心力衰竭大鼠心肌SERCA2a和miR-25-3p/5p表達(dá)的改變及瀉肺利水方藥的干預(yù)作用*

吳錦波， 葉小漢， 冼紹祥， 董明國(guó)

(1. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)博士后流動(dòng)站， 廣州 510405； 2. 東莞市中醫(yī)院心內(nèi)科， 東莞 523000；3. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科， 廣州 510405)

心力衰竭大鼠心肌SERCA2a和miR-25-3p/5p表達(dá)的改變及瀉肺利水方藥的干預(yù)作用*

吳錦波1，2， 葉小漢2， 冼紹祥3△， 董明國(guó)2

(1. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)博士后流動(dòng)站， 廣州 510405； 2. 東莞市中醫(yī)院心內(nèi)科， 東莞 523000；3. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科， 廣州 510405)

目的：觀察心力衰竭大鼠肌漿網(wǎng)鈣ATP酶(SERCA2a)mRNA和miR-25-3p/5p表達(dá)水平的變化及中藥瀉肺利水方藥的干預(yù)作用。方法：SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、中藥組、卡托普利組和地高辛組(n=10)，阿霉素腹腔注射(總劑量15 ml/kg，2周內(nèi)分6次注射)建立心力衰竭大鼠模型，5周后分別以蒸餾水(10 ml/(kg·d))、瀉肺利水中藥(22 g/(kg·d))、卡托普利(19 mg/(kg·d))和地高辛(32 μg/(kg·d))連續(xù)灌胃35 d，觀察大鼠心肌SERCA2a mRNA、miR-25-3p/5p的表達(dá)水平和SERCA2a活性、血漿腦鈉肽水平、心輸出量和射血分?jǐn)?shù)。結(jié)果：模型組大鼠心輸出量和射血分?jǐn)?shù)顯著降低，心肌SERCA2a mRNA表達(dá)水平和活性降低，miR-25-3p和miR-25-5p的表達(dá)水平、血漿腦鈉肽水平顯著升高；瀉肺利水中藥能提高心肌SERCA2a mRNA表達(dá)水平和活性，降低miR-25-3p和miR-25-5p的表達(dá)水平，降低血漿腦鈉肽水平，提高心輸出量和射血分?jǐn)?shù)；卡托普利能提高心肌SERCA2a mRNA表達(dá)水平，降低miR-25-3p和miR-25-5p的表達(dá)水平，降低血漿腦鈉肽水平，提高心輸出量；地高辛能提高心肌SERCA2a mRNA表達(dá)水平，降低血清腦鈉肽水平，提高心輸出量。結(jié)論：心力衰竭大鼠心肌SERCA2a mRNA的表達(dá)下調(diào)，miR-25-3p和miR-25-5p的表達(dá)上調(diào)；瀉肺利水方藥可以上調(diào)SERCA2a mRNA的表達(dá)，下調(diào)心肌miR-25-3p和miR-25-5p 的表達(dá)，改善心功能。【關(guān)鍵詞】 瀉肺利水方藥；心力衰竭；肌漿網(wǎng)鈣ATP酶；miRNA-25；大鼠

