中藥血清藥物化學(xué)研究進(jìn)展

馬飛祥　薛培鳳　王媛媛　王怡諾　薛淑媛??

[摘要] 中藥血清藥物化學(xué)是通過口服給藥后，對(duì)血中移行成分進(jìn)行鑒定分析，從而快速篩選藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及揭示復(fù)方配伍規(guī)律的有效方法。在近20年的發(fā)展中，得到了眾多學(xué)者的認(rèn)可及普遍應(yīng)用。隨著血清藥物化學(xué)和血清藥理學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)、代謝組學(xué)、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、系統(tǒng)生物學(xué)等學(xué)科的交叉融合，其在溝通藥物體內(nèi)外變化、藥物之間的相互作用、藥物與機(jī)體之間的相互作用等方面體現(xiàn)出了較強(qiáng)的優(yōu)越性，契合了中藥配伍使用、多成分、多靶點(diǎn)、多種作用機(jī)制的復(fù)雜性。該文通過查閱2013—2016年CNKI Scholar 和 Pubmed 2個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)中與中藥血清藥物化學(xué)相關(guān)的文獻(xiàn)，對(duì)有關(guān)的研究成果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，并對(duì)血清藥物化學(xué)研究中供試樣品制備、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇、給藥方案確定、取血方式和時(shí)間、血樣制備和處理、血中移行成分分析等關(guān)鍵技術(shù)難題及多種解決方法進(jìn)行了經(jīng)驗(yàn)性歸納，同時(shí)，展望了中藥血清藥物化學(xué)的拓展及綜合應(yīng)用，以期為該方法在中醫(yī)藥研究中更好的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

[關(guān)鍵詞] 血清藥物化學(xué)； 血中移行成分； 藥效物質(zhì)基礎(chǔ)； 中藥復(fù)方

Research progress of serum pharmacochemistry of traditional Chinese medicine

MA Feixiang， XUE Peifeng*， WANG Yuanyuan， WANG Yinuo， XUE Shuyuan

（College of Pharmacy， Inner Mongolia Medical University， Hohhot 010110， China）

[Abstract] Serum pharmacochemistry of traditional Chinese medicine（TCM） is an effective method to rapidly screen the effective substances and reveal the compatibility law of compound by identification and analysis of constituents migrating to blood after oral administration. In the last two decades， it has been universally accepted and widely applied in the field. With the crossfusion with other disciplines， such as serum pharmacology， pharmacokinetics， metabolomics， network pharmacology and systems biology， serum pharmacochemistry shows comprehensive superiority in explaining drug changes in vivo and in vitro， interactions between drugs， interactions between drug and body， which coincides with the complexity of TCM compatibility， multicomponents， multitargets and multimechanisms. Based on the references related with the serum pharmacochemistry from CNKI scholar and Pubmed in 2013—2016， the research results of serum pharmacochemistry were statistically analyzed， and the key technical problems during the study of serum pharmacochemistry， for example， preparation of test sample， selection of experimental animal， determination of drug delivery scheme， method and time of the adoption blood， preparation and pretreatment of blood sample， as well as analysis of constituents migrating to blood， and the solving ways were empirically introduced. In addition， the development and comprehensive application of serum pharmacochemistry in TCM were summarized in this paper， hoping to lay a foundation for the further application of this method in TCM research.

[Key words] serum pharmacochemistry； constituents migrating to blood； effective substances； Chinese medicine compound

