右美托咪定后處理對(duì)大鼠肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

葉敏，陳達(dá)柔，陳宇中，杜少冰，杜展鑫，李玉鳳，唐珮瑜，楊昌山，朱曉琴

（1廣州醫(yī)科大學(xué)第二臨床學(xué)院 麻醉學(xué)系，廣東 廣州511436；2廣州醫(yī)科大學(xué) 病理生理學(xué)教研室，廣東 廣州511436；3廣州醫(yī)科大學(xué) 生理學(xué)教研室，廣東 廣州511436）

·實(shí)驗(yàn)研究·

右美托咪定后處理對(duì)大鼠肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

葉敏1，陳達(dá)柔1，陳宇中1，杜少冰1，杜展鑫1，李玉鳳1，唐珮瑜1，楊昌山2，朱曉琴3*

（1廣州醫(yī)科大學(xué)第二臨床學(xué)院 麻醉學(xué)系，廣東 廣州511436；2廣州醫(yī)科大學(xué) 病理生理學(xué)教研室，廣東 廣州511436；3廣州醫(yī)科大學(xué) 生理學(xué)教研室，廣東 廣州511436）

目的探討右美托咪定后處理對(duì)大鼠肝臟缺血再灌注損傷的影響。方法構(gòu)建肝臟缺血再灌注損傷模型，測(cè)定各組大鼠在不同方法處理后的ALT、AST含量和SOD活性，制作肝臟冰凍切片觀察。結(jié)果右美托咪定后處理可提高肝組織SOD活性，降低血清ALT、AST含量。病理學(xué)觀察：與S組相較，IR組肝組織損傷明顯；與IR組相較，P組及Dex組損傷減輕，N組損傷加重。結(jié)論右美托咪定后處理可減輕大鼠肝臟缺血再灌注損傷。

右美托咪定；后處理；肝缺血再灌注；保護(hù)

肝臟血流中斷造成肝缺血再灌注損傷 （ischemia-reperfusion injury，IRI）嚴(yán)重影響肝臟手術(shù)成功率和患者生存率［1－2］。藥物后處理 （pharmacological post－conditioning，PPC）通過(guò)使用模擬內(nèi)源性機(jī)制的藥物來(lái)發(fā)揮后處理的保護(hù)作用［3］。研究［4］表明右美托咪定預(yù)處理可減輕肝缺血再灌注損傷，但其后處理對(duì)肝缺血再灌注損傷是否有保護(hù)作用及其機(jī)制尚未明確。本研究建立大鼠肝缺血再灌注損傷模型，探討右美托咪定后處理對(duì)大鼠肝缺血再灌注損傷的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物丙泊酚注射液 （20 mL∶200 mg），右美托咪定注射液 （2 mL∶200 μg），硫代乙酰胺 （上海研臣實(shí)業(yè)有限公司），大鼠SOD ELISA試劑盒 （上海酶聯(lián)生物技術(shù)有限公司）。

1.2 動(dòng)物分組與模型制備成年雄性SD大鼠50只，體重200～230 g，隨機(jī)分為5組：假手術(shù)組 （S組）、肝缺血再灌注組（IR組）、右美托咪啶后處理組 （Dex組）、陽(yáng)性對(duì)照組 （P組）、陰性對(duì)照組 （N組）。術(shù)前12 h禁食不禁水，經(jīng)腹注射3%戊巴比妥鈉40 mg／kg麻醉后固定。S組僅游離第一肝門，其余組用無(wú)損血管夾夾閉第一肝門，制作肝缺血再灌注損傷模型，30 min后恢復(fù)灌注。恢復(fù)灌注同時(shí)，Dex組立即經(jīng)尾靜脈泵注5 μg·kg－1·h－1的Dex，P組泵注 2 mg／kg丙泊酚，N組泵注 400 mg／kg硫代乙酰胺，以上藥物均溶于NS配成3 mL混合液，S組及IR組注射等量NS，均維持30 min。再灌注2 h后處死大鼠。

1.3 模型制備成功判定去除血管夾幾秒后，肝由蒼白恢復(fù)至正常的赤褐色。

1.4 樣本提取與檢測(cè)

1.4.1血清檢測(cè) 大鼠處死后，取下腔靜脈血3.5～4 mL，室溫靜置2 h，離心提取血清，－70℃冰箱保存，送醫(yī)院檢測(cè)ALT、AST含量。

