• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    全自動智能染色機對臨床微生物標(biāo)本染色性能的評估

    2017-05-15 03:36:17李穎陳欣欣趙穎劉亞麗王賀張小江楊啟文徐英春
    中國防癆雜志 2017年3期
    關(guān)鍵詞:染色機抗酸革蘭

    李穎 陳欣欣 趙穎 劉亞麗 王賀 張小江 楊啟文 徐英春

    ?

    ·論著·

    全自動智能染色機對臨床微生物標(biāo)本染色性能的評估

    李穎 陳欣欣 趙穎 劉亞麗 王賀 張小江 楊啟文 徐英春

    目的 評估全自動智能染色機在臨床微生物標(biāo)本革蘭染色、萋-尼抗酸染色和熒光抗酸染色方面的染色性能。方法 收集不同類型臨床微生物標(biāo)本103份,依據(jù)不同的染色需求予以革蘭染色、萋-尼抗酸染色和熒光抗酸染色,同時進行手工法和全自動智能染色機染色操作,以手工法染色結(jié)果為參照,從染色結(jié)果一致率、染色效率、易操作性及安全性等方面評估全自動智能染色機的染色性能。結(jié)果 全自動智能染色機在不同類型臨床微生物標(biāo)本染色方面總體效果好,其對臨床微生物標(biāo)本的革蘭染色[100% (58/58)]、萋-尼抗酸染色[100% (45/45)]和熒光抗酸染色[100% (45/45)]效果與手工法染色結(jié)果一致,且全自動智能染色機較手工染色法具有高通量、省時省力、易操作、穩(wěn)定性好、無污染等優(yōu)點。結(jié)論 全自動智能染色機對臨床微生物標(biāo)本具有良好的染色性能。

    臨床實驗室技術(shù); 染色與標(biāo)記; 分枝桿菌屬; 對比研究

    近年來,醫(yī)學(xué)微生物領(lǐng)域發(fā)生著巨大的變革,許多傳統(tǒng)微生物檢測技術(shù)已逐漸被簡便、快捷的新技術(shù)與自動化機器取代,如法國梅里埃公司生產(chǎn)的Vitek 2 compact和美國BD公司生產(chǎn)的Phoenix 100全自動微生物鑒定及藥物敏感性分析系統(tǒng)基本取代了傳統(tǒng)的微生物手工生化鑒定,全自動血培養(yǎng)儀、飛行時間質(zhì)譜等技術(shù)也正在微生物檢測與鑒定領(lǐng)域大展身手[1-3]。臨床微生物標(biāo)本直接染色是微生物檢驗中最基本且重要的環(huán)節(jié)。通過染色可以根據(jù)菌體的著色性、有無特殊結(jié)構(gòu)、排列分布方式等大致獲得標(biāo)本中的菌體類型和荷菌量等相關(guān)信息,對于輔助臨床診斷及指導(dǎo)經(jīng)驗性用藥具有重要意義。臨床上常用的細(xì)菌染色方法有革蘭染色,萋-尼抗酸染色和熒光抗酸染色等方法;其中,革蘭染色應(yīng)用最多,萋-尼抗酸染色法和熒光抗酸染色法則主要應(yīng)用于分枝桿菌等某些不易著色病原體[4-5]。目前,國內(nèi)大多數(shù)醫(yī)院對細(xì)菌染色仍然采用傳統(tǒng)的手工染色法,該方法需要連續(xù)的多個步驟,包括初染、媒染、脫色、復(fù)染、流水沖洗等,并且每個步驟都有明確規(guī)定的染色時間,超時或染色時間不足將嚴(yán)重影響標(biāo)本的著色效果,繼而干擾閱片人員的判斷。此外,通量低、人力消耗大、穩(wěn)定性差、易污染周邊環(huán)境等也是手工染色法的弊端。自動染色機具有染色程序自動化、高通量、染色效果穩(wěn)定等優(yōu)點,近些年來越來越受到檢驗人員的青睞。筆者擬對韓國Standard公司生產(chǎn)的KS-S100全自動智能染色機在臨床微生物標(biāo)本革蘭染色、萋-尼抗酸染色及熒光抗酸染色方面的染色性能進行檢驗,評估其應(yīng)用價值。

