ILP-2和EpCAM基因在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義

陳智慧 周祥福 張 亮 葉紹強(qiáng) 周建新 金尚麗

（東莞市常平醫(yī)院泌尿外科，廣東 東莞 523573）

ILP-2和EpCAM基因在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義

陳智慧 周祥福 張 亮 葉紹強(qiáng) 周建新 金尚麗

（東莞市常平醫(yī)院泌尿外科，廣東 東莞 523573）

目的探討ILP-2和EpCAM基因在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義。方法本文選取就診于我院和中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院2014年6月至2016年5月的66例膀胱移行細(xì)胞癌患者，并選取同期的22例非腫瘤患者，檢查病理組織標(biāo)本，觀察ILP-2和EpCAM基因在膀胱移行細(xì)胞癌與在正常的膀胱組織中表達(dá)情況以及ILP-2和EpCAM基因在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)和病理特征關(guān)系。結(jié)果LP-2基因的蛋白產(chǎn)物主要在細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行表達(dá)，且呈棕黃色細(xì)顆粒。LP-2基因在正常的膀胱組織中沒(méi)有陽(yáng)性表達(dá)；在細(xì)胞癌組織中的陽(yáng)性總表達(dá)率（78.79%）顯著高于正常的膀胱組織，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。EpCAM基因的蛋白產(chǎn)物主要在細(xì)胞膜及部分的細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行表達(dá)，且呈均勻的棕黃色細(xì)顆粒。EpCAM基因在正常的膀胱組織中沒(méi)有陽(yáng)性表達(dá)；在細(xì)胞癌組織中的陽(yáng)性總表達(dá)率（69.70%）顯著高于正常的膀胱組織，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。ILP-2和EpCAM基因表達(dá)在性別和腫瘤大小等方面的表達(dá)率比較差異不顯著，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義（P＞0.05）；在臨床分期、腫瘤數(shù)量、病理分級(jí)、復(fù)發(fā)情況等方面的表達(dá)率比較差異均顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義（P＜0.05）。結(jié)論ILP-2和EpCAM基因在膀胱組織中表達(dá)和腫瘤細(xì)胞間的轉(zhuǎn)移、侵襲有著密切的關(guān)系，ILP-2和EpCAM基因檢測(cè)對(duì)在膀胱移行細(xì)胞癌診斷與預(yù)后中具有重要的判斷參考價(jià)值。

ILP-2；EpCAM基因；膀胱移行細(xì)胞癌；陽(yáng)性表達(dá)率

在臨床上，膀胱癌是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，其中膀胱移行細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)制最復(fù)雜，是最多發(fā)的腫瘤，且誘發(fā)的因素較多，準(zhǔn)確診斷及預(yù)后判斷對(duì)膀胱移行細(xì)胞癌的診治有著重要的意義[1]。ILP-2是一種新發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白，EpCAM基因的蛋白產(chǎn)物在人類的食道癌、肺癌、胃癌、結(jié)直腸癌及乳腺癌等各種腫瘤中廣泛的表達(dá)[2]。本研究選取就診于我院和中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院2014年6月至2016年5月的66例膀胱移行細(xì)胞癌患者，并選取同期的22例非腫瘤患者，對(duì)ILP-2和EpCAM基因在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義進(jìn)行探討。報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料：本文選取就診于我院和中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院2014年6月至2016年5月的66例膀胱移行細(xì)胞癌患者，包括男40例，女26例，年齡為26～82歲，平均年齡為（62.8±5.5）歲。所有膀胱移行細(xì)胞癌患者均被病理學(xué)檢查后確診，其中初發(fā)腫瘤患者27例，復(fù)發(fā)腫瘤患者39例；腫瘤直徑＞3 cm 20例，腫瘤直徑≤3 cm 46例；單發(fā)38例，多發(fā)28例；病理分級(jí)包括：G1 21例，G2 20例，G3 25例；腫瘤分期為：淺表型24例，浸潤(rùn)型42例。選取同期的22例非腫瘤患者正常膀胱的切除組織標(biāo)本，均取自膀胱開放手術(shù)活組織檢查。