中藥是在中醫(yī)理論指導(dǎo)下用于預(yù)防、治療疾病或調(diào)節(jié)人體機(jī)能的藥物。從古至今，中藥經(jīng)過數(shù)千年的臨床實(shí)踐，療效確切，是維護(hù)我國(guó)人民健康的重要手段，也是中華民族傳統(tǒng)文化的瑰寶。但由于中藥化學(xué)成分和人體系統(tǒng)的復(fù)雜性，導(dǎo)致發(fā)現(xiàn)中藥有效成分及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、探索中藥作用機(jī)制和復(fù)方配伍規(guī)律等問題很難闡明，大大阻礙了中藥的科學(xué)應(yīng)用和國(guó)際推廣，使得中藥的發(fā)展面臨困境?；诖?，我國(guó)學(xué)者王喜軍教授經(jīng)過大量實(shí)踐和總結(jié)，于1997年提出了“中藥血清藥物化學(xué)”，即中藥經(jīng)口服給藥后，制得含藥血清，分析鑒定或表征血中移行成分，研究血中各個(gè)成分體內(nèi)的變化過程，揭示藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，解析方劑配伍規(guī)律等問題的研究方法[1]。本文作者就中藥血清藥物化學(xué)在近年中的發(fā)展進(jìn)行回顧，綜述2013—2016年相關(guān)的研究成果及技術(shù)操作經(jīng)驗(yàn)，展望中藥血清藥物化學(xué)與其他學(xué)科的交叉與應(yīng)用。

1 研究成果及發(fā)展趨勢(shì)

分別在CNKI Scholar 和 Pubmed中檢索血清藥物化學(xué)相關(guān)的中英文文獻(xiàn)。所查范圍為2013年1月至2016年11月，在 CNKI Scholar 以“血清藥物化學(xué)”及“血中移行成分”搜索到相關(guān)中文文獻(xiàn)208篇，Pubmed以“Serum Pharmacochemistry”檢索到149篇文獻(xiàn)。下載后，以是否建立血清指紋圖譜，或是否對(duì)血中移行成分分析及鑒定為標(biāo)準(zhǔn)，使用Endnote 軟件對(duì)其篩選，得到有效期刊論文93篇，相關(guān)學(xué)位論文43篇，綜述21篇，見圖1。

其中，共發(fā)現(xiàn)了959個(gè)血中移行成分，藥物原型入血487個(gè)，鑒定239個(gè)；代謝新物質(zhì)344個(gè)，鑒定49 個(gè)；還有128個(gè)未定性的入血成分，見圖2。

綜上，比較2003—2013年的論文數(shù)量、血中移行成分的分析及鑒別程度，都以成倍的速度發(fā)展，血清藥物化學(xué)相關(guān)研究在近年的研究趨勢(shì)可見一斑[2]。

2 血清藥物化學(xué)中的關(guān)鍵技術(shù)

2.1 供試樣品的制備

供試樣品的制備多分為2種：①按中藥原方配伍，以原劑型制備工藝制備，韓旭陽等[3]按原方湯劑比例將各藥材稱取后，其中4味藥以10倍量水回流提取2次，每次1 h，合并，濃縮；后將剩余2味藥以10倍量95%乙醇提取2次，每次1.5 h，合并，回收至無醇；將上述提取物合并，備用；②制備藥物有效部位，王永林等[4]將杜仲的水提物經(jīng)正丁醇萃取，回收溶劑后水溶，過D101大孔吸附樹脂柱，收集40%乙醇洗脫部分，制得有效部位進(jìn)行血中移行成分研究。

也有學(xué)者以含藥血清中峰數(shù)、峰面積以及主要入血成分含量為指標(biāo)，對(duì)藥物的水提物、醇提物、傳統(tǒng)劑型提取物及現(xiàn)代劑型提取物進(jìn)行了考察，最終選定較好的制備方法[5]。

