肛瘺患者術(shù)后創(chuàng)面新血管形成與VEGF和VEGFR?2表達的影響

謝家良 聶紅海 朱衛(wèi)洲

肛瘺患者術(shù)后創(chuàng)面新血管形成與VEGF和VEGFR?2表達的影響

謝家良 聶紅海 朱衛(wèi)洲

目的研究貝復(fù)新凝膠（重組牛堿性成纖維細胞生長因子凝膠）對肛瘺術(shù)后創(chuàng)面新血管生成恢復(fù)與血管內(nèi)皮細胞生長因子（VEGF）及其受體（VEGFR?2）表達的影響。方法選擇2014年12月～2016年12月間我科收治的肛瘺掛線術(shù)后患者60例，分為觀察組（n=30）和對照組（n=30），觀察組以貝復(fù)新凝膠進行治療，對照組以傳統(tǒng)凡士林紗布治療，治療后7 d和14 d檢測創(chuàng)面毛細血管數(shù)量和VEGF、VEGFR?2表達水平。結(jié)果觀察組7 d、14 d的創(chuàng)面毛細血管數(shù)量、VEGF和VEGFR?2表達水平均明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；且創(chuàng)面毛細血管數(shù)量與VEGF、VEGFR?2表達呈顯著正相關(guān)（r=0.714，P＜0.05；r=0.652，P＜0.05）。結(jié)論貝復(fù)新凝膠能促進肛瘺術(shù)后創(chuàng)面新血管恢復(fù)，提高創(chuàng)面VEGF和VEGFR?2表達水平。

肛瘺；重組牛堿性成纖維細胞生長因子凝膠；血管；血管內(nèi)皮細胞生長因子；受體

肛瘺（anal fistula）是一種臨床上常見的直腸肛管疾病，其是肛門周圍的肉芽腫性管道，包括內(nèi)口、瘺管、外口3個部分。手術(shù)是治愈肛瘺的唯一方法，但肛門具有排便的特殊生理功能，因此肛瘺手術(shù)切口一般不予縫合，造成術(shù)后創(chuàng)面大、疼痛明顯且愈合緩慢［1］。肛瘺術(shù)后創(chuàng)面的傳統(tǒng)護理方法是采用凡士林紗布覆蓋傷口，從而對創(chuàng)面起到潤滑防護的作用，但其不能加速傷口的愈合［2，3］。最新的研究表明，外源性生長因子對創(chuàng)面愈合有著較好的促進作用，且安全性得到保證［4］。我科對貝復(fù)新凝膠（重組牛堿性成纖維細胞生長因子凝膠）促進肛瘺術(shù)后創(chuàng)面新血管恢復(fù)與血管內(nèi)皮細胞生長因子（VEGF）及其受體（VEGFR?2）表達的影響進行了研究，本文現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014年12月～2016年12月間我科收治的肛瘺患者60例，所有入選患者入院后常規(guī)行盆腔磁共振增強掃描及電子腸鏡檢查，排除了高位、低位的復(fù)雜性肛瘺或合并肛周膿腫的診斷，所有入選病例均符合單純性低位肛瘺診斷標(biāo)準［4］，術(shù)前常規(guī)不使用抗生素，入院第3天在硬外麻醉下行瘺管部分切除、肛瘺掛線術(shù)，創(chuàng)面止血不縫合，術(shù)后常規(guī)留置肛管，術(shù)后連續(xù)3天使用抗生素注射用頭孢呋辛靜滴；排除標(biāo)準：直腸惡性腫瘤、潰瘍性結(jié)腸炎等腸道疾病者；糖尿病、心腦血管疾病、結(jié)核等影響創(chuàng)面愈合疾病者；其他嚴重疾病者。按照入院先后順序?qū)?0例患者分為觀察組（n=30）和對照組（n=30），其中觀察組男17例，女13例，年齡19～64歲，平均38.9±10.3歲，病程1～18年，平均11.4±4.2年；對照組男16例，女14例，年齡18～63歲，平均39.7±11.5歲，病程1～17年，平均11.1±5.0年。兩組一般資料如性別、年齡、病程等等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 治療方法

