• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    巴氏消毒牛奶與羊奶粉中主要蛋白質(zhì)組成的 SDS-PAGE比較

    2017-06-07 08:21:22韓榮勛羅靜波俞海東
    關(guān)鍵詞:羊奶粉羊奶巴氏

    韓榮勛,羅靜波,俞海東

    (長(zhǎng)江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,湖北 荊州434025)

    巴氏消毒牛奶與羊奶粉中主要蛋白質(zhì)組成的 SDS-PAGE比較

    韓榮勛,羅靜波,俞海東

    (長(zhǎng)江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,湖北 荊州434025)

    采用SDS-PAGE凝膠電泳方法對(duì)相同蛋白質(zhì)質(zhì)量和相同樣品體積的巴氏消毒牛奶和羊奶粉的蛋白質(zhì)組成進(jìn)行分析,分離后的凝膠經(jīng)考馬斯亮藍(lán)染色得到巴氏消毒牛奶和羊奶的電泳圖譜,比較了巴氏消毒牛奶和羊奶中蛋白質(zhì)組成的差異。結(jié)果表明,在同等條件下,牛奶中的αs-酪蛋白和β-酪蛋白以及κ-酪蛋白含量均高于羊奶粉。

    SDS-PAGE;巴氏消毒牛奶;羊奶粉;蛋白質(zhì)

    近幾年乳制品已經(jīng)成為人們普遍使用的營(yíng)養(yǎng)品,特別是作為幼兒的輔食被廣泛使用。而巴氏消毒牛奶即鮮奶和羊奶粉以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)受到廣大消費(fèi)者的喜愛。目前人們可利用的奶類有牛奶、山羊奶、綿羊奶、水牛奶、馬奶等十多種,其中牛奶是人們利用最多的動(dòng)物乳,占乳制品消費(fèi)量的95%[1]。羊奶的產(chǎn)量雖然遠(yuǎn)低于牛奶,但是近年來(lái)隨著人們營(yíng)養(yǎng)意識(shí)的提高,山羊奶的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值也受到人們普遍重視,使用山羊奶的人群呈明顯的增長(zhǎng)趨勢(shì),而且奶山羊養(yǎng)殖是發(fā)展中國(guó)家尋求乳品來(lái)源的有效途徑[2]。我國(guó)奶山羊近年來(lái)發(fā)展迅速,形成了較大規(guī)模,山羊奶產(chǎn)量已達(dá)鮮奶總產(chǎn)量的15%左右。奶粉制品中,山羊奶粉的比例連年保持在20%以上[3]。山羊奶和牛奶均含有豐富的小分子活性蛋白質(zhì),包括乳鐵蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、免疫球蛋白等,這些活性蛋白對(duì)于維持新生兒的免疫功能及生長(zhǎng)發(fā)育至關(guān)重要,在西方已將山羊奶列為療效食品[4]。蛋白質(zhì)是乳中的主要含氮物質(zhì),含量在2.8%~3.8%。乳蛋白包括酪蛋白、乳清蛋白及少量脂肪球膜蛋白。乳清蛋白中有對(duì)熱不穩(wěn)定的乳白蛋白和乳球蛋白[5]。真蛋白由于其可較好地反映乳品的真實(shí)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,因而真蛋白是乳品質(zhì)量?jī)?yōu)劣的重要標(biāo)志之一[6~8]。

    目前有關(guān)乳制品的研究多集中于牛奶中進(jìn)行摻假分辨[9~10]、牛奶中蛋白致敏作用[11]以及三聚氰胺檢測(cè)等方面,很少有對(duì)牛奶和羊奶的蛋白質(zhì)組成的研究[12]。對(duì)牛乳蛋白質(zhì)的研究國(guó)內(nèi)外已有很多報(bào)道,但對(duì)山羊乳蛋白質(zhì)的研究報(bào)道較少,并且主要是從理化性質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)成分等方面進(jìn)行研究,缺乏對(duì)牛羊乳蛋白質(zhì)組成的比較研究。為此,本研究分析了牛奶與羊奶粉的蛋白質(zhì)組成成分的差異,以為牛奶、牛奶粉與羊奶粉的分辨提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù),同時(shí)為消費(fèi)者選擇更易于消化吸收的乳制品提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 樣品的收集與準(zhǔn)備