1.4.2肝組織勻漿檢測(cè) 取新鮮肝臟，以4℃冰NS沖洗表面血液，濾紙吸干表面水份，取 100～200 mg，剪碎移入勻漿管內(nèi)，按w∶v＝1∶9比例加入4℃NS，冰浴中勻漿，制備100 mg／L肝組織勻漿液，離心后取上清液，檢測(cè)肝SOD活性。

1.5 肝組織病理學(xué)觀察取新鮮肝臟用4%多聚甲醛固定，－80℃冰箱保存，制備冰凍切片，HE染色，光鏡觀察。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差 （±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清ALT、AST含量比較與S組比較，各組ALT、AST含量明顯升高 （P＜0.05）；與IR組比較，Dex組和P組ALT、AST含量下降 （P＜0.05），N組ALT、AST含量升高 （P＜0.05）；與P組比較，Dex組及N組ALT、AST含量升高；與N組比較，Dex組ALT、AST含量降低 （P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血清ALT、AST含量比較 （±s）

表1 各組大鼠血清ALT、AST含量比較 （±s）

注：與S組相比，aP＜0.05；與IR組相比，bP＜0.05；與P組相比，cP＜0.05；與N組相比，dP＜0.05。

分組 鼠數(shù) ALT（U／L） AST（U／L）S組 10 49.0±14.2 38.5±30.9 IR組 10 870.0±65.2a 1050.0±162.4aDex組 10 642.3±67.5abcd 780.0±15.4abcdP組 10 319.0±37.4ab 454.8±74.4abN組 10 1283.4±433.0abc 1559.0±492.6abc

2.2 肝組織勻漿SOD活性比較與S組比較，各組SOD活性降低 （P＜0.05）；與IR組比較，Dex組和P組SOD活性升高（P＜0.05），N組SOD活性下降 （P＜0.05）；與P組比較，Dex組及N組SOD活性下降 （P＜0.05）；與N組比較，Dex組SOD活性升高 （P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組肝勻漿SOD活性比較 （±s）

表2 各組肝勻漿SOD活性比較 （±s）

注：與S組相比，aP＜0.05；與IR組相比，bP＜0.05；與P組相比，cP＜0.05；與N組相比，dP＜0.05。

分組 鼠數(shù) SOD（U／mg）S組 10 46.2±2.1 IR組 10 12.8±1.1aDex組 10 32.8±5.8abcdP組 10 40.3±2.8abN組 10 6.9±1.8abc

2.3 肝組織病理學(xué)觀察S組肝組織無(wú)明顯變化；Dex組及P組肝細(xì)胞輕度腫脹；IR組肝細(xì)胞明顯腫脹，肝細(xì)胞條索狀結(jié)構(gòu)紊亂；N組肝細(xì)胞腫脹加重，部分有空泡變性，細(xì)胞核消失，條索狀結(jié)構(gòu)紊亂，竇周間隙變窄。見(jiàn)圖1。

3 討論

各種原因?qū)е赂窝髦袛嘁鸬母稳毖俟嘧p傷，嚴(yán)重影響患者生存率。文獻(xiàn)［4］報(bào)道，右美托咪定預(yù)處理對(duì)肝有保護(hù)作用。但臨床上往往失去預(yù)處理時(shí)機(jī)，而藥物后處理更具有臨床實(shí)用價(jià)值，故本實(shí)驗(yàn)研究右美托咪定后處理是否具有減輕再灌注損傷作用。

圖1 各組大鼠肝臟病理觀察 （HE染色，200×）

研究［5］表明，丙泊酚對(duì)肝有保護(hù)作用，硫代乙酰胺可造成急性肝損傷，故設(shè)丙泊酚為陽(yáng)性對(duì)照，硫代乙酰胺為陰性對(duì)照，以排除假陰性及假陽(yáng)性。血清學(xué)及病理學(xué)結(jié)果顯示，本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒⒊晒Γ⑻崾救毖俟嘧?dǎo)致肝細(xì)胞膜及線粒體膜嚴(yán)重破壞，損傷肝實(shí)質(zhì)；右美托咪定后處理可減輕肝缺血再灌注損傷，但其后處理對(duì)肝保護(hù)作用不如丙泊酚。

