BCR/ABL陰性的骨髓增殖性疾病患者JAK2V617F點(diǎn)突變及凝血功能的研究

陳幼芬，徐琴蕊

(余姚市人民醫(yī)院 腫瘤內(nèi)科，浙江 余姚 315400)

健康科學(xué)臨床研究

BCR/ABL陰性的骨髓增殖性疾病患者JAK2V617F點(diǎn)突變及凝血功能的研究

陳幼芬，徐琴蕊

(余姚市人民醫(yī)院 腫瘤內(nèi)科，浙江 余姚 315400)

目的 探討B(tài)CR/ABL陰性的骨髓增殖性疾病(Myeloproliferative disorders，MPD)患者的JAK2V617F點(diǎn)突變的突變率，分析其與患者的血液學(xué)特征、凝血功能的關(guān)系。方法 回顧性分析68例BCR/ABL陰性的MPD患者的臨床資料，統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)及JAK2V617F點(diǎn)突變情況。結(jié)果 68例MPD患者中，檢出JAK2V617F突變45例，突變率66.18%；其中原發(fā)性骨髓纖維化(Primary myelofibrosis，PMF)2例，原發(fā)性血小板增多癥(Primary thrombocytosis，PT)16例，真性紅細(xì)胞增多癥(Polycythemia vera，PV)27例。與健康對(duì)照組比較，不管是否JAK2V617F點(diǎn)突變，MPD患者中PV患者的WBC、TT、Hb及D-D、Fbg均顯著升高(均P<0.05)；PV患者中JAK2V617F點(diǎn)突變陽(yáng)性患者的WBC、TT、Hb及D-D、Fbg水平明顯高于陰性患者(P<0.05)，PLT、APTT及PT差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 MPD患者發(fā)生JAK2V617F基因突變率較高，且陽(yáng)性突變患者凝血功能及血細(xì)胞計(jì)數(shù)存在明顯異常。

BCR/ABL陰性；骨髓增殖性疾?。籎AK2V617F基因點(diǎn)突變；凝血功能

骨髓增殖性疾病(Myeloproliferative disorders，MPD)是一種以骨髓中一系或多系髓系細(xì)胞增殖，外周血成熟或幼稚細(xì)胞增多為主要特征的造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病。融合基因BCR-ABL陰性的MPD有真性紅細(xì)胞增多癥(Polycythemia vera，PV)、原發(fā)性血小板增多癥(Primary thrombocytosis，PT)和原發(fā)性骨髓纖維化(Primary myelofibrosis，PMF)，其臨床表現(xiàn)為血細(xì)胞增殖，基礎(chǔ)研究和診斷、治療的進(jìn)展相對(duì)緩慢。近年來MPD發(fā)病機(jī)制中最主要的進(jìn)展就是JAK2V617F突變的發(fā)現(xiàn)。2008年WHO將有無存在JAK2V617F基因列為MPD主要診斷指標(biāo)[1]，該基因突變對(duì)BCR/ABL陰性的MPD的發(fā)病機(jī)制起著舉足輕重的作用[2-3]，JAK2V617F點(diǎn)突變的檢測(cè)為BCR/ABL陰性的MPD的診斷提供了新的手段，也為研究靶向藥物展現(xiàn)光明前景。

部分研究發(fā)現(xiàn)攜帶JAK2V617F突變的MPD患者具有更高的骨髓纖維化發(fā)生率或出血和血栓形成傾向[4]。血栓栓塞是MPD患者的嚴(yán)重并發(fā)癥，也是致死的主要原因。本研究回顧性分析68例MPD患者的臨床資料，分析各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)與JAK2V617F基因突變及凝血功能，以期為MPD的診斷及凝血狀態(tài)、發(fā)生血栓的評(píng)估提供重要依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年3月-2016年7月我院初診MPD患者68例(MPD組)，MPD(PV、PT、PMF)診斷均符合2008年WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，血管性病變臨床癥狀表現(xiàn)：短暫性腦缺血、出血，靜脈、下肢動(dòng)脈血栓形成及腦梗死等。其中男36例，女32例，年齡31～80歲，平均44.56±12.34歲；PV患者34例，PT30例，PMF 4例；血管疾病合并MPD患者28例，其中PT12例、PV16例。選擇本院同期體檢人員28例為健康對(duì)照組，其中男15例，女13例，年齡22～79歲，平均38.89±8.97歲，均無服用相關(guān)藥物史，無凝血性疾病、高血壓及糖尿病史?；颊咧橥猓狙芯客ㄟ^我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法 收集所有MPD患者與健康對(duì)照組的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)，具體有：白細(xì)胞(leukocyte,white blood cell,WBC)、血紅蛋白(hemoglobin,Hb)、血小板計(jì)數(shù)(Platelet count,PLT)、血漿凝血酶時(shí)間(TT)、凝血酶原時(shí)間(prothrombin time,PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(Activated partial thromboplastin time,APTT)、纖維蛋白原(Fibrinogen,Fbg)、D-二聚體(D-Dimer,D-D)。所有患者采外周血5mL，采用等位基因特異性聚合酶鏈反應(yīng)(AS-PCR)技術(shù)，對(duì)照BIOMIGA 血液基因組DNA提取試劑盒說明書抽取基因組DNA(濃度100～200g/mL)，檢測(cè)AK2V617F突變情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理數(shù)據(jù)；計(jì)量資料用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)；P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 患者JAK2V617F突變率 初診MPD患者68例中，檢測(cè)出存在JAK2V617F突變45例,突變率66.18%；4例PMF患者中有2例JAK2V617F突變陽(yáng)性，突變率50%(2/4)；30例PT患者中有16例JAK2V617F突變陽(yáng)性，突變率53.33%；34例PV患者中有27例JAK2V617F突變陽(yáng)性，突變率79.41%。