    實(shí)驗(yàn)樣品為從市場(chǎng)購(gòu)買的巴氏消毒牛奶和羊奶粉,羊奶粉在實(shí)驗(yàn)前按使用說明進(jìn)行溶解(1g溶于6mL蒸餾水)。得到的樣品在4℃、3000r/min條件下離心20min去除乳脂和不容物獲得脫脂乳,100μL脫脂乳樣品分別與等體積的裂解緩沖液(0.3%SDS、3%DTT、蛋白酶抑制劑和0.5mol/L Tris/HCl,pH8.0)充分混合后在低溫條件下對(duì)樣品進(jìn)行超聲波粉碎處理。超聲波粉碎處理后在室溫條件反應(yīng)1h后在4℃、12000r/min條件下離心20min去除沉淀物。離心后取上清液,以1mg/mL牛血清白蛋白溶液作為標(biāo)準(zhǔn)溶液,采用雙縮脲法測(cè)定蛋白濃度后分裝成每管60μg樣品并保存于-70℃冰箱中。

    1.2 SDS-PAGE

    SDS-PAGE采用8%和15%分離膠[1.5mol/L Tris(pH8.8)、40% Acry/Bis(29︰1)、蒸餾水、10% SDS、10% APS、TEMED],采用同等蛋白質(zhì)含量與同等樣品體積的上樣方法,上樣順序?yàn)镸arker、60μg牛奶、60μg羊奶粉、24μL牛奶、24μL羊奶粉。在100V電壓條件下進(jìn)行分離,實(shí)驗(yàn)所用Marker電泳后出現(xiàn)7條條帶,分子質(zhì)量分別為200、150、100、80、60、40ku。電泳結(jié)束后取出凝膠,經(jīng)超純水漂洗后將凝膠放入固定液[30%(v/v)甲醇、10%(v/v)醋酸]中固定1h后取出凝膠,放入考馬斯亮藍(lán)R-250染色液中染色24h。染色結(jié)束后用脫色液(1%醋酸)脫色后進(jìn)行圖像采集。

    2 結(jié)果與分析

    M:標(biāo)準(zhǔn)蛋白;1:30μg牛奶;2:30μg羊奶粉;3:24μL牛奶、4:24μL羊奶粉圖1 8%分離膠分離所得羊奶粉及牛奶蛋白質(zhì)的SDS-PAGE電泳圖譜

    M:標(biāo)準(zhǔn)蛋白;1:30μg牛奶;2:30μg羊奶粉;3:24μL牛奶;4:24μL羊奶粉圖2 15%的離膠分離所得牛奶及羊奶粉蛋白質(zhì)的SDS-PAGE電泳圖譜

    為觀察具體蛋白質(zhì)組成差異,本研究采用同等蛋白質(zhì)含量(60μg)與同等樣品體積(24μL)的上樣方法,并且2組樣品在同一塊分離膠上進(jìn)行電泳。8%和15%的分離膠上進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳所得的電泳圖譜分別見圖1和圖2。

    從圖1可以看出:牛奶樣品在150~80ku附近有乳鐵蛋白、血清白蛋白及免疫球蛋白等3條條帶,而羊奶粉則在血清白蛋白附近只有1條條帶。2個(gè)樣品的蛋白質(zhì)大都集中在40ku以下部分。從圖2可以清楚地觀察到40ku以下部分分離成αs-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、β-乳球蛋白和α-乳球蛋白等6條條帶。從整體上看,牛奶和羊奶粉在αs-酪蛋白和β-酪蛋白表達(dá)上存在明顯差異,在同質(zhì)量的條件下,羊奶粉的κ-酪蛋白和β-酪蛋白表達(dá)量與牛奶相似,但是羊奶粉中αs-酪蛋白明顯少于牛奶。在同體積的條件下,羊奶粉中的κ-酪蛋白、β-酪蛋白和αs-酪蛋白表達(dá)量均低于牛奶。在同等蛋白質(zhì)質(zhì)量與同等樣品體積條件下,在高相對(duì)分子質(zhì)量部分出現(xiàn)的3條蛋白質(zhì)條帶在同等蛋白質(zhì)質(zhì)量條件下牛奶中的表達(dá)量高于羊奶粉,而在同體積條件下牛奶和羊奶粉中的表達(dá)量基本相似。

