ABCG2和ALDH1在卵巢子宮內(nèi)膜異位癥惡變中的表達和影響研究*

劉頌平，田 鑫，溫 堅,殷新明

(江蘇大學(xué)第四附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇鎮(zhèn)江 212000)

ABCG2和ALDH1在卵巢子宮內(nèi)膜異位癥惡變中的表達和影響研究*

劉頌平，田 鑫，溫 堅,殷新明

(江蘇大學(xué)第四附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇鎮(zhèn)江 212000)

目的 探討三磷酸腺苷結(jié)合盒超家族G家族成員2(ABCG2)、乙醛脫氫酶1(ALDH1)在卵巢子宮內(nèi)膜異位癥惡變中的表達和意義。方法 采用免疫組織化學(xué)法檢測38例卵巢子宮內(nèi)膜異位癥惡變患者(EMs惡變組)，35例卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者(EMs組),30例正常子宮內(nèi)膜患者(對照組)中ABCG2、ALDH1蛋白的表達。結(jié)果 ABCG2、ALDH1在EMs惡變組中的陽性表達率明顯高于EMs組及對照組，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。EMs惡變組中ABCG2、ALDH1的表達與患者年齡、痛經(jīng)史及病理學(xué)類型無明顯相關(guān)性，與血清CA125水平、病理分化程度及分期呈明顯相關(guān)性(P<0.05)；ABCG2的表達與ALDH1的表達無明顯相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論 ABCG2、ALDH1可能與卵巢子宮內(nèi)膜異位癥惡變的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。

卵巢囊腫；子宮內(nèi)膜異位癥；變態(tài)反應(yīng)和免疫學(xué)；干細胞；三磷酸腺苷結(jié)合盒超家族G家族成員2；乙醛脫氫酶1

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMs)是婦科的常見病和多發(fā)病，其惡變率約為1%，最常見于卵巢。惡變的卵巢EMs病理類型多為卵巢透明細胞癌及卵巢子宮內(nèi)膜樣癌，被稱為EMs相關(guān)性卵巢癌(endometriosis associated ovarian carcinoma，EAOC)[1]，目前惡變的具體機制不明。近年來，干細胞與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)、耐藥等方面的相關(guān)性受到學(xué)者的廣泛關(guān)注[2-3]。三磷酸腺苷結(jié)合盒超家族G家族成員2(ABCG2)、乙醛脫氫酶1(ALDH1)是常見的干細胞標(biāo)志物，本課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)，ABCG2、ALDH1在EMs中存在異常表達，其可能與EMs的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)[4-5]。本研究進一步探討兩者在卵巢EMs惡變組織中的表達，了解其在EMs惡變過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2005年1月至2015年1月本院病理科存檔蠟塊。EMS惡變組為38例卵巢EMs惡變患者的病理切片，包括20例卵巢子宮內(nèi)膜樣癌,18例卵巢透明細胞癌。診斷標(biāo)準(zhǔn)[6-7]：(1)癌組織與EMs并存于同一病變；(2)二者具有組織相關(guān)性；(3)排除其他相關(guān)腫瘤的存在；(4)鏡下可見EMs向惡性移行的依據(jù)。EMs組為同期手術(shù)的35例卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者的病理切片。對照組為同期30例因?qū)m頸上皮內(nèi)瘤變Ⅲ級行子宮切除患者的正常子宮內(nèi)膜的病理切片。標(biāo)本采集經(jīng)患者本人或家屬知情同意，研究內(nèi)容經(jīng)醫(yī)院倫理委員會評估并批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號2015-34)。病理專家再次切片確認后，收集完整臨床資料,所有患者術(shù)前半年內(nèi)均未接受放化療或激素治療，無內(nèi)分泌、免疫或代謝性疾病。

1.2 方法 采用免疫組織化學(xué)法檢測組織中ABCG2、ALDH1的表達，試驗嚴格按照試劑盒說明書操作。以試劑公司提供的已知陽性切片作為陽性對照，磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。ABCG2主要定位于細胞膜及細胞質(zhì)中,ALDH1蛋白主要定位于細胞質(zhì)中，出現(xiàn)棕黃色顆粒狀染色為陽性。按照文獻[8]中的半定量方法綜合染色強度和陽性細胞百分率確定表達水平。每個切片觀察5個高倍視野，陽性細胞：≤6%記0分，>6%～25%記1分，>25%～50%記2分，>50%記3分；觀察染色程度：不著色記0分，陽性顆粒淡黃色記1分，棕黃色記2分，棕褐色記3分；兩項指標(biāo)評分相乘，0～1分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～6分為中度陽性(++)，7～9分為強陽性(+++)。0～1分判為陰性組，2～9分判為陽性組。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行處理，計數(shù)資料用率表示，組間采用χ2檢驗或Fisher精確概率法，相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析，檢驗水準(zhǔn)α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 3組中ABCG2、ALDH1蛋白表達情況 EMs惡變組陽性表達率明顯高于EMs組及對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.461、21.820，P<0.05)。EMs惡變組陽性表達率明顯高于EMs組及對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.216、21.286，P<0.05)，見表1。

a：P<0.05，與EMs惡變組比較。

2.2 EMs惡變組ABCG2、ALDH1表達與臨床、病理資料的相關(guān)性 ABCG2、ALDH1的表達均與患者年齡、痛經(jīng)史及病理學(xué)類型無明顯相關(guān)性，但與血清CA125水平、病理分化程度及分期呈明顯相關(guān)性(P<0.05)，見表2。