2.2 MPD患者與健康對(duì)照組各指標(biāo)對(duì)比 與健康對(duì)照組比較，不管是否JAK2V617F點(diǎn)突變，MPD患者的WBC、TT、Hb及D-D、Fbg均顯著升高(均P<0.05)；PV患者中JAK2V617F點(diǎn)突變陽(yáng)性與陰性患者的WBC、TT、Hb及D-D、Fbg差異顯著(P<0.05)，PLT、APTT及PT差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；各組的情況詳見表1。

2.3 血管事件合并MPD患者的血細(xì)胞數(shù)量對(duì)比 MPD患者中共有28例患有血管性病變，其中腦血栓的患者15例，腦出血的患者13例；JAK2突變陰性6例，JAK2突變陽(yáng)性22例，JAK2陽(yáng)性患者的PLT、WBC計(jì)數(shù)均顯著高于陰性患者(P<0.05)；詳見表2。

2.4 陽(yáng)性突變的血管病變患者疾病情況 血管事件合并MPD的22例陽(yáng)性突變患者中，PT患者9例(75.00%)，PV患者13例(81.25%)，有血管性病變病史(在患者住院前半年發(fā)生過血管性病變的患者)者6例(85.71%)，均顯著高于JAK2陰性突變的患者 (P<0.05)；詳見表3。

表1 MPD患者與健康對(duì)照組各指標(biāo)比較

注：*與健康對(duì)照組比較，P<0.05；#與組內(nèi)JAK2-比較，P<0.05。

表2 MPD合并血管性疾病患者的血細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)比

表3 血管事件合并MPD患者的點(diǎn) 突變與疾病情況[n(%)]

3 討 論

MPD是一種克隆性的造血干細(xì)胞疾病，具有克隆增殖能力，其臨床表現(xiàn)為異質(zhì)性，髓系細(xì)胞(如粒系、紅系、巨核系)過度增殖，但無成熟分化障礙。MPD患者各亞型幾乎都會(huì)出現(xiàn)血小板、白細(xì)胞及巨核細(xì)胞增多，可轉(zhuǎn)化為急性白血病或骨髓纖維化，可同時(shí)伴隨如深靜脈血栓等并發(fā)癥。國(guó)外有研究報(bào)道[6]，MPD患者存在獲得性高致病性基因突變：即AK2V617F 發(fā)生于JAK2 基因12 號(hào)外顯子第1 894 位堿基，其導(dǎo)致JAK/STAT信號(hào)通路異常激活，引起一系列細(xì)胞生存因子過度產(chǎn)生導(dǎo)致引發(fā)疾病。本研究中檢出存在JAK2V617F基因突變患者66.18%(45/68)，與相關(guān)研究結(jié)果符合[7]。