    3 討論與結(jié)論

    為了尋找2種乳制品的蛋白組成差異,本研究采用SDS-PAGE方法比較分析了羊奶粉和牛奶的主要蛋白質(zhì)組成,結(jié)果表明,在凝膠圖譜中兩者蛋白質(zhì)表達(dá)表現(xiàn)出顯著差異。在15%的凝膠所得的電泳圖譜中可以觀察到羊奶粉的主條帶均分布在中部,而且比較清晰,這與張歌等[13]的研究結(jié)果相似。因?yàn)楸狙芯克捎玫臉悠肥敲撝D膛c脫脂羊奶粉,與張歌等所用樣品相同,分析方法也均采用SDS-PAGE,因此結(jié)果比較相似。在本研究結(jié)果中只能看到乳中大量存在的免球蛋白、酪蛋白類和血清白蛋白,這可能是因?yàn)槔业鞍渍寂D痰鞍踪|(zhì)的大部分,在本研究沒有去除酪蛋白,這就造成樣品中酪蛋白占據(jù)大多數(shù)從而無(wú)法觀測(cè)到乳清中的低豐度蛋白質(zhì)的條帶。

    李武祎等[14]通過酸凝性實(shí)驗(yàn)觀察到在37℃、pH4.0條件下,α-酪蛋白組分形成了顆粒較大的凝塊,而β-酪蛋白組分形成的是松軟的絮凝物。體外消化實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦顯示β-酪蛋白組分的消化性要明顯好于α-酪蛋白組分和牛乳酸沉酪蛋白[14]。而郭本恒[15]和Li-Chan E等[16]的研究結(jié)果也表明牛乳中αs-酪蛋白的大量存在造成酪蛋白膠束粒子顆粒大,在胃中形成堅(jiān)硬的凝塊而難以消化。從本研究所得到的等體積和等蛋白質(zhì)質(zhì)量的牛奶和羊奶粉的蛋白質(zhì)凝膠圖譜中,可以清晰地看到酪蛋白類在牛奶中高于羊奶粉,而羊奶粉中的αs-酪蛋白和κ-酪蛋白表達(dá)顯著低于牛奶中的表達(dá)。由此可以看出,羊奶粉中因αs-酪蛋白的低含量更易于嬰幼兒的消化吸收。

    本研究結(jié)果表明,牛奶和羊奶粉中酪蛋白的種類及其組成間的比例存在明顯的差異,通過圖譜的觀察可以清晰地分辨出羊奶粉和牛奶。通過此法建立健全乳制品的圖譜對(duì)于檢測(cè)乳制品摻假和以次充好也能起到一定的作用,同時(shí)能為人們選擇更容易消化吸收的乳制品提供線索。

    [1]Park Y W,Haenlein G F W.Handbook of milk of non-bovine mammals [M].Oxford:Blackwell Publishing,2006:24~26.

    [2]FAO.FAO Yearbook,Production 1997,v.51 [Z].FAO Statistics Series,1998.

    [3]中國(guó)食品工業(yè)年鑒編委會(huì).中國(guó)食品工業(yè)年鑒[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1985.

    [4]大品牌為何不做羊乳制品 [J].北方牧業(yè),2007,(5):4.

    [5]劉東紅,唐佳妮,呂元,等.乳品真蛋白——定義、分析方法、計(jì)價(jià)及影響因素 [J].中國(guó)食品學(xué)報(bào),2008,8(5):115~119.

    [6]唐佳妮,呂元.國(guó)內(nèi)外乳品真蛋白檢測(cè)方法的進(jìn)展 [J].食品與發(fā)酵工業(yè),2009,35(4):119~123.

    [7]陳靜,王玉英,王婷婷,等.生鮮牛乳真蛋白快速檢測(cè)方法 [J].中國(guó)乳品工業(yè),2012,38(11):50~52.

    [8]金江玉,宋子明,史海瑩,等.真蛋白率在液態(tài)奶質(zhì)量鑒別中的應(yīng)用 [J].中國(guó)乳品工業(yè).2012,40(2):48~50.

    [9]管方方.牛乳中摻假大豆蛋白的SDS-PAGE方法研究[D].上海:上海應(yīng)用技術(shù)學(xué)院,2015.

    [10]侯麗英,朱黎娜,李嬋,等.牛奶中高分子質(zhì)量蛋白致敏作用的初步研究[J].天津醫(yī)藥,2014,42(11):1091~1093.

    [11]周青青.牛奶中三聚氰胺的ELISA和可視化納米金快速檢測(cè)技術(shù)研究[D].北京:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,2014.

