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    巴氏消毒牛奶與羊奶粉中主要蛋白質(zhì)組成的 SDS-PAGE比較

    2017-06-07 08:21:22韓榮勛羅靜波俞海東
    關(guān)鍵詞:羊奶粉羊奶巴氏

    韓榮勛,羅靜波,俞海東

    (長(zhǎng)江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,湖北 荊州434025)

    巴氏消毒牛奶與羊奶粉中主要蛋白質(zhì)組成的 SDS-PAGE比較

    韓榮勛,羅靜波,俞海東

    (長(zhǎng)江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,湖北 荊州434025)

    采用SDS-PAGE凝膠電泳方法對(duì)相同蛋白質(zhì)質(zhì)量和相同樣品體積的巴氏消毒牛奶和羊奶粉的蛋白質(zhì)組成進(jìn)行分析,分離后的凝膠經(jīng)考馬斯亮藍(lán)染色得到巴氏消毒牛奶和羊奶的電泳圖譜,比較了巴氏消毒牛奶和羊奶中蛋白質(zhì)組成的差異。結(jié)果表明,在同等條件下,牛奶中的αs-酪蛋白和β-酪蛋白以及κ-酪蛋白含量均高于羊奶粉。

    SDS-PAGE;巴氏消毒牛奶;羊奶粉;蛋白質(zhì)

    近幾年乳制品已經(jīng)成為人們普遍使用的營(yíng)養(yǎng)品,特別是作為幼兒的輔食被廣泛使用。而巴氏消毒牛奶即鮮奶和羊奶粉以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)受到廣大消費(fèi)者的喜愛。目前人們可利用的奶類有牛奶、山羊奶、綿羊奶、水牛奶、馬奶等十多種,其中牛奶是人們利用最多的動(dòng)物乳,占乳制品消費(fèi)量的95%[1]。羊奶的產(chǎn)量雖然遠(yuǎn)低于牛奶,但是近年來(lái)隨著人們營(yíng)養(yǎng)意識(shí)的提高,山羊奶的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值也受到人們普遍重視,使用山羊奶的人群呈明顯的增長(zhǎng)趨勢(shì),而且奶山羊養(yǎng)殖是發(fā)展中國(guó)家尋求乳品來(lái)源的有效途徑[2]。我國(guó)奶山羊近年來(lái)發(fā)展迅速,形成了較大規(guī)模,山羊奶產(chǎn)量已達(dá)鮮奶總產(chǎn)量的15%左右。奶粉制品中,山羊奶粉的比例連年保持在20%以上[3]。山羊奶和牛奶均含有豐富的小分子活性蛋白質(zhì),包括乳鐵蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、免疫球蛋白等,這些活性蛋白對(duì)于維持新生兒的免疫功能及生長(zhǎng)發(fā)育至關(guān)重要,在西方已將山羊奶列為療效食品[4]。蛋白質(zhì)是乳中的主要含氮物質(zhì),含量在2.8%~3.8%。乳蛋白包括酪蛋白、乳清蛋白及少量脂肪球膜蛋白。乳清蛋白中有對(duì)熱不穩(wěn)定的乳白蛋白和乳球蛋白[5]。真蛋白由于其可較好地反映乳品的真實(shí)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,因而真蛋白是乳品質(zhì)量?jī)?yōu)劣的重要標(biāo)志之一[6~8]。

    目前有關(guān)乳制品的研究多集中于牛奶中進(jìn)行摻假分辨[9~10]、牛奶中蛋白致敏作用[11]以及三聚氰胺檢測(cè)等方面,很少有對(duì)牛奶和羊奶的蛋白質(zhì)組成的研究[12]。對(duì)牛乳蛋白質(zhì)的研究國(guó)內(nèi)外已有很多報(bào)道,但對(duì)山羊乳蛋白質(zhì)的研究報(bào)道較少,并且主要是從理化性質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)成分等方面進(jìn)行研究,缺乏對(duì)牛羊乳蛋白質(zhì)組成的比較研究。為此,本研究分析了牛奶與羊奶粉的蛋白質(zhì)組成成分的差異,以為牛奶、牛奶粉與羊奶粉的分辨提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù),同時(shí)為消費(fèi)者選擇更易于消化吸收的乳制品提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 樣品的收集與準(zhǔn)備

