孔雀致病性大腸桿菌的分離鑒定

許宇霞 王志永

摘要： 某野生動(dòng)物園，孔雀出現(xiàn)食欲減退、腫臉、流淚、嚴(yán)重腹瀉、消瘦死亡，有個(gè)別的孔雀出現(xiàn)急性死亡。為確定引起孔雀癥狀及死亡的病原菌，剖檢死亡的孔雀，無菌采集病死孔雀肝臟、心血、腎臟等病料組織進(jìn)行病原菌的分離鑒定，分離到1株病原菌。通過細(xì)菌培養(yǎng)特性、形態(tài)學(xué)觀察、生化特性試驗(yàn)、動(dòng)物致病性試驗(yàn)等鑒定方法，分離的病原菌為致病性大腸桿菌。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明： 頭孢曲松、恩諾沙星、氟苯尼考、多西環(huán)素、左氧氟沙星5種藥物敏感；對大觀霉素中敏；對阿莫西林、氨芐西林、慶大霉素3種藥物耐藥。

關(guān)鍵詞： 孔雀；致病性大腸桿菌；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：S858.9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：2096-3637（2017）07-0013-02

孔雀是我國養(yǎng)殖的主要的珍禽，分布在我國的許多地區(qū)，具有、觀賞、食用、保健等價(jià)值。隨著孔雀的養(yǎng)殖量的增加，發(fā)病率和死亡率逐漸增高，尤其是致病性大腸桿菌病引起孔雀的腹瀉、死亡報(bào)道越來越多[1-2]。致病性大腸桿菌常引起禽類敗血癥、氣囊炎、肝周炎、心包炎、肉芽腫、關(guān)節(jié)炎、眼炎等多種病理變化，禽類感染致病性大腸桿菌具有較高的發(fā)病率和死亡率。大腸桿菌易產(chǎn)生耐藥性，當(dāng)發(fā)生該病時(shí)應(yīng)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，科學(xué)用藥[3-4]。

2017年6月中旬，某野生動(dòng)物園，孔雀出現(xiàn)食欲減退、腫臉、流淚、嚴(yán)重腹瀉、消瘦死亡，有個(gè)別的孔雀出現(xiàn)急性死亡，為確定引起孔雀癥狀及死亡的病原菌。采肝臟等病料組織，分離到了1株病原菌，被鑒定為致病性大腸桿菌，通過藥敏試驗(yàn)，分析其耐藥性，科學(xué)指導(dǎo)用藥，本研究為孔雀致病性大腸桿菌的防治提供了基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1病料來源

某野生動(dòng)物園突然死亡的孔雀，無菌采集病死孔雀肝臟、心血等病料組織。

1.2主要試劑與儀器

麥康凱培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、血瓊脂培養(yǎng)（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）；藥敏紙片、生化鑒定試劑管及（杭州天和微生物試劑有限公司）；恒溫培養(yǎng)箱、顯微鏡、超凈工作臺(tái)等常規(guī)設(shè)備由本研究室提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康雛雞10只，購自某養(yǎng)殖場。

1.4 細(xì)菌分離培養(yǎng)

將無菌采集肝臟、心血等病料接種于血瓊脂平板，置于37℃培養(yǎng)箱12～18h，挑取血瓊脂平板上優(yōu)勢單個(gè)菌落，接種于麥康凱瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行鑒別與純化培養(yǎng)，取純化的細(xì)菌進(jìn)行革蘭氏染色，顯微鏡觀察形態(tài)。

1.5 細(xì)菌生化特性鑒定

按照說明書將純化的細(xì)菌，加到生化試劑鑒定管內(nèi)，進(jìn)行培養(yǎng)與鑒定。

1.6 細(xì)菌致病性試驗(yàn)

將10只雛雞分成2組，每組5只，第1組腹腔注射致病性大腸桿菌0.5mL（108CFU/mL），第2組為空白對照組腹腔注射等量的無菌的生理鹽水，觀察7d，記錄每組的發(fā)病和死亡數(shù)據(jù)并進(jìn)行鑒定病原菌。