【DOI】 10.12047/j.cjap.5449.2017.037

慢性心力衰竭( chronic heart failure,CHF)，簡(jiǎn)稱心衰，是多種心血管疾病的終末期表現(xiàn)，隨著人口老年化和生活方式的改變，心衰的患病人數(shù)不斷增加。目前全球已超過3800萬[1]，給社會(huì)造成沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，已成為一個(gè)全球性的公共衛(wèi)生問題。盡管心衰治療方案不斷優(yōu)化，但其5年病死率仍高達(dá)50%[2]，因此有必要尋求更好的治療方法。心肌細(xì)胞內(nèi) Ca2+穩(wěn)態(tài)失衡是CHF發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，直接影響心肌細(xì)胞的收縮舒張功能，引發(fā)一系列 Ca2+依賴的信號(hào)通路異常,導(dǎo)致心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能改變。因此，糾正細(xì)胞內(nèi)Ca2+穩(wěn)態(tài)失衡是心衰治療策略的研究熱點(diǎn)[3]。肌漿網(wǎng)鈣ATP酶2a (sarcoplasmic reticulum calcium ATPase 2a，SERCA2a)在舒張期重?cái)zCa2+進(jìn)入肌漿網(wǎng)，以維持細(xì)胞內(nèi)Ca2+穩(wěn)態(tài)，調(diào)節(jié)心肌興奮-收縮耦聯(lián)；轉(zhuǎn)SERCA2a基因治療可以改善實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和CHF患者的心功能[4]。miR-25可以降低SERCA2a表達(dá)，抑制miR-25改善心功能[5]。中藥被廣泛用于慢性心衰的治療，但由于作用機(jī)制不明確和缺乏令人信服的證據(jù)等原因，限制了其進(jìn)一步應(yīng)用。瀉肺利水中藥由東莞市中醫(yī)院心內(nèi)科根據(jù)中醫(yī)理論及多年臨床實(shí)踐而研制，功能宣肺平喘、降氣利水、益氣活血。臨床觀察顯示瀉肺利水中藥能改善CHF患者心功能，降低腦尿鈉肽(brain natriuretic peptide, BNP)，增加患者6 min步行距離，提高患者生活質(zhì)量[6]，因此，有必要對(duì)其作用機(jī)制作進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)通過腹腔注射阿霉素建立大鼠心衰模型，觀察大鼠心肌SERCA2a mRNA和miR-25-3p/5p的表達(dá)水平，探討瀉肺利水方藥的干預(yù)作用，為心衰治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康雄性SD大鼠50只(240±15) g由廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供[動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(粵)2013-0020；動(dòng)物合格證號(hào)：NO.440059000]。SPF級(jí)凈化空間，生長(zhǎng)條件為12 h/12 h光照周期，溫度(22±3)℃，相對(duì)濕度(40～70)%，自由攝食、飲水。

藥物與試劑：實(shí)驗(yàn)藥物采用指南[7]推薦劑量，并經(jīng)過人與大鼠體表面積換算，大鼠中藥劑量采用換算劑量的2倍。瀉肺利水方藥由葶藶子15 g 、杏仁10g、茯苓30 g、黃芪15 g 、陳皮6 g、三菱10 g和大棗2 g組成，中藥飲片購(gòu)自東莞市藥材公司，由東莞市中醫(yī)院制成流浸膏，并濃縮至每毫升2.2 g生藥，-20℃保存?？ㄍ衅绽?中美上海施貴寶，批號(hào)：AAB9465)配成1.9 mg/ml溶液；地高辛(上海信誼，批號(hào)：020150201)配成3.2 μg/ml溶液。阿霉素(Medchemexpress LLC，批號(hào)：HY-15142)；氯胺酮(福建古田藥業(yè)，批號(hào)：1504153)；地西泮(天津金耀藥業(yè)，批號(hào)：1507077)。超微量Ca2+-ATP酶檢測(cè)試劑盒(南京建成，批號(hào)：201509)； Rat BNP EIA試劑盒(批號(hào)：0828157005，RayBiotech.Inc.)。RT-PCR試劑由DBI公司提供。

主要儀器：HP5500心臟超聲儀，美國(guó)惠普；電子天平(BS210S)，日本Satorius 公司；超凈工作臺(tái)，蘇州凈化設(shè)備公司；紫外分光光度計(jì)(UV-1206)，日本SHIMODZU公司；冷凍離心機(jī)(SCR20B)，日本HITACHI公司；低溫高速離心機(jī)(Z323K)，德國(guó)HERMLE公司；GDS7600凝膠掃描系統(tǒng)，英國(guó)UVP公司；-20℃、-80℃冰箱，海爾集團(tuán)；Stratagene Mx3000P Real time PCR儀，美國(guó)Agilent公司。

1.2 心衰動(dòng)物模型制備

SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，參照文獻(xiàn)[8]通過腹腔注射阿霉素(總劑量15 mg/kg，每次2.5 mg/kg，配成0.25 mg/ml溶液，2周內(nèi)分6次注射)建立大鼠心衰模型。對(duì)照組腹腔注射同等劑量生理鹽水。首次腹腔注射5周后應(yīng)用心臟超聲儀檢測(cè)并計(jì)算左室短軸縮短率(rate of left ventricular short axis shorten，F(xiàn)S)，成模大鼠心腔擴(kuò)大，F(xiàn)S<30%。

1.3 分組和干預(yù)