2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

通常依據(jù)藥物的性質(zhì)和適應(yīng)癥對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種類、性別、生理狀況等進(jìn)行篩選，一般以大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。其中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生理狀況對(duì)研究結(jié)果的影響已引起部分學(xué)者的關(guān)注，Wang等[6]分別用正常大鼠和急性血瘀模型大鼠進(jìn)行大黃和酒炙大黃的血清藥物化學(xué)研究。給予大黃后，發(fā)現(xiàn)蘆薈大黃素O二葡萄糖醛酸苷和大黃素O二葡萄糖醛酸苷僅存在于正常大鼠血清。給予酒炙大黃后得到相同結(jié)果，且在正常大鼠血清中還發(fā)現(xiàn)了大黃酸1O葡糖苷和決明酮8O葡萄糖醛酸苷2個(gè)新的代謝產(chǎn)物。姚紅銳等發(fā)現(xiàn)毛菊苣有效部位在正常大鼠中有6個(gè)入血成分，但在高脂模型大鼠中僅檢測(cè)到1個(gè)微量成分。有學(xué)者認(rèn)為病理模型的含藥血清因更能反映藥物的體內(nèi)變化而更具研究?jī)r(jià)值。但在近年文獻(xiàn)中，絕大多數(shù)學(xué)者選擇正常動(dòng)物作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，可能由于病理?xiàng)l件下機(jī)體免疫能力激活，對(duì)含藥血清較正常狀態(tài)下存在一定“消耗”，導(dǎo)致血中移行成分減少，不便于檢測(cè)分析[7]。

2.3 給藥方案

給藥劑量一般為臨床等效劑量或極限給藥劑量（最大耐受量或半數(shù)致死量），可通過預(yù)實(shí)驗(yàn)研究確定。通常以水溶樣，灌胃給藥，一般大鼠的灌胃量為0.02～0.03 mL·g-1。由于藥物水溶性的問題，可能使給藥體積太大，導(dǎo)致大鼠出現(xiàn)嘔吐不適或檢測(cè)不到血中移行成分的現(xiàn)象。遇此情況，可將藥物通過凍干粉干燥及噴霧干燥技術(shù)進(jìn)行提取物濃縮，其中前者較后者要求更好的水溶性，但其回收率較后者更高。李越峰等[8]將四逆散以芍藥苷等主要化合物含量為指標(biāo)，制成凍干粉后給藥，通過10批樣品建立了血清指紋圖譜，具有良好的特征性和專屬性。此外，也可加入適當(dāng)比例的助溶劑（CMCNa，1，2丙二醇等）制成灌胃液。劉佳麗等[9]對(duì)逍遙散乙醇提取物的石油醚萃取物進(jìn)行血清藥物化學(xué)研究，用1，2丙二醇水制得灌胃液，得到了可喜的研究成果。

不同研究所采用的給藥次數(shù)不盡相同，通常有幾下幾種：①給藥前12 h禁食，自由飲水，早晚各給藥1次，連續(xù)給藥3 d，取血備用，李永軍等利用此法給藥，對(duì)不同的單藥[10]及復(fù)方[11]進(jìn)行了血清藥物化學(xué)研究；②給藥前12 h禁食，自由飲水，一次性給藥適量，取血備用，李廣雷等[12]以此法給藥，對(duì)西洋參枸杞子膠囊進(jìn)行了入血成分的分析；③以原藥治病原則為指導(dǎo)，以人服藥方式及療程為依據(jù)，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物等效實(shí)施，雷志丹等[13]以臨床為指導(dǎo)，每天1次，連續(xù)給藥12 d，研究建立了舒胸片的含藥血清指紋圖譜；④短時(shí)間內(nèi)連續(xù)給藥，Wang等[14]以連續(xù)灌胃3次，每次間隔1 h的形式，對(duì)當(dāng)歸芍藥散進(jìn)行了血清藥物化學(xué)研究，向青等[15]也以此形式對(duì)栝樓桂枝湯的血中移行成分進(jìn)行分析，鑒定了其中16個(gè)成分。

2.4 體內(nèi)樣品的采集、制備、處理

2.4.1 血樣采集 通過以上文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì)，總結(jié)近年血清藥物化學(xué)研究中血樣采集方式，見表1。

肝門靜脈取血 操作較簡(jiǎn)捷，取血量較多，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不能存活，適合單次取血 包含最原始吸收入血成分，也包含體循環(huán)中血液含有的成分，便于血清藥物化學(xué)初探研究