    [12]Raynal-Ljutovac K,Lagriffoul G,Paccard P,etal.Composition of goat and sheep milk products: An update [J].Small Ruminant Research,2008,79:57~72.

    [13]張歌.牛乳和羊乳蛋白質(zhì)差異比較及檢測(cè)方法的研究[D].西安:陜西科技大學(xué),2013.

    [14]李武祎,郭順堂,俞樹孝,等.酪蛋白組分分離技術(shù)及消化性測(cè)定[J].食品科學(xué),2005,26(7):70~73.

    [15]郭本恒.乳品化學(xué)[M].北京:中國(guó)輕工業(yè)出版社,2001.

    [16]Li-Chan E,Nakai S.Rennin Modification of Bovine Casein to Simulate Human Casein Composition: Effect on Acid Clotting and Hydrolysis by Pepsin[J].Canadian Institute of Food Science & Technology Journal,1988,21:200~208.

    [編輯] 余文斌

    2017-03-28

    長(zhǎng)江大學(xué)博士啟動(dòng)基金項(xiàng)目(120/801200010129)。

    韓榮勛(1979-),男(朝鮮族),講師,博士,主要從事蛋白質(zhì)組學(xué)及家畜繁殖學(xué)研究,hanrongxun@126.com。

    TS201.2+1

    A

    1673-1409(2017)10-0061-03

    [引著格式]韓榮勛,羅靜波,俞海東.巴氏消毒牛奶與羊奶粉中主要蛋白質(zhì)組成的SDS-PAGE比較[J].長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版),2017,14(10):61~63.

