采用HPLC—ELSD法測(cè)定冠心泰丸中兩種人參皂苷的含量

肇靜靜+李文蘭++尹濤

【摘 要】目的：建立同時(shí)測(cè)定冠心泰丸中兩種人參皂苷（人參皂苷Rg1；人參皂苷Re）的高效液相-蒸發(fā)光散射含量檢測(cè)方法。方法：采用色譜柱YMC-Pack ODS-A （250mmx4.6mm， 5μm），流動(dòng)相乙腈（A）-水（B） 梯度洗脫系統(tǒng)，流速1.0mL /min。結(jié)果：人參皂苷Rg1線性范圍為1.04μg～10.40μg，平均回收率為97.9 %，RSD值為2.0%；人參皂苷Re線性范圍為1.02μg～10.20μg，平均回收率為95.6%，RSD值為1.6%。結(jié)論：HPLC-ELSD法測(cè)定結(jié)果精密準(zhǔn)確，操作簡(jiǎn)單，適用于冠心泰丸的含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】人參皂苷Rg1 人參皂苷Re HPLC-ELSD法 含量測(cè)定

冠心泰丸由人參等14味中藥制成，功效為益氣養(yǎng)心、活血通脈，用于胸痹心痛之氣陰兩虛證，臨床上對(duì)冠心病、心絞痛療效確切。原標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)人參皂苷Rg1進(jìn)行了測(cè)定，但所采用的方法為薄層色譜掃描法，操作方法較為繁瑣，干擾較大，重現(xiàn)性較差，給實(shí)際生產(chǎn)檢測(cè)帶來很大不便。人參皂苷含量測(cè)定方法已有很多報(bào)道[1、2、3]。本文采用HPLC-ELSD法，以求更為有效地控制冠心泰丸中人參皂苷的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（Agilent1200 series）；蒸發(fā)光檢測(cè)器（SEDEX LT-85）。

1.2 試藥

人參皂苷Rg1（110703-201128 中國(guó)食品藥品檢定研究院）；人參皂苷Re（110754-201324 中國(guó)食品藥品檢定研究院）；乙腈（色譜純TEDIR）；甲醇（AR）；水（注射用水）；冠心泰丸（哈藥集團(tuán)世一堂制藥廠提供）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

YMC-Pack ODS-A 色譜柱（250mmx4.6mm 5μ）；以乙腈（A）-水（B）為流動(dòng)相，按下表設(shè)定參數(shù)洗脫（見表1）；以蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)。

柱溫：35 ℃；漂移管溫度：40℃；載氣壓力：3.0bar；流動(dòng)相流速：1ml/min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

取對(duì)照品適量，用甲醇溶解，制成人參皂苷Rg1和Re濃度分別為0.2 mg/ml、0.3mg/ml的混合溶液，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

稱取研磨好的冠心泰丸10g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇100ml，稱定重量，靜置16小時(shí)，超聲處理（300W，40kHz）45分鐘，放置至室溫，稱重，若有損失，用甲醇補(bǔ)足。濾過，取續(xù)濾液50ml，水浴揮干，用甲醇溶解殘?jiān)?，制?0ml溶液，搖勻、濾過，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備

照冠心泰丸制法，去除人參，制成制劑，照2.2.2項(xiàng)下方法制成溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

精密稱取兩種人參皂苷（Rg1和Re）對(duì)照品適量，加甲醇溶解，制成每1ml含兩種人參皂苷（Rg1和Re）分別為0.52 mg和0.51mg的混合溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液2.0 μl、4.0 μl、8.0 μl、12μl、16μl、20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，分別以兩種人參皂苷峰面積積分值的對(duì)數(shù)值（Y）和對(duì)照品量（μg）的對(duì)數(shù)值（X）作為縱坐標(biāo)和橫坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：人參皂苷Rg1 Y=1.580X+2.206 r=0.9991（n= 6）。人參皂苷ReY=1.548X+2.252 r=0.9992（n= 6）。試驗(yàn)表明，人參皂苷Rg1的線性范圍為1.04～10.40μg；人參皂苷Re的線性范圍為1.02～10.20μg。

2.4 專屬性考察

吸取2.2項(xiàng)下的溶液各10μl，進(jìn)樣。結(jié)果表明，陰性對(duì)照中各成分對(duì)人參皂苷Rg1和Re的檢出無干擾；供試品中，其它成分吸收峰與人參皂苷Rg1和Re吸收峰均能較好分離。

2.5 重復(fù)性考察

取研磨好的冠心泰丸，重復(fù)測(cè)定6次。結(jié)果表明人參皂苷Rg1的平均含量為0.248mg/g，RSD為1.9% （n=6）；人參皂苷Re的平均含量為0.521mg/g，RSD為1.9% （n=6）。表明該方法重復(fù)性較好。

2.6 準(zhǔn)確度考察

取已知含量的冠心泰丸，研磨細(xì)粉，稱取6份，各約5.0g，置具塞錐形瓶中，加入混合對(duì)照品溶液（含人參皂苷Rg1 0.318 mg/ml，人參皂苷Re 0.550mg/ml）5ml、甲醇溶液95 ml，稱重，放置16小時(shí)，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果，人參皂苷Rg1的平均回收率為97.9%，RSD為2.0% （n=6）；人參皂苷Re的平均回收率為 95.6%，RSD為1.6% （n=6）。

2.7 樣品測(cè)定

選擇3批連續(xù)批號(hào)樣品進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果，兩種人參皂苷（Rg1和Re）的平均含量分別為0.23mg/g和0.50mg/g。

3 結(jié)語

本實(shí)驗(yàn)曾采用203nm波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果基線漂移較嚴(yán)重，影響了兩種人參皂苷的有效檢出，而采用蒸發(fā)光檢測(cè)能很好的解決基線漂移的問題。

原標(biāo)準(zhǔn)中采用薄層掃描檢測(cè)法只測(cè)定了人參皂苷Rg1的含量，且檢出限度較低，干擾較大，重現(xiàn)性差。本試驗(yàn)方法可同時(shí)有效檢測(cè)出兩種人參皂苷的含量，重現(xiàn)性好，操作簡(jiǎn)便，可用于冠心泰丸的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)：

[1]劉高峰，顧鳳云，徐凱建，等.薄層掃描法測(cè)定肝素寧膠囊人參皂苷 Rg1的含量[J].中國(guó)中藥雜志，1996，21（9）：542-543.

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[3]閆天午，宋成吉，杜秀娟.人參首烏精中人參皂苷含量測(cè)定[J].中成藥，1993，15（11）：14 -15.