    材料和方法

    一、材料

    1.標(biāo)本收集:按照評估實驗需求,收集2016年3—5月北京協(xié)和醫(yī)院檢驗科微生物室接收的臨床患者送檢標(biāo)本,包括呼吸道標(biāo)本、便標(biāo)本、拭子標(biāo)本、無菌體液標(biāo)本等。其中,對于革蘭染色,共收集43份臨床送檢標(biāo)本,另收集臨床分離菌株15株。對于萋-尼抗酸染色及熒光抗酸染色法,共收集分枝桿菌陽性痰標(biāo)本14份,其中菌量+~++痰標(biāo)本10份,菌量+++~++++痰標(biāo)本4份;另收集分枝桿菌陰性痰標(biāo)本31份。

    2.試劑和機器:手工用革蘭染色液、萋-尼抗酸染色液、熒光金胺O染色液購自珠海貝索生物技術(shù)有限公司;KS-S100全自動染色機用革蘭染色液、萋-尼抗酸染色液、熒光金胺O染色液均采用儀器配套染色液。KS-S100全自動染色機由北京東方日創(chuàng)生物科技有限公司提供用于評估實驗;普通光學(xué)顯微鏡購自德國徠卡顯微系統(tǒng)有限公司,熒光顯微鏡購自奧林巴斯(中國)有限公司。

    二、方法

    1.標(biāo)本涂片:痰標(biāo)本、便標(biāo)本直接用無菌棉簽取適量涂玻片,干燥固定。胸腹腔積液標(biāo)本、腦脊液標(biāo)本采用細(xì)胞離心涂片機離心制片,干燥固定。純培養(yǎng)菌落涂片取適量菌體,用1滴生理鹽水研磨涂布于玻片上,干燥固定。所有標(biāo)本均制片≥2張用于手工法和KS-S100儀器法兩種染色手段的平行處理。制好的涂片在生物安全柜中紫外線照射1 h。

    2.染色:手工法革蘭染色、萋-尼抗酸染色、熒光抗酸染色操作流程完全參照標(biāo)準(zhǔn)程序進行[5-6]。KS-S100全自動染色機革蘭染色、萋尼法抗酸染色、熒光法抗酸染色操作完全按照廠家指導(dǎo)說明進行。

    3.鏡檢及結(jié)果判定:革蘭染色和萋-尼抗酸染色標(biāo)本在普通光學(xué)顯微鏡下進行觀察。對于革蘭染色,革蘭陽性細(xì)菌呈紫色,革蘭陰性細(xì)菌呈粉紅色,酵母菌呈紫色。對于萋-尼抗酸染色,抗酸陽性細(xì)菌呈粉紅色,抗酸陰性細(xì)菌呈藍色。熒光抗酸染色標(biāo)本在熒光顯微鏡下觀察陽性熒光信號。對于生物標(biāo)本染色,背景細(xì)胞著色清晰、細(xì)菌染色特征典型、染料雜質(zhì)少判斷為染色合格;背景細(xì)胞著色模糊、細(xì)菌染色特征不易辨認(rèn)、染料雜質(zhì)多判斷為染色不合格[7]。以手工法染色結(jié)果作為參考,對于染色結(jié)果不一致的樣本再次以手工法染色進行復(fù)核驗證,計算2種染色方法染色結(jié)果的一致率(染色結(jié)果一致的樣本數(shù)/總樣本數(shù)×100%);并從染色效率、易操作性及安全性等方面進一步評估全自動智能染色機的染色性能。

    結(jié) 果

    一、染色效果

    全自動智能染色機在不同類型臨床微生物標(biāo)本染色方面總體效果好,菌體著色清晰,染色特征易辨認(rèn),無染料雜質(zhì)沉積等情況(圖1~12)。

    二、一致性比較

    1.革蘭染色:全自動智能染色機在不同類型臨床微生物標(biāo)本的革蘭染色方面總體效果好,與手工法革蘭染色結(jié)果一致(表1)。

    2.萋-尼抗酸染色:全自動智能染色機在分枝桿菌萋-尼抗酸染色方面與手工法染色結(jié)果一致(表2)。

    3.熒光抗酸染色:全自動智能染色機在分枝桿菌熒光抗酸染色方面與手工染色的結(jié)果一致(表3)。

    三、染色性能評估

    全自動智能染色機對臨床微生物標(biāo)本的染色效果好,與手工法染色結(jié)果一致。并且,全自動智能染色機在染色效率、易操作性、穩(wěn)定性和安全性等方面均明顯優(yōu)于手工法(表4)。