SD大鼠隨機(jī)分為5組：對(duì)照組、模型組、中藥組、卡托普利組和地高辛組(n=10)。后3組分別以瀉肺利水方藥(22 g/(kg·d))、卡托普利(19 mg/(kg·d))和地高辛(32 μg/(kg·d))灌胃，對(duì)照組和模型組灌以1 ml/100 g蒸餾水灌胃，每天1次，連續(xù)35 d。

1.4 大鼠心臟功能檢測(cè)

干預(yù)前后采用腹腔注射氯胺酮(50 mg/kg)和地西泮(5 mg/kg)混合麻醉大鼠，胸前剃毛，仰臥位固定于木板上，應(yīng)用心臟超聲儀，分別測(cè)量左室舒張末期內(nèi)徑(left ventricular end diastolic diameter，LVEDD)、左室收縮末期內(nèi)徑(left ventricular end systolic diameter，LVESD)、左室舒張末期容積(left ventricular end-diastolic volume，LVEDV)和左室收縮末期容積(left ventricular end-systolic volume，LVESV)等，計(jì)算心輸出量(cardiac output，CO)和左室射血分?jǐn)?shù)(left ventricular ejection fraction，LVEF)。

1.5 ELISA法檢測(cè)血漿BNP水平

處死大鼠時(shí)腹主動(dòng)脈取血，肝素抗凝，靜置1 h，3 000 r/min離心10 min，取上清-20℃冰箱保存，按試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.6 定磷法測(cè)定SERCA2a活性

心肌組織冰水浴機(jī)械勻漿，2 500 r/min離心10 min；酶標(biāo)板加入去離子水、標(biāo)準(zhǔn)溶液和相應(yīng)濃度蛋白液體；樣品稀釋20倍，取25 μl置于酶標(biāo)板中，根據(jù)樣品及標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量，按50∶1配制BCA工作液；各孔加入200 μl BCA工作液，振蕩器上振蕩30 s，37℃放置30 min，于570 nm處讀取吸光值。以蛋白濃度(mg/ml)為縱坐標(biāo)，吸光值為橫坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)所測(cè)樣品的吸光值及標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程得到相應(yīng)的樣品濃度。超微量Ca2+-ATP酶檢測(cè)試劑加樣品混勻，37℃水浴反應(yīng)10 min，3 500 r/min離心10 min，取上清、雙蒸水和0.02 μmol/ml磷標(biāo)準(zhǔn)液各150 μl、定磷劑應(yīng)用液500 μl混勻，室溫靜止2 min，加終止劑500 μl混勻，室溫靜置5 min，波長(zhǎng)636 nm，光徑0.5 cm，雙蒸水調(diào)零，測(cè)定各管吸光值。計(jì)算公式：

1.7 RT-qPCR檢測(cè)大鼠心肌SERCA2a mRNA和miR-25-3p/5p表達(dá)水平

取心肌組織100 mg在液氮中充分研磨，加入1 ml Trizol，震蕩混勻室溫放置5 min；加入0.2 ml氯仿，劇烈震蕩15 s，靜置3 min；4℃ 12 000 r/min離心10 min；加入等體積異丙醇，混勻，靜置20 min；4℃ 12 000 r/min離心10 min，去上清；1 ml 75% DEPC酒精洗滌沉淀；4℃ 12 000 r/min離心5 min，棄去液體；室溫晾干，30 μl DEPC ddH2O溶解RNA，抽樣鑒定后于-80℃凍存?zhèn)溆?。? μg總RNA為模板，配制Bestar qPCR RT Kit逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系：1 μg總RNA，Primer Mix 1.0，DEPC H2O，65℃ 5 min，冰上急冷；5x RT Buffer 4.0，RT Enzyme Mix 1.0，DEPC H2O 4.0，總體系為20 μl，37℃,60 min；98℃,10 min，合成cDNA第1鏈。Real time PCR 擴(kuò)增的反應(yīng)體系為20 μl(DBI BestarSybrGreen qPCRmasterMix)：BestarSybrGreen qPCRmasterMix10 μl，PCR Forward Primer(10 μmol/L)0.5 μl，PCR Reverse Primer(10 μmol/L)0.5 μl，cDNA模板1 μl，ddH2O 8 μl。PCR反應(yīng)條件：逆轉(zhuǎn)錄94℃滅活逆轉(zhuǎn)錄酶及預(yù)變性2 min，94℃變性20 s，58℃退火20 s，72℃ 延伸20 s，PCR 擴(kuò)增40循環(huán)。融解曲線分析：溫度62℃～95℃。用Agilent Stratagene熒光定量PCR儀Mx3000P進(jìn)行熒光定量PCR。反應(yīng)完成后計(jì)算機(jī)自動(dòng)分析Ct 值，采用2-ΔΔCt方法計(jì)算相對(duì)比值。SERCA2a和miR-25-3p/5p分別以β-actin和U6作為內(nèi)參，其引物見表1。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 大鼠造模結(jié)果