表2 ABCG2、ALDH1的表達與卵巢EMs惡變臨床病理參數(shù)的關(guān)系(n)

2.3 EMs惡變組ABCG2與ALDH1表達的關(guān)系 28例ABCG2陽性表達的內(nèi)異癥相關(guān)卵巢癌組織中，23例ALDH1蛋白表達陽性；而10例ABCG2蛋白表達陰性的內(nèi)異癥相關(guān)卵巢癌組織中，6例ALDH1蛋白表達陽性，兩者之間無明顯相關(guān)性(P>0.05)，見表3。

表3 卵巢EMs惡變組織中ABCG2、ALDH1表達的相關(guān)性(n)

3 討 論

EMS惡變機制迄今不明。腫瘤干細胞(CSC)是一類具有無限增生潛能、高致瘤性、高耐藥性,在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起決定性作用并與腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)密切相關(guān)的細胞，是近年來腫瘤研究領(lǐng)域的熱點，為闡明惡性腫瘤的發(fā)病機制提供了有效途徑。ABCG2、ALDH1近年來已被證實為多種惡性腫瘤的干細胞標(biāo)志物，并且與腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)[9-10]，但兩者在卵巢EMs惡變中的研究少見報道。

ABCG2是ABC轉(zhuǎn)運蛋白家族成員之一，最初被發(fā)現(xiàn)可以主動地把具有不同化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用于細胞內(nèi)不同靶位點的化療藥物泵出胞外,引起多藥耐藥。最近的研究顯示，ABCG2還是一種潛在的干細胞分子標(biāo)記，并在多種惡性腫瘤細胞株中都分離培養(yǎng)出ABCG2表達陽性的CSC[9-10]。王任曉[11]發(fā)現(xiàn)宮頸癌組織中ABCG2表達陽性率顯著高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組織與正常組織，且隨著陽性程度增加，遠期生存率降低，認為ABCG2作為CSC標(biāo)記物能夠在一定程度上對宮頸癌的預(yù)后進行預(yù)測。張春妤等[12]發(fā)現(xiàn)化療耐藥卵巢癌組織中ABCG2蛋白的表達明顯高于化療敏感者。而Zhang等[13]證實，卵巢癌側(cè)群細胞中表達ABCG2的細胞同時也表達其他的干細胞標(biāo)記物，如CD144、CD44等，說明ABCG2可能也是卵巢癌干細胞的標(biāo)記物之一。

ALDH1是乙醛脫氫酶家族的重要成員，催化細胞內(nèi)乙醛氧化為乙酸的細胞溶質(zhì)酶，參與多種組織的分化與基因表達,也是組織中正常干細胞與CSC生長、分化的必需物質(zhì),可以作為正常干細胞與CSC的標(biāo)志物之一。于慧玲等[14]研究發(fā)現(xiàn)，ALDH1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達較正常子宮內(nèi)膜組織明顯升高,并且隨組織病理分級和手術(shù)病理分期的升高而升高。她認為ALDH1作為一種新的CSC標(biāo)志物,可能成為診斷子宮內(nèi)膜癌的新的生物學(xué)標(biāo)志物,為判斷子宮內(nèi)膜癌的生物學(xué)行為，預(yù)測轉(zhuǎn)移趨勢及預(yù)后提供新靶點。范秀麗等[15]研究顯示含生長因子的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)卵巢癌SKOV3細胞能夠形成CSC球及高表達ALDH1，ALDH1可能是卵巢癌干細胞的標(biāo)志物之一。

本研究顯示ABCG2、ALDH1在EMs惡變組織的表達明顯高于EMs組織及正常子宮內(nèi)膜，鑒于ABCG2、ALDH1為常見的CSC標(biāo)記物，推測EMs惡變組織表達ABCG2、ALDH1的細胞可能就是CSC；低分化、晚期患者腫瘤組織中ABCG2、ALDH1的表達水平高于中高分化、早期患者腫瘤組織中的表達水平，提示低分化、晚期患者腫瘤組織中存在更多的CSC，更易發(fā)生腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、耐藥及復(fù)發(fā)。研究中還發(fā)現(xiàn)，ABCG2、ALDH1在EMs惡變組織中的表達并無明顯相關(guān)性，推測兩者可能具有不同的生物學(xué)功能，通過不同的途徑參與卵巢EMs的惡變過程，具體機制還有待進一步深入探討。

[1]孫蓬然．卵巢子宮內(nèi)膜異位癥惡變研究的新進展[J]．現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展，2012，21(4)：316-318．

[2]Nozawa-Suzuki N,Nagasawa H,Ohnishi K,et al.The inhibitory effect of hypoxic cytotoxin on the expansion of cancer stem cells in ovarian cancer[J].Biochem Biophys Res Commun,2015,457(4):706-711.

