影響獺兔離體腸道平滑肌收縮的因素

摘要[目的]探討影響獺兔離體腸道平滑肌收縮的因素。[方法]以獺兔十二指腸平滑肌為試驗材料，以平滑肌收縮波的振幅和周期為評價指標，考察影響試驗的各主要因素。[結(jié)果]在（36.5±0.5） ℃臺氏液中，獺兔離體腸管的存活時間和保質(zhì)期最長，振幅最穩(wěn)定，腎上腺素使離體腸管平滑肌收縮幅度減弱，乙酰膽堿、氫氧化鈉及氯化鈣均導致平滑肌收縮頻率及幅度升高，收縮力增強。[結(jié)論]獺兔離體腸道平滑肌易受到溫度、pH、其他化學因素及藥物的影響。

關(guān)鍵詞獺兔；離體試驗；十二指腸；平滑肌

中圖分類號S829.1文獻標識碼

A文章編號0517-6611（2017）10-0101-03

Influencing Factors on the Contraction of Smooth Muscle in the Isolated Intestines of Rex Rabbit

DING Wenkai（Animal Husbandry and Veterinary Station in Ganzihe Township，Haiyan County of Qinghai Province，Haiyan，Qinghai 812299）

Abstract[Objective] To discuss the influencing factors on the contraction of smooth muscle in isolated intestines of rex rabbit. [Method] Taking smooth muscle in the duodenum of rex rabbit as test materials， using contractive waves amplitude and cycle of smooth muscle as evaluation indices， their main influencing factors were explored. [Result] In （36.5±0.5） ℃ Tyrode solution， isolated intestines of rex rabbit had the longest survival time and shelf life， and the most stable amplitude. The smooth muscles contraction amplitude of isolated intestines was weakened by epinephrine. The contraction frequency and amplitude of smooth muscle were increased by acetylcholine， sodium hydroxide and calcium chloride， and the contraction force was enhanced by acetylcholine， sodium hydroxide and calcium chloride. [Conclusion] The smooth muscle of isolated intestines of rex rabbit is easily affected by temperature， pH， other chemical factors and drugs.

Key wordsRex rabbit； Experiment in vitro；Duodenum；Smooth muscle

胃腸動力學異常性疾病是引起消化道疾病的重要影響因素之一，在國內(nèi)發(fā)病率較高。離體腸道平滑肌試驗能為研究藥物對胃腸道的作用機制提供有效手段。筆者考察影響獺兔離體腸道平滑肌試驗的主要因素及評價指標，考察影響試驗的各主要因素的優(yōu)缺點。

1材料與方法

1.1試驗動物從青海省湟源縣民興獺兔場購買健康無病

的2月齡獺兔20只（雌雄各半），試驗在青海畜牧獸醫(yī)職業(yè)

技術(shù)學院中心實驗室完成。

1.2試驗儀器與試劑

試驗儀器有BL-420F生物信號采集處理系統(tǒng)、JD-400恒溫平滑肌槽和FT-100張力換能器均購自成都泰盟科技有限公司；試驗試劑為氧氣袋、常用代體液（見表1）、0.01%腎上腺素、0.01%乙酰膽堿、雙蒸水，其他試劑均為分析純。

1.3試驗裝置和標本制備

為保障離體腸道的運動效果，獺兔禁食24 h后，試驗前1 h飼喂青草和兔糧，自由飲水。用木棒猛擊獺兔頭枕部使其昏迷，迅速固定在兔臺上，剪去腹部兔毛，立刻剖開腹腔，在胃幽門后端分離出十二指腸，并對此腸段進行雙結(jié)扎，剪取雙結(jié)扎中間的腸段，用注射器吸取營養(yǎng)液，將腸內(nèi)容物反復沖洗干凈，剪成數(shù)段不等長的腸管，備用。將腸管兩端用細線固定于標本槽內(nèi)通氣管掛鉤和張力換能器之間，調(diào)節(jié)水溫至38 ℃，不斷注入氧氣，調(diào)節(jié)氣流速度，每分鐘氣泡量為60～70個，待離體腸管灌流裝置穩(wěn)定10～20 min后，使用BL-420F生物信號采集處理系統(tǒng)記錄離體腸段平滑肌收縮曲線。分別滴加2滴0.001 mol/L腎上腺素和乙酰膽堿、1.0 mol/L NaOH、1.0%CaCl2溶液后，觀察離體小腸平滑肌收縮的變化。