對(duì)照組有9只大鼠成功采集數(shù)據(jù)。模型組、中藥組、卡托普利組和地高辛組各有8、9、8、7只大鼠成功造模。成模大鼠出現(xiàn)食欲減退、精神較差、張口呼吸和乏力等癥狀，CO和LVEF無顯著差異，均明顯低于對(duì)照組(P<0.01，表2)；其平均體重分別為368.9±27.5、373.6±22.7、371.8±21.6和381.2±21.3(g)，組間無顯著差異，均明顯低于對(duì)照組g(P<0.01)。

2.2 心臟功能指標(biāo)

干預(yù)后，模型組大鼠CO與LVEF明顯低于對(duì)照組(P<0.01)，中藥組、卡托普利組和地高辛組大組CO明顯高于模型組(P<0.01)，中藥組LVEF明顯高于模型組(P<0.05)；中藥組與卡托普利和地高辛組比較無明顯差異。干預(yù)后中藥組CO和LVEF明顯高于干預(yù)前(P<0.05，P<0.01)，地高辛組LVEF明顯高于干預(yù)前(P<0.05，表2)。

Tab. 1 Primers for RT-PCR

Tab. 2 Indices of cardiac function and plasma level of ±s)

CO: Cardiac output; LVEF: Left ventricular ejection fraction; BNP: Brain natriuretic peptide; TCM: Traditional Chinese Medicine

**P<0.01vscontrol group；?#P<0.05，##P<0.01vsmodel group;?△P<0.05，△△P<0.01vsbefore treatment

2.3 血漿BNP水平

模型組血漿BNP水平顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，中藥組、卡托普利組和地高辛組血漿BNP水平顯著低于模型組(P<0.01)，中藥組與卡托普利組和地高辛組比較無明顯差異(表2)。上述變化提示瀉肺利水中藥、卡托普利和地高辛均能降低血漿BNP水平。

2.4 心肌細(xì)胞SERCA2a活性

模型組心肌細(xì)胞SERCA2a活性顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，中藥組SERCA2a活性顯著高于模型組、卡托普利組和地高辛組(P<0.05，表3)。上述變化提示瀉肺利水中藥提高SERCA2a活性，卡托普利和地高辛作用不明顯。

2.5 RT-qPCR結(jié)果

模型組SERCA2a mRNA水平明顯低于對(duì)照組，miR-25-3p 和miR-25-5p水平明顯高于對(duì)照組(P<0.01)。中藥組、卡托普利組和地高辛組SERCA2a mRNA水平明顯高于模型組(P<0.05，P<0.01)。中藥組和卡托普利組miR-25-3p 和miR-25-5p水平明顯低于模型組(P<0.05，P<0.01)。中藥組SERCA2a mRNA水平明顯高于地高辛組，miR-25-5p水平明顯低于地高辛組(P<0.05)。各組miR-25-5p的表達(dá)水平均高于miR-25-3p(P<0.01，圖1，表3)。上述變化提示瀉肺利水中藥和卡托普利均能提高SERCA2a mRNA水平，降低miR-25-3p 和miR-25-5p水平。