1.2 方法：把免疫組織的化學(xué)玻片浸泡在洗潔精中24 h后用水流進(jìn)行沖洗，再用蒸餾水進(jìn)行漂洗，接著在95%的乙醇中把玻片浸泡24 h，再用蒸餾水進(jìn)行漂洗，最后放置于烤箱中進(jìn)行徹底的干燥。把多聚-L-賴氨酸溶液用蒸餾水進(jìn)行稀釋，稀釋倍數(shù)為10倍，把干燥后的玻片置于稀釋液中進(jìn)行浸泡，浸泡時(shí)間為1～5 min，再用45 ℃的烤箱進(jìn)行烘干。用40%的甲醛水溶液對(duì)所有的標(biāo)本組織進(jìn)行處理，并用石蠟進(jìn)行包埋。把標(biāo)本用自動(dòng)切片機(jī)切成4 μm左右厚的3～4張切片，然后漂片，再將其貼附在玻片上，最后置于65 ℃的烤箱進(jìn)行烘烤4 h。切片用梯度乙醇與二甲苯進(jìn)行逐步的脫蠟，然后用蒸餾水進(jìn)行沖洗，沖洗次數(shù)為2次，沖洗頻率為3分/次；再用PBS進(jìn)行沖洗，沖洗次數(shù)為3次，沖洗頻率為3分/次。按照抗體說(shuō)明書，給予組織抗原相應(yīng)的修復(fù)。

1.3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：在400倍的光鏡下隨機(jī)選取每張切片的5個(gè)視野，一個(gè)視野細(xì)胞計(jì)數(shù)為200，一共為100個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)。用顯微圖像分析系統(tǒng)對(duì)有代表性陽(yáng)性視野中棕黃色的顆粒進(jìn)行系統(tǒng)的標(biāo)記，并檢測(cè)所有視野中的陽(yáng)性結(jié)果，蛋白顆粒的密度用參數(shù)積分的光密度來(lái)表示。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為：①陰性：視野中無(wú)棕色的細(xì)胞或背景一致，或陽(yáng)性細(xì)胞低于5%；②陽(yáng)性：視野中陽(yáng)性細(xì)胞低于25%；③中等陽(yáng)性：視野中陽(yáng)性細(xì)胞在25%～50%；④強(qiáng)陽(yáng)性：視野中陽(yáng)性細(xì)胞高于50%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：本文研究數(shù)據(jù)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0處理。計(jì)量資料用（）表示，組間比較用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用n表示，計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)；P＜0.05為差異顯著有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 ILP-2和EpCAM的表達(dá)：LP-2基因的蛋白產(chǎn)物主要在細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行表達(dá)，且呈棕黃色細(xì)顆粒。LP-2基因在正常的膀胱組織中沒(méi)有陽(yáng)性表達(dá)；在細(xì)胞癌組織中有14例為陰性表達(dá)（21.21%），13例為陽(yáng)性表達(dá)（19.70%），15例為中等陽(yáng)性（22.73%），24例為強(qiáng)陽(yáng)性（36.36%），陽(yáng)性總表達(dá)率為78.79%。ILP-2在膀胱移行細(xì)胞癌中陽(yáng)性表達(dá)的水平顯著高于正常的膀胱組織，比較差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義（P＜0.05）。EpCAM基因的蛋白產(chǎn)物主要在細(xì)胞膜及部分的細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行表達(dá)，且呈均勻的棕黃色細(xì)顆粒。EpCAM基因在正常的膀胱組織中沒(méi)有陽(yáng)性表達(dá)；在細(xì)胞癌組織中有20例為陰性表達(dá)（30.30%），16例為陽(yáng)性表達(dá)（24.24%），9例為中等陽(yáng)性（13.64%），21例為強(qiáng)陽(yáng)性（31.82%），陽(yáng)性總表達(dá)率為69.70%。EpCAM在膀胱移行細(xì)胞癌中陽(yáng)性表達(dá)的水平顯著高于正常的膀胱組織，比較差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 ILP-2和EpCAM基因在膀胱移行細(xì)胞癌中的的表達(dá)情況[n（%）]

2.2 ILP-2和EpCAM基因在膀胱移行細(xì)胞癌中表達(dá)及病理特征關(guān)系比較：ILP-2和EpCAM基因表達(dá)在性別和腫瘤大小等方面的表達(dá)率比較差異不顯著，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義（P＞0.05）；在臨床分期、腫瘤數(shù)量、病理分級(jí)、復(fù)發(fā)情況等方面的表達(dá)率比較差異均顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義（P＜0.05）；且G1和G2、G1和G3間的陽(yáng)性率比較差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義（P＜0.05）；G2和G3間的陽(yáng)性率比較差異不顯著，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 ILP-2和EpCAM基因在膀胱移行細(xì)胞癌中表達(dá)和臨床相關(guān)的指標(biāo)關(guān)系比較情況[n（%）]