    實(shí)驗(yàn)樣品為從市場(chǎng)購(gòu)買的巴氏消毒牛奶和羊奶粉,羊奶粉在實(shí)驗(yàn)前按使用說明進(jìn)行溶解(1g溶于6mL蒸餾水)。得到的樣品在4℃、3000r/min條件下離心20min去除乳脂和不容物獲得脫脂乳,100μL脫脂乳樣品分別與等體積的裂解緩沖液(0.3%SDS、3%DTT、蛋白酶抑制劑和0.5mol/L Tris/HCl,pH8.0)充分混合后在低溫條件下對(duì)樣品進(jìn)行超聲波粉碎處理。超聲波粉碎處理后在室溫條件反應(yīng)1h后在4℃、12000r/min條件下離心20min去除沉淀物。離心后取上清液,以1mg/mL牛血清白蛋白溶液作為標(biāo)準(zhǔn)溶液,采用雙縮脲法測(cè)定蛋白濃度后分裝成每管60μg樣品并保存于-70℃冰箱中。

    1.2 SDS-PAGE

    SDS-PAGE采用8%和15%分離膠[1.5mol/L Tris(pH8.8)、40% Acry/Bis(29︰1)、蒸餾水、10% SDS、10% APS、TEMED],采用同等蛋白質(zhì)含量與同等樣品體積的上樣方法,上樣順序?yàn)镸arker、60μg牛奶、60μg羊奶粉、24μL牛奶、24μL羊奶粉。在100V電壓條件下進(jìn)行分離,實(shí)驗(yàn)所用Marker電泳后出現(xiàn)7條條帶,分子質(zhì)量分別為200、150、100、80、60、40ku。電泳結(jié)束后取出凝膠,經(jīng)超純水漂洗后將凝膠放入固定液[30%(v/v)甲醇、10%(v/v)醋酸]中固定1h后取出凝膠,放入考馬斯亮藍(lán)R-250染色液中染色24h。染色結(jié)束后用脫色液(1%醋酸)脫色后進(jìn)行圖像采集。

    2 結(jié)果與分析

    M:標(biāo)準(zhǔn)蛋白;1:30μg牛奶;2:30μg羊奶粉;3:24μL牛奶、4:24μL羊奶粉圖1 8%分離膠分離所得羊奶粉及牛奶蛋白質(zhì)的SDS-PAGE電泳圖譜

    M:標(biāo)準(zhǔn)蛋白;1:30μg牛奶;2:30μg羊奶粉;3:24μL牛奶;4:24μL羊奶粉圖2 15%的離膠分離所得牛奶及羊奶粉蛋白質(zhì)的SDS-PAGE電泳圖譜

    為觀察具體蛋白質(zhì)組成差異,本研究采用同等蛋白質(zhì)含量(60μg)與同等樣品體積(24μL)的上樣方法,并且2組樣品在同一塊分離膠上進(jìn)行電泳。8%和15%的分離膠上進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳所得的電泳圖譜分別見圖1和圖2。

    從圖1可以看出:牛奶樣品在150~80ku附近有乳鐵蛋白、血清白蛋白及免疫球蛋白等3條條帶,而羊奶粉則在血清白蛋白附近只有1條條帶。2個(gè)樣品的蛋白質(zhì)大都集中在40ku以下部分。從圖2可以清楚地觀察到40ku以下部分分離成αs-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、β-乳球蛋白和α-乳球蛋白等6條條帶。從整體上看,牛奶和羊奶粉在αs-酪蛋白和β-酪蛋白表達(dá)上存在明顯差異,在同質(zhì)量的條件下,羊奶粉的κ-酪蛋白和β-酪蛋白表達(dá)量與牛奶相似,但是羊奶粉中αs-酪蛋白明顯少于牛奶。在同體積的條件下,羊奶粉中的κ-酪蛋白、β-酪蛋白和αs-酪蛋白表達(dá)量均低于牛奶。在同等蛋白質(zhì)質(zhì)量與同等樣品體積條件下,在高相對(duì)分子質(zhì)量部分出現(xiàn)的3條蛋白質(zhì)條帶在同等蛋白質(zhì)質(zhì)量條件下牛奶中的表達(dá)量高于羊奶粉,而在同體積條件下牛奶和羊奶粉中的表達(dá)量基本相似。