    表1 全自動智能染色機與手工法染色結(jié)果比對

    續(xù)表1

    圖1 全自動智能染色機對痰標(biāo)本的革蘭染色效果圖,可見革蘭陽性球菌、革蘭陰性桿菌和革蘭陽性桿菌 圖2 全自動智能染色機對血培養(yǎng)陽性液標(biāo)本的革蘭染色效果圖,可見革蘭陰性桿菌 圖3 全自動智能染色機對腹腔積液標(biāo)本的革蘭染色效果圖,可見革蘭陽性球菌和革蘭陰性桿菌 圖4 全自動智能染色機對糞便標(biāo)本的革蘭染色效果圖,可見革蘭陽性球菌和革蘭陰性桿菌,形態(tài)多樣 圖5 全自動智能染色機對革蘭陽性球菌純菌涂片效果(金黃色葡萄球菌) 圖6 全自動智能染色機對革蘭陰性球菌純菌涂片效果(卡他莫拉菌) 圖7 全自動智能染色機對革蘭陽性桿菌純菌涂片效果(紋帶棒桿菌) 圖8 全自動智能染色機對革蘭陰性桿菌純菌涂片效果(大腸埃希菌) 圖9,10 痰標(biāo)本萋尼法抗酸染色(分枝桿菌) 圖11,12 痰標(biāo)本熒光法抗酸染色(分枝桿菌)

    表2 不同分枝桿菌標(biāo)本萋-尼抗酸染色手工法與全自動智能染色機染色法結(jié)果的比較

    表3 不同分枝桿菌標(biāo)本熒光抗酸染色手工法與全自動智能染色機染色結(jié)果的比較

    表4 手工法與全自動智能染色機染色性能的對比

    討 論

    微生物實驗室的傳統(tǒng)細(xì)菌染色技術(shù)是采用手工染色法依照具體步驟逐步完成,整個流程全部依靠手工操作,人員占用力度大;技術(shù)人員的操作手法、熟練程度等的差異易導(dǎo)致染色結(jié)果出現(xiàn)偏差,所以手工法染色結(jié)果重復(fù)性差,不易做到標(biāo)準(zhǔn)化,需要訓(xùn)練有素的技術(shù)人員進行操作[7-8]。染色時間的長短嚴(yán)重影響染色結(jié)果[9],標(biāo)本量過多容易導(dǎo)致每一步驟的操作時間超過規(guī)定的染色時間繼而影響染色效果,這使得手工染色法的染色通量受到一定的限制。此外,傳統(tǒng)手工法染色需要靠近水池進行操作,染液易迸濺到周圍物品上造成污染;同時,手工法染色處于開放環(huán)境中,流水沖洗及吹吸染液過程中易形成氣溶膠危害。

    相比之下,KS-S100全自動染色機無論是在操作簡易程度上,還是染色效率上均較手工染色法具有優(yōu)勢。操作人員只需將制好的待染色玻片放入染色機中,選擇好目標(biāo)程序后即可通過自動化操作完成整個染色過程,人員活動自由,染色結(jié)束后取出已干燥的玻片直接鏡檢即可。KS-S100全自動染色機采用高通量設(shè)計,一個染色流程可處理40張待染色涂片,明顯優(yōu)于手工法染色通量;并且隨著標(biāo)本量的增加,全自動染色系統(tǒng)相比手工染色消耗的時間明顯減少,高通量優(yōu)勢更為明顯。自動染色機對操作人員的占用力度小,技術(shù)員可在儀器染色過程中進行鏡檢閱片等工作,在節(jié)省了操作人員人力消耗的同時,又將鏡檢結(jié)果報告時間提前,對后續(xù)檢驗工作和指導(dǎo)臨床診斷及治療等方面具有重要意義。在當(dāng)前強調(diào)規(guī)范化操作、質(zhì)量控制嚴(yán)格的環(huán)境下,如何做好標(biāo)準(zhǔn)化操作是各級實驗室必須關(guān)注的。KS-S100全自動染色機操作不受人為因素影響,能夠保證染色結(jié)果的穩(wěn)定性,便于染色實驗的規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化管理。此外,KS-S100自動染色機的系統(tǒng)呈封閉狀態(tài),染色過程中產(chǎn)生的所有廢液都可以集中回收,不會造成染液遺灑和噴濺,從而提高了生物安全性及工作環(huán)境的整潔度。