    猜你喜歡
    羊奶粉羊奶巴氏
    真空結(jié)合加熱、冷凍濃縮羊奶理化品質(zhì)分析
    釋放巴氏新小綏螨可滿足對(duì)蘋果全爪螨的防治需求
    羊奶粉產(chǎn)業(yè)規(guī)??焖贁U(kuò)大
    巴氏殺菌水牛奶在不同儲(chǔ)存條件下微生物增長(zhǎng)規(guī)律的研究
    巴氏醋桿菌核酸修復(fù)酶UvrA對(duì)大腸桿菌耐受性的影響
    羊奶粉“摻?!? 不“純粹”
    食品界(2016年1期)2016-01-22 04:26:28
    食藥監(jiān)總局?jǐn)M對(duì)羊奶粉設(shè)濃度標(biāo)識(shí)
    打破“一牛獨(dú)大”格局,適時(shí)發(fā)展羊奶產(chǎn)業(yè)
    腦筋急轉(zhuǎn)彎
    賣羊奶的老人
    小說月刊(2015年12期)2015-04-23 08:51:01
    另类精品久久| 黄色a级毛片大全视频| 美女主播在线视频| 免费高清在线观看日韩| 国产男靠女视频免费网站| 美女国产高潮福利片在线看| 国产高清videossex| 国产精品成人在线| 久久精品人人爽人人爽视色| 欧美在线黄色| 女人精品久久久久毛片| 高清黄色对白视频在线免费看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 午夜视频精品福利| 悠悠久久av| 黄色 视频免费看| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产精品电影一区二区三区 | 老汉色av国产亚洲站长工具| 日本黄色视频三级网站网址 | 在线 av 中文字幕| 成人国产av品久久久| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产欧美日韩精品亚洲av| 一个人免费看片子| 亚洲欧美激情在线| 亚洲 欧美一区二区三区| 老司机午夜福利在线观看视频 | 亚洲av片天天在线观看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 1024视频免费在线观看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 老司机影院毛片| 夜夜爽天天搞| 免费观看a级毛片全部| 69精品国产乱码久久久| 操出白浆在线播放| 免费不卡黄色视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 我的亚洲天堂| 免费av中文字幕在线| 91麻豆av在线| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 久久99热这里只频精品6学生| 久久99热这里只频精品6学生| 2018国产大陆天天弄谢| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产福利在线免费观看视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 一本一本久久a久久精品综合妖精| videos熟女内射| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产精品亚洲一级av第二区| 少妇粗大呻吟视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 日本五十路高清| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产午夜精品久久久久久| 免费在线观看完整版高清| 老熟女久久久| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 又紧又爽又黄一区二区| 在线观看免费视频日本深夜| 91九色精品人成在线观看| 一级毛片女人18水好多| 亚洲国产中文字幕在线视频| e午夜精品久久久久久久| 99国产精品一区二区蜜桃av | 久久亚洲精品不卡| 日本欧美视频一区| 国产亚洲精品第一综合不卡| 色在线成人网| 老汉色∧v一级毛片| 在线观看人妻少妇| 成人av一区二区三区在线看| 国产野战对白在线观看| 一区二区三区激情视频| 手机成人av网站| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美成人免费av一区二区三区 | 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久人人97超碰香蕉20202| 欧美激情久久久久久爽电影 | 国精品久久久久久国模美| 91av网站免费观看| av视频免费观看在线观看| 久久婷婷成人综合色麻豆| 午夜91福利影院| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 日本wwww免费看| 一级,二级,三级黄色视频| 大香蕉久久网| 国产91精品成人一区二区三区 | 中文字幕人妻丝袜制服| 国产欧美日韩一区二区三| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲精品成人av观看孕妇| 午夜91福利影院| 欧美中文综合在线视频| 无人区码免费观看不卡 | 国产亚洲精品一区二区www | 成人三级做爰电影| 国产成人影院久久av| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 久久久水蜜桃国产精品网| h视频一区二区三区| 丝瓜视频免费看黄片| 一级黄色大片毛片| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产97色在线日韩免费| 两性夫妻黄色片| 最近最新中文字幕大全免费视频| 18禁国产床啪视频网站| 色在线成人网| 男人舔女人的私密视频| 黄色成人免费大全| 一本大道久久a久久精品| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲精品乱久久久久久| 午夜精品久久久久久毛片777| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 免费观看a级毛片全部| 亚洲国产欧美一区二区综合| 精品国产乱码久久久久久男人| 欧美激情 高清一区二区三区| 美女午夜性视频免费| 精品人妻1区二区| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲精品成人av观看孕妇| 我要看黄色一级片免费的| 国产1区2区3区精品| 欧美精品av麻豆av| 午夜久久久在线观看| 在线av久久热| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 男女边摸边吃奶| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 一本一本久久a久久精品综合妖精| av欧美777| 亚洲少妇的诱惑av| 成人av一区二区三区在线看| 午夜两性在线视频| a级毛片黄视频| 欧美人与性动交α欧美软件| 久久99热这里只频精品6学生| 色尼玛亚洲综合影院| 91九色精品人成在线观看| 18禁观看日本| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 最近最新免费中文字幕在线| 精品久久久久久电影网| 亚洲色图综合在线观看| 曰老女人黄片| 大型黄色视频在线免费观看| 美女视频免费永久观看网站| 国产主播在线观看一区二区| 久久精品人人爽人人爽视色| 一夜夜www| 国产色视频综合| av网站在线播放免费| 亚洲精品久久午夜乱码| 五月天丁香电影| 成人特级黄色片久久久久久久 | 免费少妇av软件| 99re在线观看精品视频| 一进一出好大好爽视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久人妻熟女aⅴ| 最黄视频免费看| √禁漫天堂资源中文www| av国产精品久久久久影院| 不卡av一区二区三区| 国产高清视频在线播放一区| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产福利在线免费观看视频| 国产精品成人在线| 一级,二级,三级黄色视频| 久久精品亚洲av国产电影网| 在线观看免费午夜福利视频| 99热网站在线观看| 高清av免费在线| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 久久 成人 亚洲| 一本久久精品| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久久精品免费免费高清| 久久精品人人爽人人爽视色| 