MPD患者就診及致死的重要原因之一是血栓形成。其發(fā)病機(jī)制包括克隆血細(xì)胞異常及正常血管細(xì)胞異常。除去年齡、吸煙、糖尿病、高血脂癥、高血壓及血栓形成史等形成血栓的高危因素，血小板，紅、白細(xì)胞異常也參與形成血栓的過程并發(fā)揮重要作用。多項(xiàng)研究結(jié)果已確定，白細(xì)胞數(shù)量的增加是PT及PV患者血栓形成的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，其可能與粒細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和血小板之間的相互作用機(jī)制有關(guān)[8-9]。白細(xì)胞促進(jìn)動(dòng)脈粥樣化斑塊炎癥過程也增加了血管疾病的發(fā)病率。在PMF患者中白細(xì)胞計(jì)數(shù)大于15×109/L時(shí)，則形成血栓風(fēng)險(xiǎn)呈上升趨勢(shì)。本研究結(jié)果揭示，無論有無基因突變PV、PT及PMF患者，白細(xì)胞數(shù)量均明顯高于健康對(duì)照組。PV患者紅細(xì)胞增多會(huì)導(dǎo)致血液粘稠引起血栓形成，腦部血管中尤為明顯。本文中也發(fā)現(xiàn)，無論有無JAK2基因突變的PV患者，紅細(xì)胞數(shù)量均高于健康對(duì)照組。MPD患者可因克隆血細(xì)胞活化，促凝微粒循環(huán)水平升高及凝血酶產(chǎn)生不斷增加，出現(xiàn)高凝血狀態(tài)。JAK2突變陽(yáng)性患者的凝血素、組織因子、V因子與游離PS抑制劑顯著降低，若等位基因負(fù)荷>50%的患者，由于產(chǎn)生較多的凝血酶導(dǎo)致凝血系統(tǒng)過度激活，參與血栓形成。有報(bào)道顯示[10]，JAK2突變與血栓形成關(guān)系密切，其機(jī)制包括：血小板中C-MPL信號(hào)表達(dá)改變導(dǎo)致高反應(yīng)性；修飾粘附分子過度產(chǎn)生引起紅細(xì)胞粘附性增強(qiáng)形成血栓；JAK2突變活化MAPK通路和P13K參與單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞TF表達(dá)，結(jié)果JAK2V617F突變陽(yáng)性患者動(dòng)、靜脈血栓風(fēng)險(xiǎn)明顯升高，且血栓風(fēng)險(xiǎn)與等位基因負(fù)荷出現(xiàn)正相關(guān)性。

本文通過68例MPD患者對(duì)照28例健康患者進(jìn)行研究，分別檢測(cè)常規(guī)凝血功能和外周血細(xì)胞。本研究分析結(jié)果揭示無論有無JAK2V617F突變發(fā)生，外周血細(xì)胞數(shù)量均出現(xiàn)異常，伴隨纖溶激活、凝血亢進(jìn)及抗凝血抑制等凝血功能出現(xiàn)病變。對(duì)比有無突變患者后發(fā)現(xiàn)，陽(yáng)性患者改變更為明顯。在28例MPD合并血管疾病患者中突變陽(yáng)性者比陰性者血栓危險(xiǎn)因素明顯升高，血管疾病發(fā)病率也隨之升高。

綜上所述，MPD患者出現(xiàn)凝血功能、外周血細(xì)胞數(shù)量異常，與高凝血狀態(tài)是相互的，是血栓形成的主要原因之一。形成血栓的危險(xiǎn)性與JAK2突變及高突變等位基因負(fù)荷密切相關(guān)。初診為MPD患者通過檢測(cè)常規(guī)凝血指標(biāo)、JAK2V617F基因突變及血細(xì)胞計(jì)數(shù)可對(duì)患者凝血功能進(jìn)行初步評(píng)估，預(yù)防和減少血栓并發(fā)癥的發(fā)生。

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Point mutation and coagulation function of JAK2V617F in BCR/ABL-negative myeloproliferative disorders

CHEN You-fen，XU Qin-rui

(Departmentofinternaloncology，People’shospitalofYuyao，Yuyao315400，China)

Objective To investigate the mutation rate of JAK2V617F point mutation in patients with BCR/ABL negative myeloproliferative disorders and to examine the relationship between the mutation and the characteristics of blood coagulation and blood coagulation. Method Firstly, The clinical data of 68 patients with BCR/ABL negative myeloproliferative disorders (MPD) were retrospectively analyzed. The detection indexes and JAK2V617F point mutations were then analyzed. Findings In the 68 patients with MPD, 45 cases were detected of JAK2V617F mutation. The mutation rate was 66.18%, which included 2 cases of primary myelofibrosis (PMF), 16 cases of primary thrombocytosis (PT), and 27 cases of polycythemia vera. Compared with the control gorup, regardless of whether the point mutation of JAK2V617F, the level of TT, WBC D-D, Hb and Fbg of the PV groups significantly increased (P<0.05). JAK2V617F mutation negative patients was significantly higher than that of patients with positive WBC, TT, D-D, Hb and Fbg levels in patients with PV (P<0.05). No statistically significant differences were found in PLT, APTT and PT (P>0.05). Conclusion The mutation rate of JAK2V617F gene in patients with MPD is higher and the coagulation function and blood cell count of patients with positive mutations are obviously abnormal.

BCR/ABL negative; Myeloproliferative disorders; JAK2V617F gene point mutation; coagulation

2016-09-22

陳幼芬 (1974-)，女， 浙江余姚人，本科，副主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1674-6449.2017.02.009

R551.31

A

1674-6449(2017)02-0147-03