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

運用Excel軟件整理數(shù)據(jù)，使用SPSS統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析顯著性檢驗和多重比較，試驗結(jié)果均以平均值±標準差表示。

2結(jié)果與分析

2.1不同代體液對獺兔離體腸管生理特性的影響

將獺兔隨機分成5組，每組4只（雌雄各半）。每次進行離體小腸平滑肌試驗時均剪取相同部位、相同長度的腸管，除代體液不同外，其他條件均相同。其余腸管分別置于盛有對應代體液的燒杯中，觀察腸管在不同代體液中的存活時間，以腸管在非懸掛條件下不收縮為失活，代體液保質(zhì)期以出現(xiàn)沉淀即為失效。采用LSD法比較獺兔離體腸管在5種代體液中的存活時間、振幅及代體液保質(zhì)期。由表2可知，獺兔離體腸管在臺氏液和樂氏液中的存活時間顯著長于其他4種代體液，振幅也顯著小于其他4種代體液，代體液保質(zhì)期也顯著長于其他4種代體液，所以獺兔離體腸管在臺氏液中存活時間和保質(zhì)期最長且振幅最穩(wěn)定，因此臺氏液是獺兔離體腸管平滑肌收縮的最適代體液。

2.2臺氏液溫度對獺兔小腸平滑肌振幅和周期的影響

剪取相同長度的獺兔十二指腸平滑肌，在臺氏液中進行試驗，應用LSD法比較不同溫度對獺兔離體小腸平滑肌振幅和周期的影響。由表3可知，當臺氏液溫度為36.0～37.0 ℃時，獺兔離體小腸的振幅和周期顯著基本穩(wěn)定于37.5 ℃和38.0 ℃。當臺氏液溫度降至25.0 ℃時，腸管平滑肌的收縮幅度顯著減弱，周期縮短。因此，（36.5±0.5） ℃是獺兔離體腸管平滑肌收縮的最佳溫度范圍。

2.3藥物對獺兔離體小腸平滑肌收縮曲線的影響在36.5 ℃臺氏液中，考察不同藥物對獺兔十二指腸平滑肌收縮曲線的影響。從圖1可以看出，臺氏液中滴加腎上腺素使腸管平滑肌的收縮幅度減弱，滴加乙酰膽堿、氫氧化鈉、氯化鈣后獺兔離體腸管平滑肌收縮頻率及幅度均升高，收縮力增強。

3討論與結(jié)論

3.1臺氏液為獺兔離體腸管平滑肌試驗的最適代體液

代體液作為生理性溶液，可用于維持離體組織、器官及細胞的正常生命活動。作為代體液，必須具備以下條件：①滲透壓與組織相等；②應含有各組織、器官維持正常機能所必需的比例適宜的各種無機鹽離子；③pH與血漿相同，且具有一定的緩沖能力；④應含有氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)。動物試驗中常用的代體液有臺氏液、樂氏液、任氏液、克氏液和生理鹽水5種。哺乳動物一般使用臺氏液和樂氏液。臺氏液常用于哺乳動物肌體灌流、清洗組織，并維持離體腸肌的正常生理功能。樂氏液用于哺乳動物的心臟、子宮及其他離體臟器，可以較長時間地維持離體組織器官的正常生命活動。任氏液成分與兩棲動物血漿成分類似，常用來浸潤兩棲類動物神經(jīng)和組織并保持其生理活性?？耸弦哼m合動物心臟的內(nèi)環(huán)境。生理鹽水是與血清等滲的氯化鈉溶液。黃永毅等[1]以臺氏液為代體液，剪取1.5 cm十二指腸段，研究表明核桃葉既能協(xié)同乙酰膽堿聯(lián)合增強小腸收縮幅度，又能對抗腎上腺素抑制小腸收縮幅度，但對小腸收縮頻率無明顯影響。曹雯麗等[2]在研究刺糖對小鼠腸離體小腸平滑肌收縮的體內(nèi)外試驗中，選擇臺氏液為代體液，剪取幽門至回盲部的腸管并剪成1.0～1.5 cm小段，以收縮幅度、收縮頻率和運動指數(shù)為指標，結(jié)果表明刺糖具有調(diào)節(jié)小鼠小腸在體內(nèi)外運動的作用。廖博等[3]研究表明大黃浸出液對家兔離體十二指腸平滑肌的運動有明顯增強作用，且不同濃度、不同浸泡時間的作用效果差異極顯著（P<0.01）。該研究中獺兔離體十二指腸管在臺氏液中存活時間和代體液保質(zhì)期最長且振幅最穩(wěn)定，這與駱利平等[4]的研究結(jié)果基本一致。此外，試驗前離體腸管應在4 ℃臺氏液中浸放1.0～1.5 h，然后再進行平滑肌收縮試驗，這樣效果會更好[5]。因此，臺氏液是獺兔離體腸管平滑肌試驗的最適代體液。