免费观看人在逋| 午夜福利在线观看吧| 99精品久久久久人妻精品| 一本色道久久久久久精品综合| 男女高潮啪啪啪动态图| 脱女人内裤的视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 久久久久久免费高清国产稀缺| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 在线观看人妻少妇| 国产av一区二区精品久久| 欧美日本中文国产一区发布| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 高清黄色对白视频在线免费看| 在线观看免费日韩欧美大片| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 777米奇影视久久| 91老司机精品| 高清欧美精品videossex| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 免费观看人在逋| 黄片大片在线免费观看| 最新美女视频免费是黄的| 久久久精品区二区三区| 99国产精品免费福利视频| 黄色片一级片一级黄色片| 多毛熟女@视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 一级a爱视频在线免费观看| 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产亚洲av高清不卡| 久久国产精品人妻蜜桃| xxxhd国产人妻xxx| 欧美激情久久久久久爽电影 | 超碰97精品在线观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 日本精品一区二区三区蜜桃| 久久中文字幕一级| 久久九九热精品免费| 十分钟在线观看高清视频www| 最新美女视频免费是黄的| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲欧美激情在线| 色在线成人网| 欧美精品一区二区大全| 黑人猛操日本美女一级片| 大片免费播放器 马上看| 麻豆成人av在线观看| 男女午夜视频在线观看| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 下体分泌物呈黄色| 另类亚洲欧美激情| 日本av免费视频播放| 丁香六月欧美| 99久久人妻综合| 51午夜福利影视在线观看| av一本久久久久| 国产精品电影一区二区三区 | 国产精品99久久99久久久不卡| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 中文字幕人妻丝袜制服| 久久久国产成人免费| 国产亚洲欧美精品永久| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 一级a爱视频在线免费观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 天堂动漫精品| 日韩人妻精品一区2区三区| 亚洲国产av新网站| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产老妇伦熟女老妇高清| 乱人伦中国视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产麻豆69| 真人做人爱边吃奶动态| 美女国产高潮福利片在线看| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲精品一二三| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产成人av激情在线播放| 国产精品99久久99久久久不卡| 丁香六月天网| 亚洲av电影在线进入| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 丁香欧美五月| 国产三级黄色录像| 免费人妻精品一区二区三区视频| 人妻久久中文字幕网| 久久精品国产综合久久久| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 欧美午夜高清在线| 久久久久久久精品吃奶| 国产成人免费观看mmmm| 日日夜夜操网爽| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 丝袜美腿诱惑在线| 一进一出抽搐动态| 91老司机精品| 国产视频一区二区在线看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 午夜老司机福利片| 超碰成人久久| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 国产不卡av网站在线观看| 国产黄频视频在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久狼人影院| 久9热在线精品视频| 热99国产精品久久久久久7| 欧美日本中文国产一区发布| 婷婷丁香在线五月| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 黄色视频不卡| 操美女的视频在线观看| 亚洲一区中文字幕在线| 1024香蕉在线观看| 最黄视频免费看| 热99国产精品久久久久久7| av在线播放免费不卡| 久久精品91无色码中文字幕| xxxhd国产人妻xxx| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产免费福利视频在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 999久久久国产精品视频| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 欧美成人免费av一区二区三区 | 久久99热这里只频精品6学生| 国产精品影院久久| 久久中文看片网| 精品一区二区三区四区五区乱码| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 中文字幕人妻丝袜制服| 日韩大片免费观看网站| 午夜福利影视在线免费观看| 国产野战对白在线观看| 精品久久久久久久毛片微露脸| 操出白浆在线播放| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲专区中文字幕在线| 69av精品久久久久久 | 亚洲成人免费av在线播放| 90打野战视频偷拍视频| 99香蕉大伊视频| 黄色怎么调成土黄色| 少妇粗大呻吟视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产成人欧美在线观看 | 国产精品免费视频内射| 亚洲成人国产一区在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产人伦9x9x在线观看| 日韩一区二区三区影片| 国产精品av久久久久免费| 午夜精品久久久久久毛片777| 日本av手机在线免费观看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日本黄色日本黄色录像| 精品国产乱码久久久久久小说| 一区二区三区国产精品乱码| av线在线观看网站| 天天添夜夜摸| 99久久国产精品久久久| 色播在线永久视频| 亚洲美女黄片视频| 人成视频在线观看免费观看| 国产男女内射视频| 午夜两性在线视频| 国产成人精品在线电影| 日本一区二区免费在线视频| 色综合婷婷激情| 另类精品久久| 五月开心婷婷网| aaaaa片日本免费| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产真人三级小视频在线观看| av网站免费在线观看视频| 中文字幕最新亚洲高清| 香蕉国产在线看| 亚洲久久久国产精品| 电影成人av| 亚洲综合色网址| 亚洲一区中文字幕在线| 成年动漫av网址| 国产精品 国内视频| 国产精品久久电影中文字幕 | 久久久久久人人人人人| 考比视频在线观看| 亚洲精华国产精华精| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 一本久久精品| 国产成人系列免费观看| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 一二三四社区在线视频社区8| 日韩大码丰满熟妇| 国产精品免费大片| 国产精品1区2区在线观看. | 国产精品电影一区二区三区 | 国产精品98久久久久久宅男小说| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 母亲3免费完整高清在线观看| 