藏藥七十味珍珠丸的大鼠急性毒性實驗研究

徐文龍++孫位軍+王張++劉光麗++徐圓夢++梁源

[摘要] 目的 研究七十味珍珠丸的急性毒性，為臨床合理用藥提供參考。 方法 大鼠在24 h內(nèi)一次性灌胃給予最大劑量10 g/kg的七十味珍珠丸混懸液，觀察其在14 d內(nèi)所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)（死亡、中毒癥狀）及其嚴重程度、恢復情況、延遲反應(yīng)等。 結(jié)果 未見動物死亡、中毒癥狀和肉眼可見的臟器異常，體重和飼料消耗量無明顯變化，但部分血細胞指標（紅細胞系、白細胞系）和血液生化學指標（尿素氮、葡萄糖、總蛋白和白蛋白）出現(xiàn)異常。 結(jié)論 大鼠經(jīng)口給予七十味珍珠丸的最大給藥量為10 g/kg，為成人日用劑量的600倍，安全性良好，但在臨床應(yīng)用時應(yīng)監(jiān)測血常規(guī)和血液生化學指標。

[關(guān)鍵詞] 七十味珍珠丸；最大給藥量；急性毒性；大鼠

[中圖分類號] R285.5；R291.4 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2016）12（b）-0004-04

Study on the acute toxicity of Tibetan medicine Rannasangpei Pills in rats

XU Wenlong1 SUN Weijun1 WANG Zhang2 LIU Guangli1 XU Yuanmeng2 LIANG Yuan1

1.College of Pharmacy， Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， Sichuan Province， Chengdu 611137， China； 2.College of Ethnomedicine， Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， Sichuan Province， Chengdu 611137， China

[Abstract] Objective To study the acute toxicity of Rannasangpei Pills， provide reference for clinical rational drug use. Methods The maximum dose of Rannasangpei Pills suspension liquid 10 g/kg was supplied to the rats by gavage for one-time within 24 h， the toxic effects （death， poisoning symptoms） and its severity within 14 days， the recovery， delayed reaction and other indexes were observed. Results There was no abnormal animal death， poisoning symptoms and abnormal organs visible to the naked eye viscera， and body weight and feed consumption had no obvious changes， but some blood indexes （red blood cells， white blood cells） and blood biochemical indexes （urea nitrogen， glucose， total protein and albumin） had abnormalities. Conclusion The maximum dose of Rannasangpei Pills supplied to the rats through mouth is 10 g/kg， which is 600 times of daily doses of adults， the security is good， but in clinical application， it is necessary to monitor the blood routine and blood biochemistry indexes.

[Key words] Rannasangpei Pills； Maximum dose； Acute toxicity； Rats

七十味珍珠丸，又稱然納桑培，現(xiàn)收載于《中國藥典》（2015年版），由珍珠、檀香、降香、九眼石、西紅花、牛黃、麝香等組成[1]，始載于藏醫(yī)古典巨著《四部醫(yī)典》中，具有安神鎮(zhèn)靜、通筋活絡(luò)、調(diào)和氣血等作用，主要用于治療“黑白脈病”“龍血”不調(diào)；中風、癱瘓、半身不遂、癲癇、腦溢血、腦震蕩、心臟病、高血壓病及神經(jīng)性障礙等疾病。查閱臨床和實驗研究文獻，七十味珍珠丸治療缺血性腦卒中的劑量范圍為2～1000 mg/（kg·d）[平均192 mg/（kg·d）]，藥物劑量跨度大，用量多，增加了安全性風險。目前未見七十味珍珠丸急性毒性的公開報道，故遵照2005年原國家食品藥品監(jiān)督管理局公布的《藥物研究技術(shù)指導原則》[2]開展相關(guān)研究，為后續(xù)開展量效關(guān)系、有效性、作用機制和血清藥化、藥代動力學等研究提供安全劑量范圍參考。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物

七十味珍珠丸，規(guī)格為1 g/丸，由西藏甘露藏藥股份有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號為14049A。蒸餾水。