肝缺血再灌注損傷機(jī)制尚未明確。其中，氧自由基的產(chǎn)生及其引發(fā)的脂質(zhì)過(guò)氧化是缺血再灌注損傷的主要機(jī)制之一。酶學(xué)結(jié)果顯示，與S組比較，各組SOD活性降低；與IR組比較，Dex組SOD活性升高。結(jié)合血清學(xué)及病理學(xué)結(jié)果推測(cè)，缺血再灌注過(guò)程產(chǎn)生的大量氧自由基，引起脂質(zhì)過(guò)氧化，細(xì)胞膜損傷，破壞細(xì)胞完整性，導(dǎo)致嚴(yán)重肝損傷。而右美托咪定后處理提高抗氧化酶活性，清除過(guò)多氧自由基，抑制氧自由基產(chǎn)生，減輕脂質(zhì)過(guò)氧化程度，從而減輕肝損傷。

綜上所述，右美托咪定后處理對(duì)肝缺血再灌注損傷有一定保護(hù)作用，其機(jī)制可能與提高抗氧化酶活性，減少氧自由基生成，提高機(jī)體對(duì)缺血再灌注損傷的耐受能力有關(guān)。具體機(jī)制及其他影響因素仍需進(jìn)一步研究。

[1]Lesurtel M,Selzner M,Petrowsky H,et al.How should transection of the liver be performed?:a prospective randomized study in 100 consecutive patients:comparing four different transection strategies[J]. Ann Surg,2005,242(6):814-823.

[2]Helling TS.Liver failure following partial hepatectomy[J].HPB (Oxford),2006,8(3):165-174.

[3]Tsang A,Hausenloy DJ,Mocanu MM,et al.Postconditioning:a form of"modified reperfusion" protects the myocardium by activating the phosphatidylinositol 3-kinase-Akt pathway[J].Circ Res,2004,95 (3):230-232.

[4]Arslan M,Metin Comu F,Kücük A,et al.Dexmedetomidine protects against lipid peroxidation and erythrocyte deformability alterations in experimental hepatic ischemia reperfusion injury[J].Libyan J Med, 2012,7(1):18185.

[5]郭永清,余淑珍,郭劍津,等.丙泊酚與肝缺血/再灌注損傷后細(xì)胞凋亡 [J].中國(guó)藥物與臨床,2007,7(11):859-860.

（責(zé)任編輯：常海慶）

Protective Effects of Dexmedetomidine Postconditioning on Hepatic Ischemia-Reperfusion Injury in Rats

YE Min1,CHEN Darou1,CHEN Yuzhong1,DU Shaobing1,DU Zhanxin1,LI Yufeng1,TANG Peiyu1,YANG Changshan2,ZHU Xiaoqin3*
(1Department of Anesthesiology,the Second Clinical College of Guangzhou Medical University,Guangzhou 511436,China;2Department of Pathophysiology,Guangzhou Medical University,Ghuangzhou 511436,China;3Department of Physiology,Guangzhou Medical University,Ghuangzhou 511436,China;*

ZHU Xiaoqin,E-mail:495612726@qq.com)

ObjectiveTo determine the effect of dexmedetomidine postconditioning on hepatic ischemia-reperfusion injury in rats.MethodsA rat model of hepatic ischemia-reperfusion was established.The contents of serum AST and ALT,and liver superoxide dismutase (SOD)activity of each group with different treatments were measured.The frozen section of liver was observed.ResultsDexmedetomidine postconditioning could elevate the hepatic SOD activity and reduce the contents of serum AST and ALT.Pathological observation showed that:compare with group S,the liver tissue in group IR had more obviously damage;Compared with group IR,the damage of liver tissue in group P and group Dex were alleviated,the damage of liver tissue in group N were aggravated.ConclusionsDexmedetomidine postconditioning attenuates hepatic ischemia-reperfusion injury in rats.

Dexmedetomidine;Postconditioning;Hepatic ischemia-reperfusion;Protection

R614

：A

10.3969/j.issn.1674-4659.2017.02.0176

2016－10－13

2016－12－02

2016年度全國(guó)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目 （No. 201610570006）；廣東大學(xué)生科研創(chuàng)新培育專項(xiàng)資金 “攀登計(jì)劃”項(xiàng)目（No.pdjh2016b0411）；2015-2016年廣州醫(yī)科大學(xué)大學(xué)生課外科技活動(dòng)立項(xiàng)資助研究項(xiàng)目 （No.2015A005）

葉敏 （1994－），女，廣東信宜人，麻醉專業(yè)本科。

＊通訊作者：朱曉琴，博士，教授，E－mail：495612726＠qq.com。