氟苯尼考與替米考星對奶牛乳房炎常見病原菌的聯(lián)合藥敏試驗

張艷玲，孫慧琴，熊天雪，李先強

(1.塔里木大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，阿拉爾 843300；2.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木畜禽科技重點實驗室，阿拉爾 843300)

氟苯尼考與替米考星對奶牛乳房炎常見病原菌的聯(lián)合藥敏試驗

張艷玲1,2，孫慧琴1，熊天雪1，李先強1,2

(1.塔里木大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，阿拉爾 843300；2.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木畜禽科技重點實驗室，阿拉爾 843300)

本試驗對氟苯尼考和替米考星在5種常見奶牛乳房炎病原菌(致病性大腸桿菌、停乳鏈球菌、乳房鏈球菌、無乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌)聯(lián)合藥敏試驗中的相互作用進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，氟苯尼考和替米考星單獨使用時對各菌的最低抑菌濃度（MIC）分別為0.5～4μg/mL和1～8μg/mL，二者聯(lián)合后的部分抑菌指數(shù)（FIC）介于0.375～0.75，表現(xiàn)出協(xié)同作用或相加作用。

氟苯尼考；替米考星；奶牛乳房炎；聯(lián)合藥敏試驗

奶牛乳房炎是制約全球奶牛業(yè)快速發(fā)展的最重要疾病之一。研究表明，美國加利福尼亞州、密歇根州、俄亥俄州和德國的巴伐利亞州、法國的韋仕敦以及英國，每年每頭奶牛因防治奶牛乳房炎疾病分別花費122.4美元[1]、35.94美元[2]、39.85美元[3]、26.19美元[3]、69.46美元[4]和326.80美元[5]。我國奶牛乳房炎發(fā)病率高達(dá)46%～70%。目前，抗生素在奶牛乳房炎防治中仍然發(fā)揮著不可或缺的重要作用。

臨床上，奶牛乳房炎的病因復(fù)雜，且常伴有多種病原菌的繼發(fā)感染和混合感染，加之細(xì)菌耐藥性問題日益嚴(yán)重，很難通過單一用藥來進(jìn)行有效控制[6]。目前，關(guān)于聯(lián)合用藥防治奶牛乳房炎已有大量文獻(xiàn)報道，如恩諾沙星與卡那霉素[7]、阿莫西林與氧氟沙星[8]等，但并未見氟苯尼考與替米考星聯(lián)合用藥的相關(guān)報道。本研究針對5種常見奶牛乳房炎病原菌（致病性大腸桿菌、停乳鏈球菌、乳房鏈球菌、無乳鏈球菌以及金黃色葡萄球菌）進(jìn)行了氟苯尼考與替米考星的聯(lián)合藥敏試驗，旨在為奶牛乳房炎的臨床用藥新組合提供參考。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

氟苯尼考、替米考星標(biāo)準(zhǔn)品購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；MH肉湯、TSA瓊脂和TSB肉湯培養(yǎng)基購自青島新希望生物科技有限公司；胎牛血清購自廣州瑞特生物技術(shù)有限公司。

1.2 試驗菌種

停乳鏈球菌、乳房鏈球菌、無乳鏈球菌、致病性大腸桿菌以及金黃色葡萄球菌均由本實驗室分離保存。

1.3 藥液制備

精密稱取氟苯尼考與替米考星標(biāo)準(zhǔn)品，用無菌去離子水配制成128μg/mL的藥液，并置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 培養(yǎng)基制備

MH肉湯、TSA瓊脂以及TSB肉湯均按相應(yīng)說明書配制。

1.5 單價藥的最低抑菌濃度(MIC)測定

采用美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(C L S IM07A8-2010)制定的微量肉湯稀釋法分別測定氟苯尼考和替米考星對5種常見奶牛乳房炎病原菌的MIC，質(zhì)控藥物選擇氨芐青霉素，質(zhì)控菌株選擇大腸桿菌ATCC25922。

1.6 聯(lián)合藥敏試驗

應(yīng)用微量肉湯棋盤法[9]分別測定氟苯尼考與替米考星對5種常見奶牛乳房炎病原菌的聯(lián)合藥敏試驗效應(yīng)。以單價藥MIC值的1/4、1/2、1、2、4、8倍等濃度在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上分別進(jìn)行敏感試驗，菌液與藥液混合后將96孔板置恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。

1.7 結(jié)果判定

以部分抑菌指數(shù)(FIC)作為聯(lián)合藥敏試驗的判斷依據(jù)，計算公式如下：

FIC≤0.5為協(xié)同作用；FIC在0.5～1之間為相加作用；FIC介于1～2為無關(guān)作用；FIC＞2為拮抗作用。

2 結(jié)果與分析

2.1 單價藥MIC

氟苯尼考、替米考星對停乳鏈球菌、乳房鏈球菌、無乳鏈球菌、致病性大腸桿菌以及金黃色普通球菌的MIC測定結(jié)果如表1所示。

表1 氟苯尼考、替米考星單獨使用時對5種菌的MIC單位：μg/mL

如表1所示，氟苯尼考、替米考星單獨使用時對5種常見奶牛乳房炎病原菌的MIC值分別介于0.5～4μg/mL 和1～8μg/mL，表明兩藥對致病性大腸桿菌、鏈球菌以及葡萄球菌等均有很好的抑菌效果，可用于臨床奶牛乳房炎的防治。同時也表明，氟苯尼考和替米考星不僅對奶牛乳房炎致病菌中的革蘭氏陽性菌有較強抑制作用外，還對革蘭氏陰性菌（致病性大腸桿菌）也有很好的抑菌作用。