    本研究所涉及的微生物標(biāo)本類型涵蓋了臨床常見的染色檢查樣本及菌株種類,能夠有效地評價全自動智能染色機在臨床微生物檢驗中的應(yīng)用。該染色機在臨床標(biāo)本革蘭染色、萋-尼抗酸染色和熒光抗酸染色方面的染色合格率高,與手工法染色結(jié)果一致,且在染色效率、易操作性、穩(wěn)定性及安全性等方面均較傳統(tǒng)手工染色具有明顯優(yōu)勢。本研究表明,全自動智能染色機在臨床微生物標(biāo)本革蘭染色、萋-尼抗酸染色、熒光抗酸染色方面染色性能良好,在提供高質(zhì)量染色結(jié)果的同時,提高染色效率,減少人力占用,能滿足臨床微生物標(biāo)本染色的需求。

    [1] 王瑤, 徐英春, 謝秀麗, 等. 全自動微生物鑒定藥敏分析儀對臨床相關(guān)細(xì)菌藥敏測定能力的評估. 中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志, 2007, 30(9):1052-1055.

    [2] 趙忠, 楊秀蓮, 張德明. Phoenix-100全自動微生物鑒定/藥敏系統(tǒng)的臨床應(yīng)用. 寧夏醫(yī)學(xué)雜志, 2007, 29(8): 751-752.

    [3] 張麗, 徐英春. MALDI-TOF MS在臨床微生物實驗室的應(yīng)用研究進展. 中國感染與化療雜志, 2013, 13(3): 226-231.

    [4] Popescu A, Doyle RJ. The Gram stain after more than a century. Biotech Histochem, 1996, 71(3): 145-151.

    [5] 張秀明, 蘭海麗, 盧蘭芬. 臨床微生物檢驗質(zhì)量管理與標(biāo)準(zhǔn)操作程序. 北京: 人民軍醫(yī)出版社, 2010: 317-323.

    [6] 中國防癆協(xié)會. 結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗規(guī)程. 中國防癆雜志, 1996,18(1):28-29.

    [7] 黎敏, 張峰領(lǐng), 王浚霽, 等. 全自動革蘭染色儀應(yīng)用效果評價. 重慶醫(yī)學(xué), 2013, 42(36): 4445-4446.

    [8] 黃靜芳. 革蘭染色影響因素的探討. 實用醫(yī)技雜志, 2006, 13(18): 3312-3313.

    [9] 何建民. 淺談細(xì)菌革蘭染色的影響因素. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué), 2003, 26(1):62.

    (本文編輯:李敬文)

    Evaluation of the performance of automatic stainer in clinical microbiological samples staining

    LIYing,CHENXin-xin,ZHAOYing,LIUYa-li,WANGHe,ZHANGXiao-jiang,YANGQi-wen,XUYing-chun.

    DepartmentofClinicalLaboratory,PekingUnionMedicalCollegeHospital,PekingUnionMedicalCollege,ChineseAcademyofMedicalSciences,Beijing100730,China

    Correspondingauthor:YANGQi-wen,Email:yangqiwen81@163.com

    Objective To evaluate the performance of automatic stainer in staining of clinical microbiological samples. Methods One hundred and three microbiological samples collected from clinical patients were disposed to staining according to detailed needs of gram staining, acid-fast staining or fluorescence auramine O staining. The manual staining and the automatic stainer methods were carried out paralleled. Consistency of the staining results, efficiency, operability, stability and bio-safety of these two approaches were compared to evaluate the performance of automatic stainer. Results The automatic stainer performed excellently in clinical microbiological samples staining with higher consistency to manual staining results on gram staining (100% (58/58)), acid-fast staining (100% (45/45)) and fluorescent staining (100% (45/45)) and merits of being efficient, easy to operate, stable and pollution-free. Conclusion The automatic stainer had favorable performance in staining of clinical microbiological samples.

