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    丙戊酸對HL—60/HT細胞耐藥性的影響

    2017-06-06 10:46:16胡建鋒尹松梅謝雙鋒聶大年
    中國當代醫(yī)藥 2017年12期
    關鍵詞:戊酸抑制率培養(yǎng)液

    胡建鋒++尹松梅++謝雙鋒++聶大年++李益清

    [摘要]目的 探討丙戊酸(VPA)對耐三尖杉酯堿的HL-60細胞(HL-60/HT)耐藥性的影響。方法 選擇遞增壓力培養(yǎng)法建立HL-60/HT細胞株。分為三組,Ara-C組、VPA組、VPA+Ara-C組,采用MTT法測定使用各組藥物后敏感細胞、耐藥細胞增殖情況的變化,同時測定丙戊酸對HL-60/HT細胞耐藥性的改變,用流式細胞儀檢測敏感的HL-60細胞及HL-60/HT細胞的細胞周期。結果 丙戊酸與Ara-C合用可明顯抑制HL-60、HL-60/HT細胞生長,抑制率高于丙戊酸或Ara-C單獨的作用(q=1.37、1.51)。結論 丙戊酸能夠抑制HL-60、HL-60/HT細胞生長,可與Ara-C發(fā)揮協(xié)同作用,降低白血病細胞的耐藥性。

    [關鍵詞]丙戊酸;HL-60/HT細胞;白血病

    [中圖分類號] R733.7 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721(2017)04(c)-0067-03

    [Abstract]Objective To explore the impact of Valproic Acid (VPA) on drug resistance of HL-60 cells(HL-60/HT) resistant harringtonine.Methods HL-60/HT cell strain was established by incremental pressure culture and divided into 3 groups:Ara-C group,VPA group and VPA+Ara-C group.MTT method was used to determine the change of proliferation of sensitive cells and drug resistant cells after using drug.The change of VPA resistance in HL-60/HT cells was determinated simultaneously.The cell cycle of seneitive HL-60 cells and HL-60/HT cells were detected by flow cytometry.Results VPA in combination with Ara-C can obviously inhibit the growth of HL-60 and HL-60/HT cell,and the inhibition rate was higher than that of VPA or Ara-C alone (q=1.37,1.51).Conclusion VPA can inhibit the growth of HL-60 and HL-60/HT cell.It can play a synergistic role with Ara-C and reduce the drug resistance of leukemia cells.

    [Key words]Valproic acid;HL-60/HT cell;Leukemia

    白血病的主要治療方法是聯(lián)合化療,據統(tǒng)計60%~70%的患者經聯(lián)合化療后癥狀緩解,但短期內易復發(fā),主要原因是白血病細胞固有或獲得的多藥耐藥性[1-6]。本研究旨在探討VPA對耐三尖杉酯堿(HT)的HL-60細胞(HL-60/HT細胞)耐藥性的影響。

    1材料與方法

    1.1 試劑與材料

    RPMI1640培養(yǎng)基(LM-R1641/500)、二甲基亞砜(DMSO)(20161020 AR)購自博升生物公司;四氮唑藍(MTT)(B00718301)、VPA(B 2016110402)為貝斯特試劑公司產品;胎牛血清(13011-8611)購自杭州四季青公司;淋巴細胞分離液(E501064-0001)、D-Hank液(160922-1)購自上海生工生物工程公司;HT(20161006002)、Ara-C(20161120001)為Pharmacia & Upjohn公司產品;RNA酶(160910-2)、碘化丙啶(PI)(161104-1)購自上海華聯(lián)制藥有限公司。HL-60細胞自中山大學藥學院引進。

    1.2 細胞培養(yǎng)及耐藥株的建立

    HL-60細胞接種于 RPMI1640 完全培養(yǎng)基,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中,每2 天換液1次,細胞4~5 d傳代1次。

    采用極限稀釋法篩選耐藥的細胞克隆,具體方法為:取處于對數(shù)增長期的HL-60細胞,用遞增壓力選擇培養(yǎng)法建立HL-60/HT耐藥細胞株。開始時HT的濃度為0.005 μg/ml,培養(yǎng)2 d后換液并洗去藥物,無藥物環(huán)境中培養(yǎng)2 d。以此濃度培養(yǎng)3次后,將藥物濃度改為0.01 μg/ml,并逐漸加大HT濃度。5個多月后,培養(yǎng)出HL-60/HT耐藥細胞,采用MTT法檢測細胞對藥物的半數(shù)抑制濃度(IC50),確認耐藥細胞。

    1.3 對耐藥細胞和敏感細胞增殖抑制率的檢測

    設Ara-C作用HL-60細胞組和HL-60/HT細胞組、VPA作用HL-60細胞組和HL-60/HT細胞組、VPA+Ara-C作用HL-60細胞組和HL-60/HT細胞組,分別用MTT法分別測定Ara-C組、VPA組、VPA+Ara-C組對HL-60/HT細胞和HL-60細胞的增殖抑制率。將重懸細胞濃度調整為1×105/ml,以每孔200 μl接種于96孔平板,置37℃、5%CO2環(huán)境中孵育24 h。然后向每孔中加Ara-C或VPA或VPA+Ara-C。兩種細胞均設置無細胞培養(yǎng)液組和無藥對照組。48 h后加入20 μl MTT(終濃度為5 g/L),繼續(xù)孵育4 h,去除培養(yǎng)液,加DMSO 150 μl,振蕩10 min混勻,以無細胞培養(yǎng)液組調零,用酶標儀分別測定595 nm和492 nm處的吸光度值(A值)。不同條件下每次均設8個平行孔,重復3次。細胞生長抑制率=(無藥對照組A值均值-實驗組A值均值)/無藥對照組A值均值×100%。用直線回歸法計算各種藥物的IC50。

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