì)，體內(nèi)的氨大部分通過(guò)合成尿素排出體外，一部分合成其他含氮物質(zhì)（包括非必需氨基酸、谷氨酰胺等），少量的氨可直接經(jīng)尿排出，禽類則主要是生成尿酸。尿酸是禽類蛋白質(zhì)分解代謝的主要終產(chǎn)物，尿酸反映了機(jī)體蛋白質(zhì)代謝的差異，蛋白質(zhì)分解代謝減弱時(shí)尿酸含量下降。本試驗(yàn)研究表明，試驗(yàn)中期0.1%、0.5%、1%添加組尿素氮分別降低0.2、1.35、0.52 mmol/L；尿酸分別降低9.56、19.59、15.92μmol/L，血氨分別降低54.28、66.27、37.92μmol/L；試驗(yàn)?zāi)┢?.1%、0.5%、1%添加組尿素氮分別降低1.73、2.48、2.25 mmol/L；血氨分別降低32.73、50.69、36.55μmol/L；步長(zhǎng)英（2008）研究結(jié)果表明，飼糧中添加不同濃度的芽孢桿菌使血清中尿酸含量顯著提高。楊海英等（2007）試驗(yàn)證明，益生素可使仔豬血清尿素氮含量降低，促進(jìn)蛋白質(zhì)沉積；與本試驗(yàn)研究結(jié)果一致，說(shuō)明蛋雞體內(nèi)內(nèi)源蛋白分解減弱，日糧氮素利用率得到有效提高。

3.3 不同濃度枯草芽孢桿菌對(duì)IgA、IgM、IgG的影響枯草芽孢桿菌能夠刺激畜禽免疫器官的發(fā)育，刺激T、B淋巴細(xì)胞，提高免疫球蛋白和抗體水平，增強(qiáng)畜禽的細(xì)胞免疫和體液免疫功能，提高畜禽機(jī)體健康水平（王宗偉等，2015）。馮敏山等（2009）在產(chǎn)蛋雞飼糧中添加微生態(tài)制劑后，發(fā)現(xiàn)血清中IgA、IgM、IgG含量均有所提高，祝天龍等（2015）在仔豬飼料中添加枯草芽孢桿菌制劑后發(fā)現(xiàn)，各試驗(yàn)組IgA、IgM、IgG相對(duì)于對(duì)照組，均有不同程度的提高?？莶菅挎邨U菌可顯著提高IgA、IgG含量，對(duì)IgM有提高的趨勢(shì)。本試驗(yàn)研究表明，蛋雞飼糧中添加0.1%、0.5%、1%枯草芽孢桿菌能夠使IgA、IgM、IgG含量增加，由此表明枯草芽孢桿菌能夠提供蛋雞免疫力。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，蛋雞飼糧中添加0.5%的枯草芽孢桿菌能夠使總蛋白含量增加；膽固醇、尿素氮、尿酸、血氨含量降低；免疫球蛋白含量升高，從而改善了蛋雞的免疫水平。

[1]步長(zhǎng)英.絲蘭皂甙_芽孢桿菌對(duì)肉雞生產(chǎn)性能_氮代謝和排泄物氨氣散發(fā)量的影響：[碩士學(xué)位論文][D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

[2]程發(fā)祥，賈帥兵，張浩，等.暖季放牧條件下羔羊15種血清生化指標(biāo)與體重變化關(guān)系的研究[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2009，36（7）：56～59.

[3]楚青惠.不同劑量乳酸菌對(duì)母豬和仔豬生產(chǎn)性能、血清生化指標(biāo)以及糞便微生物的影響：[碩士論文][D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2014.

[4]李福彬.地衣芽孢桿菌的理化特性及對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能影響機(jī)理的研究：[碩士學(xué)位論文][D].保定：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

[5]王宗偉，李法增，楊志平，等.枯草芽孢桿菌在畜禽營(yíng)養(yǎng)上的研究進(jìn)展[J].中國(guó)畜牧雜志，2015，51（1）：80～83.

[6]吳俊鋒，詹凱，曹君平，等.枯草芽孢桿菌及其發(fā)酵豆粕對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)及血清生化指標(biāo)的影響[J].中國(guó)家禽，2012，34（1）：22～26.

[7]楊海英.益生素和低聚木糖對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能及促生長(zhǎng)機(jī)理的研究：[碩士學(xué)位論文][D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

[8]張揚(yáng)，袁杰利.腸道益生菌對(duì)機(jī)體免疫功能的影響[J].中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志，2003，15（4）：246～248.

[9]祝天龍，李奎，邵強(qiáng)，等.枯草芽孢桿菌制劑對(duì)仔豬生長(zhǎng)及免疫的影響[J].飼料研究，2015，3：26～31.

[10]Erika Isolauri，Yelda Sütas，Pasi Kankaanp覿覿，et al.Probiotics：effectson immunity[J].American Society for Clinical Nutrition，2001，73（2）：444～450.

[11]Fukushima M，Nakano M.The effect of a probiotic on faecal and liver lipid classes in rats[J].British Journalof Nutrition，1995，73：701～710.

In order to study the effects of different concentrations of Bacillus subtilis on blood biochemical index of laying hens，a total of two hundred and fouty healthy laying hens of Dawu Jinfeng with similar weight were selected and random ly divided into four groups with four replicates per group and fifteen hens per replicate.Layering hens in control group were fed basic diet.The other three trail groupswere fed diet supplemented with 0.1%，0.5%，1%of Bacillus subtilis respectively for a fourweeks.The results showed that in themiddle and the end of the test，triglycerides of each testgroups showed no significant differences；The total protein of groupⅢwas significantly higher than the control group（P＜0.05）；In themiddle of the test，urea nitrogen and uric acid of groupⅢwere significantly lower than control group（P＜0.05）；Blood ammonia of groupⅡand groupⅢwas very significantly lower than control group（P＜0.01），the groupⅣwas significantly lower than the control group（P＜0.05）；IgA of treatment groupswas significantly higher than the control group（P＜0.01）；IgM and IgG of groupⅢand groupⅣwere significantly higher than the control group（P＜0.01）；In the end of the test，urea nitrogen of groupⅢwas significantly lower than control group（P＜0.05）；uric acid of each test groups showed no significant differences（P＞0.05）；Blood ammonia of groupⅢwas very significantly lower than control group（P＜0.01），the groupⅣwas significantly lower than the control group（P＜0.05）；IgA，IgM of groupⅢ，Ⅳwere very significantly higher than the control group（P＜0.01）.IgG of treatment group was significantly higher than the control group（P＜0.01）.It’s concluded that the optimal supplementation of Bacillus subtilis was 0.05%.

Bacillus subtilis；blood biochemical index；laying hens

S816.7

A

1004-3314（2017）06-0015-04

DO I：10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20170604

國(guó)家蛋雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)獎(jiǎng)金（CARS-41-K18）

*通訊作者