    Clinical laboratory techniques; Staining and labeling; Mycobacterium; Comparative study

    10.3969/j.issn.1000-6621.2017.03.011

    中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與健康科技創(chuàng)新工程協(xié)同創(chuàng)新團隊項目(2016-I2M-3-014)

    100730 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院檢驗科

    注:李穎和陳欣欣對本文有同等貢獻,為并列第一作者

    楊啟文,Email:yangqiwen81@163.com

    2016-10-17)

    猜你喜歡
    染色機抗酸革蘭
    抗酸染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法和實時熒光PCR法在分枝桿菌檢查中的應(yīng)用比較
    腫瘤醫(yī)院感染患者革蘭陽性菌分布與耐藥性及經(jīng)驗性抗MRSA的研究
    由于安裝不合理而引起的換熱器鼓包事故分析
    PCR技術(shù)、抗酸染色法在肺結(jié)核病理學(xué)診斷中應(yīng)用比較
    基層醫(yī)院ICU與非ICU主要革蘭陰性桿菌分布與耐藥性差異
    2011—2013年非發(fā)酵革蘭陰性桿菌耐藥監(jiān)測結(jié)果分析
    改良抗酸染色法在結(jié)核性漿膜炎臨床診斷中的價值
    基于ARM的染色機控制系統(tǒng)的研發(fā)
    立信染整兩款染色機榮獲2013香港工商業(yè)獎
    溢流染色機控制管理系統(tǒng)的應(yīng)用研究
    絲綢(2014年5期)2014-02-28 14:55:15
    我的老师免费观看完整版| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 香蕉丝袜av| 午夜精品久久久久久毛片777| 无人区码免费观看不卡| 99久久成人亚洲精品观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲人与动物交配视频| 欧美大码av| 亚洲成av人片在线播放无| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产男靠女视频免费网站| 久久久成人免费电影| 国产精品一区二区三区四区久久| 麻豆国产97在线/欧美| 免费观看人在逋| 久久九九热精品免费| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | xxxwww97欧美| 欧美大码av| 国产免费男女视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 波多野结衣高清无吗| 丰满的人妻完整版| av视频在线观看入口| 欧美色视频一区免费| 欧美3d第一页| 淫妇啪啪啪对白视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 久久香蕉精品热| 国产三级在线视频| 国产成人福利小说| 亚洲av熟女| 国产午夜精品久久久久久| 性色avwww在线观看| 精品一区二区三区四区五区乱码| 日本一本二区三区精品| e午夜精品久久久久久久| 欧美大码av| 超碰成人久久| 午夜福利高清视频| 亚洲,欧美精品.| 黄频高清免费视频| 一进一出抽搐动态| 精品久久久久久久久久久久久| 中文资源天堂在线| 999久久久精品免费观看国产| 99视频精品全部免费 在线 | bbb黄色大片| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 在线观看舔阴道视频| 国产视频一区二区在线看| 午夜福利18| 九色成人免费人妻av| 欧美在线一区亚洲| 精品久久蜜臀av无| 欧美乱码精品一区二区三区| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 伊人久久大香线蕉亚洲五| 一级a爱片免费观看的视频| 国产一区二区在线av高清观看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| xxxwww97欧美| 真人做人爱边吃奶动态| 黄色 视频免费看| 99re在线观看精品视频| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲人与动物交配视频| 国产1区2区3区精品| av天堂中文字幕网| av国产免费在线观看| 亚洲熟妇熟女久久| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 夜夜爽天天搞| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产av麻豆久久久久久久| 免费av不卡在线播放| 男女午夜视频在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 欧美成人免费av一区二区三区| 99久久精品一区二区三区| 小说图片视频综合网站| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 成人性生交大片免费视频hd| 欧美最黄视频在线播放免费| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲国产看品久久| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产淫片久久久久久久久 | 18禁国产床啪视频网站| 亚洲电影在线观看av| 日本黄大片高清| 一区二区三区高清视频在线| 国产精品影院久久| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 男女下面进入的视频免费午夜| 欧美性猛交黑人性爽| 日韩高清综合在线| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲成av人片在线播放无| 欧美三级亚洲精品| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 丝袜人妻中文字幕| 久久久久久久久中文| 日本五十路高清| 男女之事视频高清在线观看| 久久人妻av系列| 欧美日韩黄片免| 99在线人妻在线中文字幕| 99热6这里只有精品| 在线观看舔阴道视频| av国产免费在线观看| 