1.2 動物

SD大鼠，SPF級，雌雄各半，48只，體重為180～220 g，6～8周齡，由成都達碩生物科技有限公司提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（川）2013-24，實驗動物質(zhì)量合格證號：NO.0015982、0015985。實驗前動物于室內(nèi)適應(yīng)環(huán)境飼養(yǎng)3 d，室內(nèi)溫度（25±1）℃，自由飲水，喂食輻射滅菌維持飼料，實驗動物使用許可證號SYXK（川）2014-124。

1.3 試劑

血常規(guī)測試用試劑：溶血劑（批號1308014）、稀釋劑（批號1307022）和清洗劑（批號1308018）均來自上海特康科技有限公司。血液生化指標測試用試劑盒均來自上海特康科技有限公司，見表1。

1.4 儀器

全自動三分群血液分析儀（型號TEK-Ⅱ MINI，上海特康科技有限公司生產(chǎn)）；全自動生化分析儀（型號TC6010L，上海特康科技有限公司生產(chǎn)）；電子稱（BS-600L，上海有聲衡器有限公司，量程為600 g，精確度為0.1 mg）。

1.5 實驗方法

1.5.1 藥液的配制 取七十味珍珠丸用研缽研碎成極細粉，再轉(zhuǎn)移至小燒杯中，加入生理鹽水配制成濃稠混懸液，并以灌胃針測試至吸取較難但不至于無法吸取的濃稠度為七十味珍珠丸的最大濃度藥液（0.5 g/mL）。

1.5.2 預(yù)實驗 取SD大鼠8只，雌雄各半，給藥前禁食不禁水12 h，灌胃給藥七十味珍珠丸溶液1次（給藥體積為大鼠能夠接受的最大容積20 mL/kg，濃度為0.5 g/mL），連續(xù)觀察2 d。結(jié)果大鼠狀況良好，無動物死亡，無法計算七十味珍珠丸的LD50，故正式實驗以最大給藥量法[3-5]進行七十味珍珠丸的急性毒性實驗。

1.5.3 正式試驗 取SD大鼠40只，雌雄各半，按體重分層后再隨機分為空白對照組和七十味珍珠丸組，每組20只，雌雄各10只，給藥前禁食不禁水12 h?？瞻讓φ战M灌胃蒸餾水，七十味珍珠丸組灌胃七十味珍珠丸的最大濃度藥液（0.5 g/mL），給藥體積均為20 mL/kg[6]，僅給藥1次。連續(xù)觀察14 d，觀察記錄大鼠的外觀、分泌物、行為活動、自主活動、中毒癥狀及死亡情況[7]等，同時在給藥前1 d、給藥當天、給藥后第7天和第14天時，觀察和記錄各組動物的體重變化及進食情況。第14天處死大鼠前，觀察未死亡動物的一般情況、天然孔道情況后，將動物腹腔注射水合氯醛麻醉，經(jīng)腹主動脈取血2管，其中一管取2～3 mL抗凝處理，另一管取3～4 mL凝固后分離血清1.5～2.0 mL，立即送檢，測試血常規(guī)和血生化指標[8]。

1.6 統(tǒng)計學方法

運用SPSS 19.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進行處理，計量資料采用均數(shù)±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 一般狀況和尸檢結(jié)果

30 min內(nèi)兩組大鼠普遍出現(xiàn)精神萎靡、行動遲緩，但均迅速恢復正常，飲食飲水正常，觀察期內(nèi)無動物死亡。此后連續(xù)14 d觀察中均未見不良反應(yīng)，其被毛、膚色、鼻、眼、口腔分泌物均未見異常；心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、運動功能、反射及痛覺未見異常，未見任何中毒癥狀，無動物死亡。第14天解剖所有大鼠，內(nèi)部臟器肉眼未見異常。

2.2 體重及飼料消耗量變化情況

七十味珍珠丸經(jīng)口一次性灌胃給予雌雄大鼠后14 d內(nèi)，雌雄大鼠的體重無明顯變化；空白對照組和七十味珍珠丸組大鼠的飼料消耗量均呈現(xiàn)先升高后降低的變化趨勢，表明七十味珍珠丸對飼料消耗量的自然變化沒有影響。見表2～3。

2.3 血常規(guī)