3.2（36.5±0.5） ℃是獺兔離體腸管平滑肌收縮的最佳溫度范圍

保持腸管活性的另一環(huán)境因素是代體液溫度。楊秀平等[6]認為家兔離體小腸平滑肌試驗中恒溫平滑肌浴槽溫度應保持在38 ℃左右。該研究表明代體液溫度為36.0～37.0 ℃時，家兔離體小腸平滑肌振幅和周期差異不顯著。當代體液溫度超過37.0 ℃后，隨著溫度的升高，振幅逐漸減弱，周期逐漸延長。因此，（36.5±0.5） ℃是獺兔離體小腸平滑肌收縮的最佳溫度范圍。臺氏液溫度由36.5 ℃降至25 ℃時平滑肌收縮明顯減弱，這是因為平滑肌收縮需要酶催化，而溫度在一定范圍內(nèi)下降時鈉鉀泵及離子通道內(nèi)酶的催化活性也會降低，影響鈉、鉀、鈣離子的轉(zhuǎn)運，從而影響去極化和復極化的速度，進而動作電位的產(chǎn)生速率和幅度就會下降，所以平滑肌的收縮程度會減弱。

3.3藥物對獺兔離體腸管平滑肌收縮的影響明顯

筆者以離體小腸平滑肌收縮試驗作為觀察初步篩查藥物對胃腸道平滑肌舒縮運動影響的方法。硝苯地平[7]、運脾湯[8]、紫蘇梗[9]、生遠志與蜜遠志[10]、青皮[11]等在哺乳動物離體小腸平滑肌收縮試驗中都取得了較好的成果，為研究中藥對胃腸道運動的作用機理鑒定了理論基礎(chǔ)。該研究結(jié)果表明滴加腎上腺素后家兔離體小腸平滑肌收縮明顯減弱，這是因為腎上腺素與小腸平滑肌肌膜上的β-腎上腺素能與受體結(jié)合，可導致使膜超極化，從而使膜去極化達到閾電位的幅度增加，所以其動作電位的產(chǎn)生頻率下降，所以小腸平滑肌的收縮幅度減弱。滴加乙酰膽堿后小腸平滑肌的收縮明顯增強，這是由于乙酰膽堿與小腸平滑肌肌膜上的M受體結(jié)合后，可以在膜去極化未達到一定的電位時提前激活更多的慢鈣通道，使大量鈣離子內(nèi)流，進而使動作電位產(chǎn)生的頻率增加，所以小腸的平滑肌收縮增強。滴加NaOH后離體小腸平滑肌的收縮頻率及幅度升高。由于H+濃度降低，促進鈣通道激活，肌凝蛋白ATP酶活性升高，肌纖蛋白對Ca2+敏感性升高，肌質(zhì)網(wǎng)釋放Ca2+增多，因而收縮力增強。滴加CaCl2后的離體小腸平滑肌的收縮頻率及幅度升高。因為細胞外液Ca2+濃度升高，內(nèi)流增強，與鈣調(diào)蛋白結(jié)合增加，因而收縮力增強。

綜上所述，獺兔離體腸道平滑肌具有自律性和緊張性，但其收縮緩慢，節(jié)律性不規(guī)則，容易受到溫度、pH及其他化學因素、藥物的影響。

45卷10期丁文剴影響獺兔離體腸道平滑肌收縮的因素

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