腹主動(dòng)脈取血 操作簡(jiǎn)單，取血量更大，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不能存活，適合單次取血 血中移行成分多為代謝產(chǎn)物，為血清藥物化學(xué)研究后期主選，如血清藥理學(xué)研究、制備血中移行成分等

眼眶后靜脈叢取血 取血量較少，但可多次取血，操作要求較高，檢測(cè)器要求高，一般為L(zhǎng)CMS等 可考察一段時(shí)間內(nèi)，同一實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血中移行成分的變化

尾靜脈取血 與眼眶后靜脈叢取血特點(diǎn)相似，但操作容易，在多次取血方面更易達(dá)到要求

由于不同藥物在機(jī)體內(nèi)的ADME截然不同，需根據(jù)研究目的及預(yù)實(shí)驗(yàn)找到具體的采血時(shí)間。李強(qiáng)等[16]在三黃湯的血清藥物化學(xué)研究中，采用腹主動(dòng)脈取血，于0.08～12 h的12個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行采血，發(fā)現(xiàn)32個(gè)主要入血成分，鑒定和歸屬了其中29個(gè)成分。Zhang等[17]將刺五加灌胃給藥60 min后，肝門靜脈取血，發(fā)現(xiàn)了12個(gè)原型成分，9個(gè)代謝成分，較體外131個(gè)成分得到了快速的篩選。Fan等[18]將通脈養(yǎng)心丸的甲醇提取物灌胃給予大鼠，分別于給藥后1 h和2 h，眼眶后靜脈叢取血，通過UPLCQTOFMS檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)40個(gè)血中移行成分，并對(duì)其中甘草素、異甘草素、甘草酸、甘草次酸的藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了深入研究，證明了方中桂枝對(duì)甘草中這4個(gè)成分的體內(nèi)吸收起到促進(jìn)作用，表明方中甘草桂枝配伍具有增效作用。盧芳等[19]采用尾靜脈取血的方法對(duì)黃連1，1.5，1.75，2，2.25，2.5，3，4 h入血成分進(jìn)行研究，最終發(fā)現(xiàn)在2 h時(shí)血中移行成分的含量達(dá)到峰值。除上述4種常用取血方法外，向文英等[20]采用股動(dòng)脈取血的方法，檢測(cè)到了頭花蓼含藥血清中的18個(gè)血中移行成分。

2.4.2 血樣制備 血樣通常分為血清及血漿。若需制得血漿，則需在取血管內(nèi)加入適量抗凝劑（多為肝素），血清則無要求，見表2。實(shí)際研究中，為提高血中移行成分的檢測(cè)濃度，減弱個(gè)體差異性，增加研究的合理性和操作性，可將同組中不同實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血樣混合處理[2123]。

2.4.3 血樣處理 血樣中含有的多種內(nèi)源性蛋白嚴(yán)重干擾血中移行成分的檢測(cè)分析，故應(yīng)首先去除蛋白質(zhì)。主要方法有溶劑法、酶解法、超濾法、加熱法等。處理后，有時(shí)因其他內(nèi)源性物質(zhì)的干擾或待測(cè)組分的含量較低等原因，導(dǎo)致檢測(cè)時(shí)干擾物質(zhì)過多不便分析或未達(dá)到檢測(cè)限度的現(xiàn)象，可通過分離純化法進(jìn)行選擇性提取及富集予以解決?？偨Y(jié)所查文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)近年除蛋白質(zhì)的方法以溶劑法為主，分離純化法以萃取法為主，見表3。