3 討論

興奮-收縮耦聯(lián)是心肌收縮和舒張的基礎(chǔ)，Ca2+在心肌細(xì)胞興奮-收縮耦聯(lián)中起著關(guān)鍵作用。心肌細(xì)胞興奮，細(xì)胞膜上的電壓依賴性L-型鈣通道開放，細(xì)胞外少量Ca2+內(nèi)流，觸發(fā)肌漿網(wǎng)蘭尼堿受體通道在短時(shí)間內(nèi)釋放大量的Ca2+，胞漿Ca2+濃度瞬時(shí)大幅升高，Ca2+與肌鈣蛋白結(jié)合，心肌收縮。當(dāng)心肌細(xì)胞復(fù)極化時(shí)，胞漿中的Ca2+主要由SERCA2a重?cái)z入肌漿網(wǎng)內(nèi)，部分Ca2+通過細(xì)胞膜上的鈉-鈣交換體轉(zhuǎn)移出細(xì)胞外，胞漿Ca2+濃度下降，Ca2+與肌鈣蛋白解離，心肌舒張。心力衰竭的最基本機(jī)制是心肌細(xì)胞的興奮-收縮耦聯(lián)障礙，心肌收縮和/或舒張功能受損。衰竭心臟SERCA2a的活性或含量下降使肌漿網(wǎng)攝取Ca2+減少，胞漿中Ca2+濃度下降速度和幅度不足，心肌舒張延緩且不夠充分；肌漿網(wǎng)的Ca2+儲(chǔ)存量減少，心肌收縮時(shí)釋放的Ca2+減少，心肌收縮功能下降。研究表明，SERCA2a具有正性肌力和正性變舒張效應(yīng)，能夠提高心肌收縮力和改善舒張功能，過表達(dá)SERCA2a可以改善心功能[4]。CUPID研究[9]發(fā)現(xiàn)通過腺相關(guān)病毒將SERCA2a相關(guān)基因轉(zhuǎn)入患者體內(nèi)，可以改善重度收縮期心衰患者的癥狀，降低死亡率和心衰相關(guān)住院率，減少心衰加重情況，但CUPIDⅡb研究未能取得預(yù)期的臨床效果[10]。

Fig. 1 Expression of SERCA2a mRNA, miR-25-3p/5p in myocardium of rats

GroupnSERCA2amRNAmiR-25-3pmiR-25-5pSERCA2aactivity(U/mgprot)Control90.60±0.210.90±0.152.14±0.80▲▲0.103±0.048Model80.31±0.08**1.45±0.23**3.56±1.35**▲▲0.032±0.019**TCM90.56±0.20##1.11±0.21#2.16±1.24##▲▲0.073±0.046#Capto-pril80.51±0.24△1.14±0.32#2.65±0.93#▲▲0.043±0.024△Digoxin70.44±0.18△1.28±0.412.92±1.06△▲▲0.039±0.022△

SERCA2α: Sarcoplasmic reticulum ATPase 2α

**P<0.01vscontrol group；?#P<0.05，##P<0.01vsmodel group；?△P<0.05vsTCM group；?▲▲P<0.01vsmiR-25-3p

微小RNA(microRNA，miRNA)是由18～24個(gè)核苷酸構(gòu)成的單鏈非編碼RNA，調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育、組織分化、細(xì)胞增殖、凋亡、血管生成和代謝等多種生物學(xué)過程。miRNA主要通過抑制蛋白質(zhì)翻譯或mRNA降解調(diào)控基因表達(dá)[5,11]。Wahlquist[5]指出：miR-25通過作用于SERCA2a mRNA的3'非翻譯區(qū)(3'-UTR)的靶基因mRNA結(jié)合位點(diǎn)而抑制SERCA2a的翻譯。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：衰竭心臟中SERCA2a mRNA水平降低，miR-25-3p和miR-25-5p水平升高；在miR-25-3p和miR-25-5p表達(dá)受抑制的衰竭心臟中，SERCA2a mRNA水平升高，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的心功能得到改善，這可能與miR-25-3p和/或miR-25-5p抑制SERCA2a mRNA降解相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)中，瀉肺利水方藥、卡托普利和地高辛均能提高SERCA2a mRNA水平；瀉肺利水中藥能降低miR-25-3p和miR-25-5p的表達(dá)，提高SERCA2a的活性，這與SERCA2a表達(dá)增加有關(guān)。miR-25-3p有與miR-25相同的3'末端序列，也可能與SERCA2a mRNA的3'-UTR的結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合而抑制SERCA2a的翻譯，抑制miR-25-3p可以提高SERCA2a的表達(dá)水平和活性?？ㄍ衅绽偷馗咝敛荒芴岣逽ERCA2a的活性。瀉肺利水方藥能提高CO和LVEF，顯示其均能增加心肌收縮力、改善心功能，這些作用與SERCA2a的活性提高相關(guān)。miR-25-3p和miR-25-5p均為miR-25前體的產(chǎn)物，分別從miR-25前體的5'端臂和3'端臂加工而來的。本實(shí)驗(yàn)中，miR-25-3p和miR-25-5p的趨勢(shì)是一致的，miR-25-5p水平顯著高于miR-25-3p的具體機(jī)制尚不清楚，可能兩者升高和回落有時(shí)間差，或者大量的miR-25-3p作用于SERCA2a mRNA的3'-UTR從而導(dǎo)致其可檢測(cè)量降低。