国产高清有码在线观看视频| 在线免费观看不下载黄p国产 | 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 动漫黄色视频在线观看| 听说在线观看完整版免费高清| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 午夜成年电影在线免费观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 欧美一级毛片孕妇| 久久国产精品人妻蜜桃| 免费在线观看日本一区| 国产熟女xx| 12—13女人毛片做爰片一| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| a级毛片a级免费在线| 亚洲黑人精品在线| 美女高潮的动态| 国产成人av激情在线播放| 成年版毛片免费区| av中文乱码字幕在线| 老汉色av国产亚洲站长工具| 麻豆av在线久日| 亚洲在线观看片| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 97超视频在线观看视频| 高清毛片免费观看视频网站| 窝窝影院91人妻| 午夜免费成人在线视频| 99久久无色码亚洲精品果冻| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 久久人人精品亚洲av| 欧美成人性av电影在线观看| 99热精品在线国产| 99re在线观看精品视频| 国产真实乱freesex| 成人欧美大片| 少妇丰满av| 国产亚洲精品久久久com| 中文字幕高清在线视频| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 国产v大片淫在线免费观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 久久天堂一区二区三区四区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产伦在线观看视频一区| 热99在线观看视频| bbb黄色大片| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产av不卡久久| 欧美中文日本在线观看视频| 国产午夜福利久久久久久| 综合色av麻豆| av黄色大香蕉| 成人国产一区最新在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 成人永久免费在线观看视频| 国产欧美日韩一区二区三| 99在线视频只有这里精品首页| 一本综合久久免费| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产亚洲欧美98| 日本成人三级电影网站| 日韩欧美免费精品| 高潮久久久久久久久久久不卡| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲国产欧美一区二区综合| 欧美日本视频| 国产欧美日韩一区二区三| 无人区码免费观看不卡| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| av视频在线观看入口| 久久久精品大字幕| 最新中文字幕久久久久 | 精品日产1卡2卡| 色综合婷婷激情| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲乱码一区二区免费版| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 两人在一起打扑克的视频| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 男人舔女人的私密视频| 变态另类丝袜制服| 久久性视频一级片| 中文字幕最新亚洲高清| 国产精品久久久久久久电影 | 国产黄a三级三级三级人| 毛片女人毛片| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| a级毛片在线看网站| e午夜精品久久久久久久| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 99国产综合亚洲精品| 禁无遮挡网站| svipshipincom国产片| 亚洲欧美日韩东京热| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 97超视频在线观看视频| 日本免费a在线| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 亚洲男人的天堂狠狠| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 天天添夜夜摸| 亚洲欧美激情综合另类| 美女被艹到高潮喷水动态| 一区二区三区高清视频在线| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 麻豆成人午夜福利视频| 九色国产91popny在线| 悠悠久久av| 视频区欧美日本亚洲| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产欧美日韩一区二区三| 午夜精品在线福利| 一本精品99久久精品77| 神马国产精品三级电影在线观看| 听说在线观看完整版免费高清| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 男女那种视频在线观看| 精品国产亚洲在线| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲专区字幕在线| 午夜免费成人在线视频| 欧美成人性av电影在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲av第一区精品v没综合| av片东京热男人的天堂| 国产亚洲精品av在线| 国产真人三级小视频在线观看| 色播亚洲综合网| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产私拍福利视频在线观看| а√天堂www在线а√下载| 国产精品 欧美亚洲| 99热精品在线国产| 亚洲自拍偷在线| 国产成人精品久久二区二区91| 伦理电影免费视频| ponron亚洲| 听说在线观看完整版免费高清| 老司机午夜福利在线观看视频| 日韩国内少妇激情av| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 性色avwww在线观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 