2.5 血中移行成分分析

血中移行成分的確認(rèn)、鑒定及分析方法，多是建立在不同級(jí)別的LCUV及LCMS技術(shù)上，通過不同的分析方法得出結(jié)果。除直接將體外圖譜、體內(nèi)空白圖譜、對(duì)照品與血樣的圖譜通過保留時(shí)間及一些特征性指標(biāo)核對(duì)外，吳賢波等[32]采用HPLCQTOF Ⅱ技術(shù)對(duì)防風(fēng)的血中移行成分采用有機(jī)溶劑沉淀 加入與水混溶的有機(jī)試劑，一般多為甲醇與乙腈，得到其上清液pH 8.5～9.5，較乙醇、丙酮等試劑影響pH小。血樣與有機(jī)試劑體積比一般為1∶（1～4）時(shí)，可將97%以上的蛋白除去。離心參數(shù)：1萬～14 000 r·min-1離心5～10 min[2425]

強(qiáng)酸溶液沉淀 加入強(qiáng)酸，例如不同百分比的三氯乙酸、高氯酸等，pH 0～4.0，遇酸分解的含藥血樣不易使用本方法。血樣與強(qiáng)酸溶劑體積比一般為1∶0.5左右時(shí)，可將90%以上的蛋白除去。離心參數(shù)：1萬 r·min-1離心1～5 min[2627]

液液萃?。↙LE） 通過待測(cè)組分與干擾物質(zhì)的油水分配系數(shù)不同達(dá)到分離。常用溶劑：乙酸乙酯、正丁醇等。體積比多為1∶（1～2）；操作簡(jiǎn)單，選擇性強(qiáng)。但易出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，可加適量中性鹽減少此現(xiàn)象。多液液平衡后，離心制得。離心參數(shù)：1萬r·min-1左右離心5 min[2829]

固相萃?。⊿PE） 根據(jù)待測(cè)組分的性質(zhì)，選擇不同分離原理的小柱填料，通過改變流動(dòng)相，使藥物與內(nèi)源性物質(zhì)在小柱的保留時(shí)間不同，選擇性收集，達(dá)到分離。一般的操作流程：活化—加樣—沖洗—收集。因現(xiàn)使用的填料多為親脂性鍵合硅膠，則一般以甲醇潤(rùn)洗后，應(yīng)用水或適當(dāng)緩沖液沖洗小柱，保證回收率。加樣體積大多為固定相質(zhì)量的1%～3%，體積最多不可超過2 mL，流速1～2 mL·min-1，樣品溶劑不能過強(qiáng)，以防出現(xiàn)“穿漏現(xiàn)象”，降低回收率。沖洗及收集時(shí)的溶劑體積為每100 mg固定相0.5～0.8 mL，其特點(diǎn)是回收率、重現(xiàn)性較好；可避免乳化現(xiàn)象等，但也因價(jià)格昂貴，技術(shù)要求高，使得現(xiàn)使用學(xué)者較少[3031]

主成分分析法（PCA）進(jìn)行比對(duì)鑒別，分別通過Plant Medica，Chem SPIDE，MASSUNION檢索出防風(fēng)的原型化合物，建立其化學(xué)成分的鑒別數(shù)據(jù)庫(kù)，再與實(shí)驗(yàn)獲得的數(shù)據(jù)全部通過Mzmine 2.9軟件進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，后再以PCA分析得出5種原型成分，鑒別4種；代謝物22種，鑒定2種。董巍等[30]利用UHPLCQTOFMS對(duì)蜜炙對(duì)葉百部的血樣進(jìn)行采集后，采用MassLynx V4.1工作站進(jìn)行掃描，后采用Waters代謝物鑒定軟件MetaboLynx與建立好的數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行核對(duì)，表征了40個(gè)血中移行成分。Wang等[33]建立了一種以UPLCESIQTOFMS數(shù)據(jù)收集，MassLynx軟件建立表征成分，后經(jīng)PCA和正交偏最小二乘判別式法（OPLSDA）綜合分析的方法，快速篩選鑒別目標(biāo)化合物。并成功的應(yīng)用到了關(guān)黃柏的血清藥物化學(xué)研究中，從46個(gè)質(zhì)譜峰中，快速準(zhǔn)確的確定了其中12個(gè)原型入血成分，12個(gè)代謝成分。Yan等[34]綜合利用背景減法和多數(shù)據(jù)處理方法（BsMpa）快速的歸屬及鑒定了雙黃連方劑入血后的39個(gè)原型成分和29個(gè)代謝產(chǎn)物。