免费av中文字幕在线| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 另类亚洲欧美激情| 日韩大片免费观看网站| 日韩免费av在线播放| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品一区二区在线观看99| 国产99久久九九免费精品| 黄片小视频在线播放| √禁漫天堂资源中文www| 丝袜喷水一区| a级毛片在线看网站| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 9热在线视频观看99| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 香蕉国产在线看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 成人黄色视频免费在线看| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 亚洲免费av在线视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 少妇 在线观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 制服诱惑二区| 国产成人精品久久二区二区免费| 亚洲美女黄片视频| 国产福利在线免费观看视频| 国产片内射在线| 999久久久精品免费观看国产| 大香蕉久久网| 久久久国产成人免费| 91精品国产国语对白视频| 91成人精品电影| 国产成人精品久久二区二区91| 色尼玛亚洲综合影院| 999精品在线视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 精品久久久精品久久久| 成人亚洲精品一区在线观看| 黄色毛片三级朝国网站| 欧美黑人精品巨大| 制服诱惑二区| 在线观看免费视频日本深夜| 天堂中文最新版在线下载| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 波多野结衣av一区二区av| 久久久久国内视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 午夜福利视频在线观看免费| 久久性视频一级片| 丝袜美足系列| 亚洲视频免费观看视频| 人人妻人人澡人人看| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲熟妇熟女久久| 欧美中文综合在线视频| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 国产福利在线免费观看视频| 丁香六月欧美| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 黄色丝袜av网址大全| 美女午夜性视频免费| 最新在线观看一区二区三区| 韩国精品一区二区三区| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 日本黄色视频三级网站网址 | 母亲3免费完整高清在线观看| 一本大道久久a久久精品| 午夜福利免费观看在线| av国产精品久久久久影院| 精品乱码久久久久久99久播| 大片电影免费在线观看免费| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 制服诱惑二区| 九色亚洲精品在线播放| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产1区2区3区精品| 午夜福利,免费看| 欧美国产精品一级二级三级| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 满18在线观看网站| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| www.999成人在线观看| 午夜成年电影在线免费观看| 天天影视国产精品| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产av精品麻豆| www.999成人在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲国产毛片av蜜桃av| aaaaa片日本免费| 国产高清视频在线播放一区| 成人手机av| 国产精品99久久99久久久不卡| 久久99一区二区三区| 91九色精品人成在线观看| 国产精品.久久久| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 波多野结衣一区麻豆| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产av精品麻豆| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 美女高潮到喷水免费观看| 黄色毛片三级朝国网站| 日韩三级视频一区二区三区| 黄片播放在线免费| 欧美在线黄色| 女人精品久久久久毛片| 12—13女人毛片做爰片一| 欧美日韩成人在线一区二区| 下体分泌物呈黄色| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国精品久久久久久国模美| 欧美激情 高清一区二区三区| 2018国产大陆天天弄谢| 色在线成人网| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 久久性视频一级片| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲av日韩在线播放| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 久久ye,这里只有精品| 国产xxxxx性猛交| av片东京热男人的天堂| 少妇粗大呻吟视频| 亚洲精华国产精华精| 我要看黄色一级片免费的| 成在线人永久免费视频| 男男h啪啪无遮挡| 十八禁网站网址无遮挡| 久久影院123| kizo精华| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 大码成人一级视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 日本wwww免费看| www.自偷自拍.com| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 18禁国产床啪视频网站| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲伊人久久精品综合| 乱人伦中国视频| 精品久久久久久电影网| 99久久人妻综合| 亚洲人成伊人成综合网2020| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 不卡一级毛片| 一区在线观看完整版| 精品国产亚洲在线| 久久性视频一级片| 激情视频va一区二区三区| 亚洲午夜理论影院| 露出奶头的视频| 超碰成人久久| 久久久久国内视频| 老司机靠b影院| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 日本欧美视频一区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲熟妇熟女久久| 高清欧美精品videossex| av超薄肉色丝袜交足视频| 亚洲精品在线美女| 精品一区二区三区四区五区乱码| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 精品第一国产精品| 国产精品.久久久| 国产1区2区3区精品| videosex国产| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 成人永久免费在线观看视频 | 亚洲精品久久午夜乱码| 啦啦啦 在线观看视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 丰满少妇做爰视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产日韩一区二区三区精品不卡| 深夜精品福利| 啦啦啦在线免费观看视频4| 日韩三级视频一区二区三区| 国产1区2区3区精品| 天天添夜夜摸| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 人妻 亚洲 视频| 欧美精品av麻豆av| 男女床上黄色一级片免费看| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 精品少妇内射三级|