1.7 藥敏試驗(yàn)

采用K-B藥敏紙片法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，參照CLSI的標(biāo)準(zhǔn)判斷耐藥（R）、敏感（S）或中介（I）進(jìn)行結(jié)果判斷藥敏試驗(yàn)結(jié)果。將菌液均勻的涂布麥康凱瓊脂培養(yǎng)基表，并無菌粘貼藥敏紙片，置37℃恒溫箱培養(yǎng)12～18h。測量每種藥物的抑菌圈直徑。

2 結(jié)果

2.1病理剖檢變化

病死孔雀剖檢可見，肝臟腫大、質(zhì)脆，表面纖維素性滲出物，肝周炎； 心包積液、心包炎；脾臟出血腫大，腸道有不同程度出血點(diǎn)、粘膜脫落；盲腸扁桃體出血、腫脹；腸系膜淋巴結(jié)腫大，小腸有出血性腸炎變化。

2.2 細(xì)菌分離鑒定結(jié)果

從病死的孔雀的肝臟、心血組織中分離病原菌，在血液瓊脂平板生長良好，形成灰白色、邊緣光滑、濕潤半透明的菌落；在麥康凱瓊脂平板上長出中等大小，圓形微凸起、表面光滑濕潤紅色菌落；在伊紅美藍(lán)瓊脂長出大小一致、圓形凸起、表面紫黑色攜帶金屬光澤的菌落。

2.3 細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果

顯微鏡下觀察，分離菌可見多數(shù)散在排列、兩端鈍圓，革蘭氏陰性短桿菌。

2.4 生化特性鑒定結(jié)果

分離菌株生化特性，吲哚試驗(yàn)陽性，V-P試驗(yàn)呈陰性；由表1可知，分離菌株符合大腸桿菌的生化特性。與伯杰氏細(xì)菌手冊報(bào)道的一致。

2.5 動(dòng)物致病性試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)組雛雞在攻毒后48h，出現(xiàn)死亡，到攻毒后的72h出現(xiàn)全部死亡，對死亡的雛雞剖檢后，從肝臟中分離到了大腸桿菌；對照組的雛雞未明顯的變化，因此，證實(shí)了分離菌株具有致病性。

2.6 藥敏試驗(yàn)

由表2可知，頭孢曲松、恩諾沙星、氟苯尼考、多西環(huán)素、左氧氟沙星5種藥物敏感；對大觀霉素中敏；對阿莫西林、氨芐西林、慶大霉素3種藥物耐藥。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)通過從發(fā)病孔雀的體內(nèi)分離1株病原菌，通過多種方法鑒定，被鑒定為致病性大腸桿菌病。大腸桿菌病是一種條件性疾病、常發(fā)病，該菌其血清型多，不同血清型以及不同地區(qū)的大腸桿菌對藥物敏感性也存在差異性，受地區(qū)性限制，因此難以控制[5]。大腸桿菌易產(chǎn)生耐藥性，通過分析其耐藥性，選擇敏感藥物。本實(shí)驗(yàn)藥敏結(jié)果顯示，分離菌株對頭孢曲松、恩諾沙星、氟苯尼考、多西環(huán)素、左氧氟沙星5種藥物敏感；對大觀霉素中敏；對阿莫西林、氨芐西林、慶大霉素3種藥物耐藥。在治療大腸桿菌病時(shí)，應(yīng)該選擇敏感的藥物進(jìn)行治療，提高治療效果，同時(shí)注意環(huán)境衛(wèi)生消毒和平時(shí)的飼養(yǎng)管理，減少應(yīng)激，減少該病的發(fā)生。

參考文獻(xiàn)

[1]崔煥忠，周佰祥，張輝，等.孔雀致病性大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].中國獸醫(yī)雜志，2011，47（10）：33-34.

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