3 血清藥物化學(xué)的方法拓展

3.1 血清藥物化學(xué)血清藥理學(xué)方法

近年，血清藥物化學(xué)和血清藥理學(xué)方法在中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制研究中得到了廣泛的認(rèn)可及應(yīng)用，但二者聯(lián)用的報(bào)道甚少。唐峰等[35]利用上述結(jié)合方法探討了麻黃附子細(xì)辛湯抗炎和免疫抑制的物質(zhì)基礎(chǔ)，首先制備15，30 min，1，2，4，6 h各時(shí)間點(diǎn)含藥血清，通過LCMS進(jìn)行血中移行成分分析，與此同時(shí)利用ELISA法及MTT法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)含藥血清的相關(guān)藥理活性，最后利用逐步回歸法對(duì)各成分與藥理指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析，得出甲基偽麻黃堿、苯甲酰次烏頭原堿等7個(gè)原型成分及1個(gè)未知代謝成分與其抗炎和免疫抑制的藥理作用密切相關(guān)。劉菊燕等[36]也采用了類似方法，以茅蒼術(shù)提取物的含藥血清為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，推測(cè)11個(gè)入血成分均可能為該藥保護(hù)心肌細(xì)胞氧化損傷的物質(zhì)基礎(chǔ)。此類方法的特點(diǎn)在于均以含藥血清為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，確定其藥效活性的同時(shí)初步判斷其有效成分，將體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)結(jié)合，操作過程中存在相互穿插，大大減少了實(shí)驗(yàn)周期，是一種有效、快速、準(zhǔn)確的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)尋找途徑。

3.2 血清藥物化學(xué)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)

2007年，Andrew首次將網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)定義為一種基于系統(tǒng)生物學(xué)、多向藥理學(xué)及計(jì)算機(jī)輔助技術(shù)，將藥物作用網(wǎng)絡(luò)與機(jī)體生物網(wǎng)絡(luò)整合，分析藥物在網(wǎng)絡(luò)中與特定節(jié)點(diǎn)或模塊的相互作用關(guān)系，揭示藥物與機(jī)體之間相互作用的學(xué)科[37]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的“整體探究、系統(tǒng)調(diào)節(jié)”與中藥“多成分、多靶點(diǎn)”的研究?jī)?nèi)容相呼應(yīng)，在尋找中藥作用靶點(diǎn)及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，闡述作用機(jī)制、配伍規(guī)律等方面體現(xiàn)出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。血清藥物化學(xué)在中藥中的應(yīng)用主要集中在快速篩選藥效物質(zhì)基礎(chǔ)上，但對(duì)探尋作用機(jī)制需另尋他法。唐峰等[38]將血清藥物化學(xué)血清藥理學(xué)與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)進(jìn)行結(jié)合，首先利用血清藥理學(xué)方法對(duì)含藥血清進(jìn)行藥效學(xué)研究，同時(shí)對(duì)其血中移行成分進(jìn)行鑒定分析，最后利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)靶點(diǎn)，初步揭示了細(xì)辛揮發(fā)油抗過敏性鼻炎的有效成分及其潛在靶點(diǎn)。周文斌等[39]通過血清藥物化學(xué)研究確定了土家藥天珠散的5個(gè)血中移行成分，并使用Discovery Studio3.5軟件進(jìn)行反向找靶，獲得Fit value≥0.6的藥效團(tuán)模型861個(gè)，后通過KEGG，BIOCARTA 2 個(gè) pathway數(shù)據(jù)庫(kù)篩選到9個(gè)與血管性癡呆有關(guān)的信號(hào)通路。Zheng 等[40]將血清藥物化學(xué)與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)等多學(xué)科相結(jié)合，建立有效組分（血中移行成分）靶蛋白網(wǎng)絡(luò)，經(jīng)代謝組學(xué)篩選生物標(biāo)志物，進(jìn)行通路富集分析，最終建立“基因蛋白質(zhì)代謝物”層次的分子網(wǎng)絡(luò)，通過組織病理、免疫組化技術(shù)相互驗(yàn)證，揭示了蒽醌類化合物（大黃酸和大黃素）和黃烷醇類化合物（兒茶素和表兒茶素）是大黃抗腎間質(zhì)纖維化的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，其作用機(jī)制是通過調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的異常積累，控制炎癥因子的釋放，保持凝血和纖維蛋白溶解平衡的協(xié)同作用發(fā)揮療效。