    3 討論與結(jié)論

    為了尋找2種乳制品的蛋白組成差異,本研究采用SDS-PAGE方法比較分析了羊奶粉和牛奶的主要蛋白質(zhì)組成,結(jié)果表明,在凝膠圖譜中兩者蛋白質(zhì)表達(dá)表現(xiàn)出顯著差異。在15%的凝膠所得的電泳圖譜中可以觀察到羊奶粉的主條帶均分布在中部,而且比較清晰,這與張歌等[13]的研究結(jié)果相似。因?yàn)楸狙芯克捎玫臉悠肥敲撝D膛c脫脂羊奶粉,與張歌等所用樣品相同,分析方法也均采用SDS-PAGE,因此結(jié)果比較相似。在本研究結(jié)果中只能看到乳中大量存在的免球蛋白、酪蛋白類和血清白蛋白,這可能是因?yàn)槔业鞍渍寂D痰鞍踪|(zhì)的大部分,在本研究沒有去除酪蛋白,這就造成樣品中酪蛋白占據(jù)大多數(shù)從而無(wú)法觀測(cè)到乳清中的低豐度蛋白質(zhì)的條帶。

    李武祎等[14]通過酸凝性實(shí)驗(yàn)觀察到在37℃、pH4.0條件下,α-酪蛋白組分形成了顆粒較大的凝塊,而β-酪蛋白組分形成的是松軟的絮凝物。體外消化實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦顯示β-酪蛋白組分的消化性要明顯好于α-酪蛋白組分和牛乳酸沉酪蛋白[14]。而郭本恒[15]和Li-Chan E等[16]的研究結(jié)果也表明牛乳中αs-酪蛋白的大量存在造成酪蛋白膠束粒子顆粒大,在胃中形成堅(jiān)硬的凝塊而難以消化。從本研究所得到的等體積和等蛋白質(zhì)質(zhì)量的牛奶和羊奶粉的蛋白質(zhì)凝膠圖譜中,可以清晰地看到酪蛋白類在牛奶中高于羊奶粉,而羊奶粉中的αs-酪蛋白和κ-酪蛋白表達(dá)顯著低于牛奶中的表達(dá)。由此可以看出,羊奶粉中因αs-酪蛋白的低含量更易于嬰幼兒的消化吸收。

    本研究結(jié)果表明,牛奶和羊奶粉中酪蛋白的種類及其組成間的比例存在明顯的差異,通過圖譜的觀察可以清晰地分辨出羊奶粉和牛奶。通過此法建立健全乳制品的圖譜對(duì)于檢測(cè)乳制品摻假和以次充好也能起到一定的作用,同時(shí)能為人們選擇更容易消化吸收的乳制品提供線索。

    [1]Park Y W,Haenlein G F W.Handbook of milk of non-bovine mammals [M].Oxford:Blackwell Publishing,2006:24~26.

    [2]FAO.FAO Yearbook,Production 1997,v.51 [Z].FAO Statistics Series,1998.

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    [6]唐佳妮,呂元.國(guó)內(nèi)外乳品真蛋白檢測(cè)方法的進(jìn)展 [J].食品與發(fā)酵工業(yè),2009,35(4):119~123.

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    [13]張歌.牛乳和羊乳蛋白質(zhì)差異比較及檢測(cè)方法的研究[D].西安:陜西科技大學(xué),2013.

    [14]李武祎,郭順堂,俞樹孝,等.酪蛋白組分分離技術(shù)及消化性測(cè)定[J].食品科學(xué),2005,26(7):70~73.

    [15]郭本恒.乳品化學(xué)[M].北京:中國(guó)輕工業(yè)出版社,2001.

    [16]Li-Chan E,Nakai S.Rennin Modification of Bovine Casein to Simulate Human Casein Composition: Effect on Acid Clotting and Hydrolysis by Pepsin[J].Canadian Institute of Food Science & Technology Journal,1988,21:200~208.

    [編輯] 余文斌

    2017-03-28

    長(zhǎng)江大學(xué)博士啟動(dòng)基金項(xiàng)目(120/801200010129)。

    韓榮勛(1979-),男(朝鮮族),講師,博士,主要從事蛋白質(zhì)組學(xué)及家畜繁殖學(xué)研究,hanrongxun@126.com。

    TS201.2+1

    A

    1673-1409(2017)10-0061-03

    [引著格式]韓榮勛,羅靜波,俞海東.巴氏消毒牛奶與羊奶粉中主要蛋白質(zhì)組成的SDS-PAGE比較[J].長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版),2017,14(10):61~63.

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