少妇人妻一区二区三区视频| 特大巨黑吊av在线直播| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| av国产免费在线观看| 男人的好看免费观看在线视频| 国产成人啪精品午夜网站| 激情在线观看视频在线高清| 长腿黑丝高跟| 色综合欧美亚洲国产小说| 看片在线看免费视频| 亚洲美女视频黄频| 在线观看日韩欧美| 久久久久久久久中文| 久久久久亚洲av毛片大全| cao死你这个sao货| 免费一级毛片在线播放高清视频| 九九久久精品国产亚洲av麻豆 | 精品无人区乱码1区二区| 一区二区三区国产精品乱码| 男人舔女人的私密视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 美女午夜性视频免费| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 成人一区二区视频在线观看| 91字幕亚洲| 搡老妇女老女人老熟妇| 午夜成年电影在线免费观看| 亚洲熟女毛片儿| 五月玫瑰六月丁香| 久久久国产成人免费| 成人永久免费在线观看视频| 91麻豆精品激情在线观看国产| 操出白浆在线播放| 曰老女人黄片| 国产精品久久久久久精品电影| 啪啪无遮挡十八禁网站| 天堂网av新在线| 美女免费视频网站| 18美女黄网站色大片免费观看| 首页视频小说图片口味搜索| 在线a可以看的网站| 日韩欧美三级三区| 女警被强在线播放| 一级毛片高清免费大全| 91av网一区二区| 国产精品精品国产色婷婷| 国产 一区 欧美 日韩| 嫩草影视91久久| 日本免费a在线| 级片在线观看| 12—13女人毛片做爰片一| 国产黄a三级三级三级人| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 91av网站免费观看| 精品一区二区三区四区五区乱码| h日本视频在线播放| 天堂动漫精品| 欧美中文综合在线视频| 神马国产精品三级电影在线观看| 国模一区二区三区四区视频 | 精品乱码久久久久久99久播| 精品欧美国产一区二区三| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 丰满的人妻完整版| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产激情欧美一区二区| 日本五十路高清| 免费搜索国产男女视频| 精品久久久久久久久久久久久| 麻豆久久精品国产亚洲av| 成人特级av手机在线观看| 精品日产1卡2卡| 亚洲中文字幕日韩| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 很黄的视频免费| 国产黄片美女视频| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 成年女人毛片免费观看观看9| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产主播在线观看一区二区| 又大又爽又粗| 亚洲专区字幕在线| 国产成年人精品一区二区| 久久九九热精品免费| 国产综合懂色| 男女午夜视频在线观看| 99久久无色码亚洲精品果冻| 精品一区二区三区av网在线观看| 999久久久国产精品视频| 久久精品综合一区二区三区| 国产97色在线日韩免费| 黄色成人免费大全| 99热只有精品国产| xxxwww97欧美| 国产视频一区二区在线看| 成年女人永久免费观看视频| 成人三级做爰电影| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产亚洲欧美在线一区二区| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲成人久久性| 搡老妇女老女人老熟妇| 制服人妻中文乱码| 2021天堂中文幕一二区在线观| 久久中文字幕人妻熟女| 国产激情久久老熟女| 久久精品91蜜桃| 欧美在线一区亚洲| 天堂影院成人在线观看| 欧美又色又爽又黄视频| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产伦精品一区二区三区四那| 在线永久观看黄色视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 特级一级黄色大片| 婷婷六月久久综合丁香| 成人av在线播放网站| 手机成人av网站| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| www.熟女人妻精品国产| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 久久久久亚洲av毛片大全| www.www免费av| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 偷拍熟女少妇极品色| 国产激情偷乱视频一区二区| 天堂动漫精品| 午夜成年电影在线免费观看| 黄色丝袜av网址大全| 国产高潮美女av| 男人的好看免费观看在线视频| 久久热在线av| 老汉色∧v一级毛片| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| av黄色大香蕉| 在线永久观看黄色视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 日韩成人在线观看一区二区三区| 久久这里只有精品19| 超碰成人久久| 国产又色又爽无遮挡免费看| 香蕉国产在线看| 日本成人三级电影网站| 他把我摸到了高潮在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9| 嫩草影视91久久| 亚洲国产色片| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 91在线观看av| 97超视频在线观看视频| 国产亚洲欧美98| 午夜视频精品福利| 男人的好看免费观看在线视频| 中文字幕久久专区| ponron亚洲| 99国产综合亚洲精品| 日韩大尺度精品在线看网址| 啦啦啦免费观看视频1| 亚洲五月婷婷丁香| 亚洲欧美日韩东京热| 中文字幕熟女人妻在线| 一级毛片女人18水好多| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 久久草成人影院| 欧美日本亚洲视频在线播放| 一进一出抽搐动态| 黄色 视频免费看| 黄片大片在线免费观看| 婷婷精品国产亚洲av| а√天堂www在线а√下载| 亚洲无线观看免费| 淫秽高清视频在线观看| 国产av麻豆久久久久久久| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲av第一区精品v没综合| 99国产精品一区二区三区| 哪里可以看免费的av片| 日韩大尺度精品在线看网址| 天堂√8在线中文| 久久人妻av系列| 1024香蕉在线观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 久久久久性生活片| 亚洲美女黄片视频| 国产单亲对白刺激| 欧美在线黄色| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲 国产 在线| 99在线视频只有这里精品首页| 悠悠久久av| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| www.