一次灌胃給予七十味珍珠丸后14 d，與空白對照組比較，雌性大鼠的紅細胞數(shù)和血紅蛋白含量明顯減少（P < 0.05），雄性大鼠的平均血紅蛋白含量和平均血紅蛋白濃度、白細胞數(shù)、淋巴細胞絕對值、中間細胞絕對值、粒細胞絕對值明顯降低（P < 0.01或P < 0.05），雄性大鼠的中間細胞百分比明顯升高（P < 0.05）。雄性和雌性大鼠的紅細胞比積、平均紅細胞體積、紅細胞寬度變異系數(shù)等沒有明顯變化。見表4。

2.4 血液生化指標

一次灌胃給予七十味珍珠丸后14 d，與空白對照組比較，雄性大鼠的尿素氮和葡萄糖含量明顯降低（P < 0.01、P < 0.05），而雌性大鼠的總蛋白和白蛋白含量升高（P < 0.01、P < 0.05）。雄性和雌性大鼠的球蛋白、白球比、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、總紅膽素、膽固醇、三酰甘油、肌酐沒有明顯變化。見表5。

3 討論

七十味珍珠丸是藏醫(yī)藥中最具代表性的珍寶類藏成藥之一，在藏族地區(qū)應(yīng)用廣泛，臨床上一般用水或酒送服，對于藏醫(yī)中“黑白脈病”及現(xiàn)代醫(yī)學中腦卒中等疾病有著顯著效果[9]。根據(jù)公開出版的文獻，作者整理出七十味珍珠丸中植物類藥材32種，如西紅花[10]（藏紅花[11]）、檀香、安息香、沉香、降香、短穗兔耳草（短穗兔草[12]）、甘草、天竺黃、木訶子、訶子、藏荊芥、荊芥等；動物類藥材8種，如麝香（人工麝香）、野牛血、牛黃（人工牛黃）、羚羊角、熊膽等；礦物和寶石類藥材20余種，如天然珍珠（珍珠）、九眼石、瑪瑙、珊瑚、藍寶石、貓眼石、松石[13]、青金石等；金屬類藥材10余種，如金、銀、銅（銅灰）、天然鐵[14]等；混合物1種，即佐臺（坐臺[15]）。

本研究結(jié)果中，七十味珍珠丸的最大給藥量為10 g/kg，此劑量下未見動物死亡、中毒癥狀和肉眼可見的臟器異常，體重和飼料消耗量無明顯變化。其成人日用劑量為1 g，即上述給藥劑量為成人日用劑量的600倍。結(jié)果表明，七十味珍珠丸毒性低，服用安全。

七十味珍珠丸被公認為是治療腦中風后遺癥[16]、腦震蕩[17]、阿爾茨海默病[18]及心絞痛[19]等心腦血管和神經(jīng)系統(tǒng)疾病的有效方劑，其組方中含有大量礦物類元素，如Cd、Pb、Hg等[20-21]。索有瑞等[22]在模擬人工胃液在動物體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)七十味珍珠丸中重金屬元素汞、砷、鉛、鎘等吸收較少，大部分排出體外，機體內(nèi)無明顯長期蓄積性毒性。李天才等[23]對七十味珍珠丸中礦物質(zhì)元素在大鼠體內(nèi)代謝途徑的探討中發(fā)現(xiàn)，絕大部分礦物質(zhì)元素主要通過胃腸道代謝途徑，以糞便的形式排出體外，其長期蓄積性毒性作用極低。這也與我們急性毒性實驗評價的七十味珍珠丸的毒性低相符合。

此外，急性毒性實驗血液測試結(jié)果表明，與空白對照組比較，七十味珍珠丸可明顯降低雌性大鼠血清中紅細胞數(shù)和血紅蛋白含量及雄性大鼠血清中白細胞系（淋巴細胞絕對值、中間細胞絕對值、粒細胞絕對值）相關(guān)指標的水平，但均在正常范圍內(nèi)。該變化的機制和毒效物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確，可能與七十味珍珠丸所含重金屬有關(guān)，但是也可能是單次試驗的偶然現(xiàn)象，均有待進一步研究。

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（收稿日期：2016-09-08 本文編輯：張瑜杰）