3.3 中醫(yī)方證代謝組學(xué)

王喜軍教授繼1997年血清藥物化學(xué)概念提出后，根據(jù)近20年的研究實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，于2012年提出了中醫(yī)方證代謝組學(xué)，即利用多維聯(lián)用分析技術(shù)，以體液中小分子代謝物為取向探尋中醫(yī)證候?qū)嵸|(zhì)，表征證候的代謝輪廓及生物標(biāo)志物；以生物標(biāo)志物橋接動(dòng)物模型和證候，建立反映證候本質(zhì)的動(dòng)物模型；以方劑對(duì)證候/模型代謝輪廓及代謝標(biāo)志物的影響評(píng)價(jià)方劑整體效應(yīng)，同時(shí)采用一體化研究模式，在有效狀態(tài)下，分析口服方劑后體內(nèi)直接作用物質(zhì)及其與代謝標(biāo)志物的關(guān)系，揭示方劑的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，闡明方劑有效性及配伍規(guī)律[41]。其特點(diǎn)在于將血清藥物化學(xué)與代謝組學(xué)整合，實(shí)現(xiàn)系統(tǒng)生物學(xué)與中醫(yī)藥整體觀念相呼應(yīng)，以“體內(nèi)內(nèi)源性物質(zhì)藥物外源性物質(zhì)體內(nèi)代謝物質(zhì)”為媒介，并通過PCMS分析方法，確定藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，得出物質(zhì)之間的變化與關(guān)聯(lián)，即“中醫(yī)證候生物標(biāo)志物方劑體內(nèi)直接作用物質(zhì)藥效生物標(biāo)志物”，構(gòu)建“中醫(yī)方劑證/病整體效應(yīng)調(diào)控”網(wǎng)絡(luò)，對(duì)中醫(yī)藥中的“證侯和方劑”進(jìn)行更深層次的闡明。王喜軍課題組運(yùn)用中藥方證組學(xué)對(duì)茵陳蒿[42]、金匱腎氣丸[43]等多個(gè)不同的復(fù)方及對(duì)應(yīng)的病證進(jìn)行了相關(guān)研究，并在SCI源雜志發(fā)表論文80余篇，取得了可喜的成果[44]。

4 結(jié)語

中藥血清藥物化學(xué)結(jié)合多種系統(tǒng)生物學(xué)方法，可構(gòu)建體內(nèi)與體外、病證與療效的橋梁。通過HPLC圖譜表征中藥成分體內(nèi)外動(dòng)態(tài)變化，分析鑒定血中移行成分，并歸屬有效成分，不僅有利于中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的快速篩選與復(fù)方配伍規(guī)律的探索，也可通過血中移行成分性質(zhì)及含量的變化，為中藥的質(zhì)量控制[4546]、品種鑒定[47]、炮制機(jī)制研究[6，30，48]等開辟出更廣闊的研究思路，從而豐富中醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)化、現(xiàn)代化、國(guó)際化研究方法?？梢灶A(yù)見，隨著血清藥物化學(xué)和其他學(xué)科的融合，其在中藥研究中必將發(fā)揮越來越重要的作用。

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[責(zé)任編輯 曹陽陽]