自偷自拍.com| 国产美女午夜福利| 日本成人三级电影网站| 成人无遮挡网站| 欧美不卡视频在线免费观看| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产野战对白在线观看| 麻豆国产av国片精品| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 男人舔女人下体高潮全视频| 在线观看午夜福利视频| 热99re8久久精品国产| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲av第一区精品v没综合| 特级一级黄色大片| 91av网站免费观看| 亚洲专区字幕在线| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲专区字幕在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 91在线观看av| 亚洲性夜色夜夜综合| 91九色精品人成在线观看| 亚洲av电影在线进入| 国产亚洲精品av在线| 99国产综合亚洲精品| 国产精品亚洲美女久久久| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 国产亚洲精品av在线| 俄罗斯特黄特色一大片| 一本综合久久免费| 精品国产乱码久久久久久男人| 久久久久免费精品人妻一区二区| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 欧美精品啪啪一区二区三区| 色播亚洲综合网| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 日本免费a在线| 91九色精品人成在线观看| 麻豆国产97在线/欧美| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产欧美日韩精品亚洲av| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲中文av在线| 国产av麻豆久久久久久久| 欧美一区二区国产精品久久精品| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 中文字幕高清在线视频| 国产精品爽爽va在线观看网站| 黑人操中国人逼视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 日韩国内少妇激情av| 91久久精品国产一区二区成人 | 日本在线视频免费播放| 欧美午夜高清在线| 久久热在线av| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 成人一区二区视频在线观看| 综合色av麻豆| 9191精品国产免费久久| 69av精品久久久久久| 色哟哟哟哟哟哟| 免费看日本二区| 十八禁网站免费在线| 欧美精品啪啪一区二区三区| 成人av在线播放网站| 男人舔女人下体高潮全视频| 看片在线看免费视频| 国产精品 国内视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 日韩欧美国产在线观看| 叶爱在线成人免费视频播放| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产精品98久久久久久宅男小说| x7x7x7水蜜桃| 欧美午夜高清在线| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 男人和女人高潮做爰伦理| av国产免费在线观看| 日日夜夜操网爽| 国产精品 国内视频| 久久久久亚洲av毛片大全| www.熟女人妻精品国产| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 窝窝影院91人妻| 视频区欧美日本亚洲| 日韩欧美在线乱码| 午夜福利免费观看在线| 免费在线观看日本一区| 日韩三级视频一区二区三区| 搡老熟女国产l中国老女人| 观看美女的网站| 日韩国内少妇激情av| 老鸭窝网址在线观看| 三级国产精品欧美在线观看 | 国产成人系列免费观看| 级片在线观看| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲精品美女久久av网站| 淫妇啪啪啪对白视频| 在线免费观看的www视频| 国产探花在线观看一区二区| 成人特级av手机在线观看| 一本综合久久免费| 啪啪无遮挡十八禁网站| 日本黄色视频三级网站网址| 国产淫片久久久久久久久 | 精品一区二区三区视频在线 | 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产在线精品亚洲第一网站| 九色成人免费人妻av| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产成人精品久久二区二区91| 小说图片视频综合网站| 国产真实乱freesex| 亚洲美女黄片视频| 日本在线视频免费播放| 长腿黑丝高跟| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲五月天丁香| 日韩中文字幕欧美一区二区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产精品久久久久久精品电影| 亚洲人成网站高清观看| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产伦在线观看视频一区| 欧美成人性av电影在线观看| 久久香蕉精品热| 无人区码免费观看不卡| 啦啦啦免费观看视频1| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲欧美日韩东京热| 男插女下体视频免费在线播放| 嫩草影视91久久| 校园春色视频在线观看|