中醫(yī)認(rèn)為，慢性心衰主要表現(xiàn)為呼吸困難、氣喘咳嗽和水腫等,辯證屬水氣上凌心肺，治法當(dāng)“從肺論治”，瀉肺利水，以恢復(fù)肺主氣司呼吸、主宣發(fā)肅降、肺朝百脈主治節(jié)以通調(diào)水道之功能。瀉肺利水方中葶藶子瀉肺平喘、利水消腫，黃芪補(bǔ)氣利尿消腫，杏仁平喘，陳皮理氣化痰，茯苓利水化痰寧心，三菱破血行氣，大棗補(bǔ)中益氣、養(yǎng)血安神兼制葶藶子毒性，全方組合共奏通肺行水之功[12]。本實(shí)驗(yàn)證明該中藥能抑制miR-25-3p/5p表達(dá)，提高SERCA2a表達(dá)水平和活性，改善心功能。本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物樣本量少，只針對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的心衰大鼠模型，瀉肺利水方藥治療CHF的分子機(jī)制有待大規(guī)模的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。

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Expressions of SERCA2a and miR-25-3p/5p in myocardium of rats with heart failure and therapeutic effects of Xiefei Lishui recipe

WU Jin-bo1，2, YE Xiao-han2, XIAN Shao-xiang3△, DONG Ming-guo2

(1. Post-doctoral Research Station of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine， Guangzhou 510405;2. Department of Cardiology, Dongguan Hospital of Traditional Chinese Medicine, Dongguan 523000;3. Department of Cardiology, the First Clinical Medical Hospital of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine， Guangzhou 510405， China)

Objective: To investigate the expressions of sarcoplasmic reticulum calcium ATPase 2a (SERCA2a) mRNA and miR-25-3p/5p in myocardium of rats with heart failure and the therapeutic effects of Xiefei Lishui recipe(Traditional Chinese Medicine). Methods: SD rats were randomly divided into five groups: control group, model group, Traditional Chinese Medicine group(TCM group), captopril group and digoxin group(n=10). Heart failure rat model was induced by intraperitoneal injections of doxorubicin(6 injections within 2 weeks; total dose:15 mg/kg). Five weeks after the first injection, Distilled water(10 ml/(kg·d)), TCM(22 g/(kg·d)), captopril(19 mg/(kg·d))，and digoxin(32 μg/(kg·d))were administrated by gastrogavage for 35 days，respectively. Myocardial expressions of SERCA2a mRNA and miR-25-3p/5p were detected;myocardial activities of SERCA2a were measured; cardiac output(CO) and left ventricular ejection fraction(LVEF) and plasma level of B-type natriuretic peptide (BNP) were measured. Results: Myocardial mRNA expression of SERCA2a was significantly down-regulated in rats with heart failure which could be significantly up-regulated by TCM or captopril or digoxin，while expressions of miR-25-3p and miR-25-5p in myocardium were significantly up-regulated which could be significantly down-regulated by TCM or captopril. SERCA2a activity, CO and LVEF in rats with heart failure were decreased significantly which could be significantly increased by TCM，while plasma level of BNP was increased significantly which could be significantly decreased by TCM or captopril or digoxin. CO in rats with heart failure could be significantly increased by captopril or digoxin. Conclusion: In rats with heart failure, myocardial mRNA expression of SERCA2a was downregulated, expression of miR-25-3p and miR-25-5p in myocardium was upregulated. Xiefei Lishui recipecan upregulate myocardial mRNA expression of SERCA2a, downregulate expression of miR-25-3p and miR-25-5p in myocardium and improve cardiac function.

Xiefei Lishui recipe； heart failure, congestive； sarcoplasmic reticulum calcium ATPase； miRNA-25; mouse

2016-04-19

2016-11-21

R541.6;R289

A

1000-6834(2017)02-146-05

△【通訊作者】Tel: 020-36598909; E-mail： shaoxiangx@hotmail.com