2.2 聯(lián)合藥敏試驗結(jié)果

氟苯尼考和替米考星聯(lián)合使用時，停乳鏈球菌、乳房鏈球菌、無乳鏈球菌、致病性大腸桿菌以及金黃色葡萄球菌的MIC值均有所下降，表明聯(lián)合用藥時二者的抗菌能力均有所加強。氟苯尼考和替米考星對5種菌的FIC 為0.375～0.75，有四株菌表現(xiàn)為協(xié)同作用，其余六株菌表現(xiàn)為相加作用，具體的試驗結(jié)果和聯(lián)合效應(yīng)如表2所示。

表2 氟苯尼考、替米考星聯(lián)合用藥時對5種菌的敏感試驗

3 討論

氟苯尼考屬于酰胺醇類抗生素，其主要通過與病原菌的70S核蛋白體的50S亞基上的A位緊密結(jié)合，阻礙了肽?；D(zhuǎn)移酶的轉(zhuǎn)肽反應(yīng)，使肽鏈不能延伸而抑制蛋白質(zhì)的合成[10]。替米考星為大環(huán)類脂類抗生素，抗菌機理為與敏感菌的核蛋白體50S亞基結(jié)合，通過對mRNA位移的阻斷而影響細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成[11]。二者聯(lián)合用藥伴有相加作用或協(xié)同作用的機制可能是作用的靶位不同[12]。另外，氟苯尼考和替米考星均屬于速效抑菌劑，一種藥物抑制細(xì)菌的蛋白質(zhì)合成可能會加快另一種藥物與細(xì)菌的結(jié)合，從而發(fā)揮著更強的抑菌作用[13]。

大量文獻(xiàn)表明，臨床上同時使用兩種或以上的藥物治療疾病可適度擴大藥物抗菌譜、減少藥物用量，同時降低養(yǎng)殖成本和增強療效、降低或避免毒副作用以及減少或延緩藥物耐藥性的產(chǎn)生[14]。本試驗表明，以抗菌效應(yīng)而言，氟苯尼考與替米考星二者可組方用于防治奶牛乳房炎疾病。然而，替米考星肌內(nèi)注射時可產(chǎn)生較強的局部刺激，對動物的毒性作用主要體現(xiàn)在心血管系統(tǒng)，可引起心動過速和收縮力減弱、呼吸加快、嘔吐和驚厥、甚至死亡等不良反應(yīng)[15]。氟苯尼考雖無明顯的毒性作用，但其水溶性極差，嚴(yán)重制約著其在臨床上的廣泛應(yīng)用。目前，伴隨著新型給藥載體如固體脂質(zhì)納米技術(shù)、脂質(zhì)體技術(shù)、微球與微囊技術(shù)等的快速研發(fā)和應(yīng)用，在克服獸藥較差物理性能的同時，還能明顯改善藥物體內(nèi)過程。因此，在本試驗的基礎(chǔ)上可開發(fā)研究新型氟苯尼考與替米考星復(fù)方給藥載體，以應(yīng)對奶牛乳房炎疾病的復(fù)雜性、降低其臨床危害和提高養(yǎng)牛效益。

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Susceptibility Testing of the Combination of Florfenicol and Tilmicosin against Some Pathogenic Bacteria of Dairy Cow Mastitis

ZHANG Yan-ling1,2, SUN Hui-qin1, XIONG Tian-xue1, LI Xian-qiang1,2
(1.College of Animal Science, Tarim University, Alar 843300; 2.Key Laboratory of Tarim Animal Husbandry Science and Technology of Xinjiang Production & Construction Corps, Alar 843300)

The aim of this study was to investigate the interaction between florfenicol and tilmicosin against some pathogenic bacteria of dairy cow mastitis. The minimal inhibitory concentration (MIC) of florfenicol and tilmicosin against the Escherichia coli, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis, Streptococcus agalactiae and Staphylococcus aureus were determined with the broth dilution method. Combined antibacterial activities of florfenicol and tilmicosin against the bacteria determined by chequerboard analysis, and the fractional inhibitory concentration (FIC) were measured. The results demonstrated that, the MIC of florfenicol and tilmicosin against the bacteria when single used were 0.5～4 μg/mL and 1～8 μg/mL, and the combined chemosensitivity test suggested that florfenicol and tilmicosin have a synergic or additive effect against the some pathogenic bacteria of dairy cow mastitis with the FIC range from 0.375 to 0.75, respectively.

Florfenicol; Tilmicosin; Cow mastitis; Combined antibacterial activities

S858.23

A

1004-4264（2017）04-0034-03

10.19305/j.cnki.11-3009/s.2017.04.009

2016-09-25

國家級大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目《替米考星與氟苯尼考復(fù)方固體脂質(zhì)納米粒的制備(201610757018)》；塔里木大學(xué)校長基金青年創(chuàng)新資金項目《氟苯尼考包合物微球納米混懸劑的研制(TDZKQN201603)》。

張艷玲（1994-），女，甘肅平?jīng)鋈?，漢族，本科在讀。

李先強（1989-），男，安徽馬鞍山人，漢族，講師，主要從事獸醫(yī)藥理學(xué)及新獸藥的開發(fā)研究工作。