[3]Yan HC,Fang LS,Xu J,et al.The identification of the biological characteristics of human ovarian cancer stem cells[J].Eur Rev Med Pharmacol Sci,2014,18(22):3497-3503.

[4]劉頌平，溫堅，殷新明．子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔沖洗液及血清CD133、ABCG2的表達[J]．中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2013，10(24)：45-47．

[5]溫堅，劉頌平，殷新明．乙醛脫氫酶1與子宮內(nèi)膜異位癥的相關(guān)性研究[J]．中國婦幼保健，2013，28(35)：5878-5881．

[6]Guo SW.Endometriosis and ovarian cancer:potential benefits and harms of screening and risk-reducing surgery[J].Fertil Steril,2015,104(4):813-830.

[7]Scott RB.Malignant changes in endometriosis[J].Obstet Gynecol,1953,2(3):283-289.

[8]呂昕，王悅紅，周建英．TTF-1,SPA表達與Ⅱ期肺腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)及生存關(guān)系的研究[J]．浙江醫(yī)學(xué)，2015，37(2)：117-123．

[9]Szepesi A,Matula Z,Szigeti A,et al.ABCG2 is a selectable marker for enhanced multilineage differentiation potential in periodontal ligament stem cells[J].Stem Cells Dev,2015,24(2):244-252.

[10]Kim N,Choung HK,Lee MJ,et al.Cancer stem cell markers in eyelid sebaceous gland carcinoma:high expression of ALDH1,CD133,and ABCG2 correlates with poor prognosis[J].Invest Ophthalmol Vis Sci,2015,56(3):1813-1819.

[11]王任曉．宮頸癌組織中 ABCG2與 CD133的表達對預(yù)后的影響分析[J]．實用癌癥雜志，2014，29(6)：614-616．

[12]張春妤，郭紅燕，韓勁松，等．三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白G2、F2在卵巢上皮性癌組織中的表達與意義[J]．中華婦產(chǎn)科雜志，2014，49(3)：224-225．

[13]Zhang QH,Dou HT,Xu P,et al.Tumor recurrence and drug resistance properties of side population cells in high grade ovary cancer[J].Drug Res (Stuttg),2015,65(3):153-157.

[14]于慧玲，李冬梅，吳罡，等．子宮內(nèi)膜癌組織中ALDH1、p53和CyclinE蛋白的表達及意義[J]．中國婦幼保健，2014，29(25)：4165-4167．

[15]范秀麗，卞翠翠，董怡，等．ALDH1作為卵巢癌干細胞標(biāo)志物的實驗研究[J]．中國老年學(xué)雜志，2015，35(12)：3266-3268．

Expression and significance of ABCG2 and ALDH1 in malignant transformation of ovarian endometriosis*

LiuSongping,TianXin,WenJian,YinXinming

(DepartmentofObstetricsandGynecology,theFourthAffiliatedHospitalofJiangsuUniversity,Zhenjiang，Jiangsu212000,China)

Objective To investigate the expression and significance of ABCG2 and ALDH1 in malignant transformation of ovarian endometriosis.Methods The protein expressions of ABCG2 and ALDH1 were detected with immunohistochemistry in 38 cases of malignant transformation of ovarian endometriosis(EMs malignant transformation group)，35 cases of endometriosis(EMs group)and 30 cases of normal endometrium(control group)．Results The positive rates of ABCG2 and ALDH1 expressions in EMs malignant transformation group were significantly higher than those in EMs group and control group(P<0.05)．The expressions of ABCG2 and ALDH1 were significantly associated with the serum CA125 level,differentiation and clinical stage of malignant transformation of ovarian endometriosis (P<0.05)，but were not related to the patient′s age,dysmenorrhea history and pathology type(P>0.05)．There was no correlation between the expression of ABCG2 and ALDH1 in malignant transformation of ovarian endometriosis(P>0.05).Conclusion The expressions of ABCG2 and ALDH1 might be involved in malignant transformation of ovarian endometriosis．

ovarian cysts;endometriosis;allergy and immunology;stem cells;ABCG2；ALDH1

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.14.013

江蘇省自然科學(xué)基金資助項目(BK20140502)；江蘇省“六大人才高峰”資助項目(2015-WSW-088)；吳階平醫(yī)學(xué)基金資助項目(320.6755.15023)。 作者簡介：劉頌平 (1979-)，副主任醫(yī)師，碩士，主要從事子宮內(nèi)膜異位癥方面研究。

R711.71

A

1671-8348(2017)14-1912-03

2016-11-18

2017-01-06)