3 討 論

在臨床上，膀胱癌是一種常見(jiàn)的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，其中膀胱移行細(xì)胞癌是發(fā)生率最高的腫瘤，近年來(lái)膀胱癌的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)，且膀胱移行細(xì)胞癌具有多中心、易復(fù)發(fā)及浸潤(rùn)性生長(zhǎng)等特點(diǎn)[3]。相關(guān)的研究顯示，腫瘤侵襲由多種的細(xì)胞因子與蛋白基因共同決定，且涉及到細(xì)胞遷移與增殖等。目前，臨床分期與病理分級(jí)是臨床膀胱移行細(xì)胞癌的預(yù)后評(píng)估判斷標(biāo)準(zhǔn)，因腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移與浸潤(rùn)均是較復(fù)雜的過(guò)程，所以沒(méi)有對(duì)預(yù)后做出理想的準(zhǔn)確判斷。

ILP-2是目前新發(fā)現(xiàn)的一種凋亡抑制蛋白，也是caspase-9的抑制因子，一般通過(guò)中和Smac功能來(lái)起到抗凋亡的作用。EPcAM是一種結(jié)合膜的蛋白酶抑制劑，在其進(jìn)行轉(zhuǎn)移的過(guò)程中可以保護(hù)腫瘤細(xì)胞，進(jìn)而避免了被自身分泌的組織蛋白酶所分解。EpcAM在體外和活體內(nèi)均是絲裂信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白，激活作用主要通過(guò)對(duì)膜內(nèi)蛋白的水解作用進(jìn)行調(diào)節(jié)而實(shí)現(xiàn)，包括外功能區(qū)的EpEX脫落與胞質(zhì)域的EpICD核轉(zhuǎn)位。膀胱移行細(xì)胞癌的治療前提需先找到可準(zhǔn)確預(yù)測(cè)腫瘤的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和浸潤(rùn)等相關(guān)指標(biāo)，并予以相應(yīng)的治療后降低復(fù)發(fā)率，進(jìn)而提高患者生存的質(zhì)量。

本文的研究結(jié)果顯示，LP-2基因的蛋白產(chǎn)物主要在細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行表達(dá)，且呈棕黃色細(xì)顆粒。LP-2基因在正常的膀胱組織中沒(méi)有陽(yáng)性表達(dá)；在細(xì)胞癌組織中的陽(yáng)性總表達(dá)率（78.79%）顯著高于正常的膀胱組織，具有可比性，表明LP-2和EpCAM基因在腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)過(guò)程中均發(fā)揮了一定的作用[4]。EpCAM基因的蛋白產(chǎn)物主要在細(xì)胞膜及部分的細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行表達(dá)，且呈均勻的棕黃色細(xì)顆粒。EpCAM基因在正常的膀胱組織中沒(méi)有陽(yáng)性表達(dá)；在細(xì)胞癌組織中的陽(yáng)性總表達(dá)率（69.70%）顯著高于正常的膀胱組織，具有可比性。ILP-2和EpCAM基因表達(dá)在性別和腫瘤大小等方面的表達(dá)率比較差異不顯著，無(wú)可比性；在臨床分期、腫瘤數(shù)量、病理分級(jí)、復(fù)發(fā)情況等方面的表達(dá)率比較差異均顯著，具有可比性。表明在高分化的腫瘤組織中，ILP-2的表達(dá)與低分化腫瘤相比較低，ILP-2的表達(dá)與膀胱移行細(xì)胞癌病變的程度具有密切的關(guān)系[5]。ILP-2基因在淺表型的腫瘤表達(dá)明顯低于在浸潤(rùn)型的腫瘤表達(dá)，表明ILP-2的表達(dá)和腫瘤細(xì)胞的增殖能力與浸潤(rùn)能力具有一定的關(guān)系。據(jù)相關(guān)的研究顯示，EpCAM在多種惡性的腫瘤中均具有較高的陽(yáng)性表達(dá)率。在本文的研究中，EpCAM在膀胱移行細(xì)胞癌腫瘤組織中陽(yáng)性表達(dá)率是隨著腫瘤病理的分級(jí)增高而出現(xiàn)上升，在浸潤(rùn)型的腫瘤中表達(dá)水平較高，表明EpCAM表達(dá)也與患者疾病的臨床分期有著密切的關(guān)系。

綜上所述，ILP-2和EpCAM可以對(duì)膀胱移行細(xì)胞癌的惡性程度及復(fù)發(fā)進(jìn)行評(píng)估，且是評(píng)估的重要指標(biāo)，提供了臨床診治膀胱癌的科學(xué)依據(jù)。

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R737.14

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1671-8194（2017）08-0018-02

東莞市科技計(jì)劃醫(yī)療衛(wèi)生類科研一般項(xiàng)目（立項(xiàng)編號(hào)：2014105101045）