患者均于肛瘺掛線術(shù)術(shù)后第2天拔除肛管，每日清晨排便后以溫鹽水坐浴10～15 min，以生理鹽水棉球清創(chuàng)并以碘伏消毒。觀察組以棉簽將貝復(fù)新凝膠（重組牛堿性成纖維細胞生長因子凝膠，21 000 U/5g/支，國藥準字S20040001，珠海億勝生物制藥有限公司）均勻涂抹于創(chuàng)面上，厚度為1～2 mm，然后以無菌紗布包扎固定，每日換藥1次。對照組以傳統(tǒng)凡士林砂條覆蓋于創(chuàng)面上，然后以無菌紗布包扎固定，每日換藥1次。所有患者行肛瘺掛線術(shù)后第14天橡皮巾掛線自行脫落，瘺管完全掛開，創(chuàng)面可見新鮮肉芽組織生長，創(chuàng)面愈合良好。出院前常規(guī)行直腸超聲檢查，排除新瘺道形成。

1.3 觀察指標(biāo)及檢測方法

1.3.1 創(chuàng)面毛細血管數(shù)量觀察分別與術(shù)后7 d和14 d沿創(chuàng)面取1.0 mm×1.0 mm新鮮肉芽組織標(biāo)本，以20%甲醛固定，常規(guī)脫水，再以石蠟包埋，5 μm連續(xù)切片，行蘇木素?伊紅染色，于400×視野下計算每個視野內(nèi)具有完整管腔的毛細血管數(shù)，每張切片計算3個視野，取其平均值。

1.3.2 VEGF和VEGFR?2表達檢測將上述切片以免疫組化法［5］檢測，試劑由美國R&D公司提供。于200×視野下計算表達陽性信號（黃染）進行計數(shù)，計算其陽性率，每張切片計算3個視野，取其平均值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。創(chuàng)面毛細血管數(shù)量、VEGF和VEGFR?2表達以x±s進行描述，進行t檢驗，并進行Spearman相關(guān)性分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組創(chuàng)面毛細血管數(shù)量比較

兩組創(chuàng)面毛細血管數(shù)量比較如表1。觀察組7 d、14 d的創(chuàng)面毛細血管數(shù)量均明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t＞3.898，P＜0.05）。

表1 兩組創(chuàng)面毛細血管數(shù)量比較（x±s）

2.2 兩組VEGF和VEGFR?2表達比較

兩組VEGF和VEGFR?2表達比較如表2。觀察組7 d、14 d的VEGF表達水平均明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t＞2.341，P＜0.05）；觀察組7 d、14 d的VEGFR?2表達水平均明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t＞2.203，P＜0.05）。

表2 兩組創(chuàng)面毛細血管數(shù)量比較（x±s）

2.3 HE染色結(jié)果比較

經(jīng)過HE染色結(jié)果比較，見圖1，觀察組14 d的創(chuàng)面毛細血管數(shù)量均明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t＞3.898，P＜0.05），說明貝復(fù)新凝膠能顯著促進肛瘺術(shù)后創(chuàng)面新血管恢復(fù)。

2.4 創(chuàng)面毛細血管數(shù)量與VEGF、VEGFR?2表達的相關(guān)性

相關(guān)性分析表明，創(chuàng)面毛細血管數(shù)量與VEGF表達呈顯著正相關(guān)（r=0.714，P＜0.05），創(chuàng)面毛細血管數(shù)量與VEGFR?2表達呈顯著正相關(guān)（r=0.652，P＜0.05）。

圖1 肛瘺創(chuàng)面組織HE染色所示毛細血管數(shù)量

3 討論

肛瘺是高發(fā)的肛周疾病之一，其在國內(nèi)的發(fā)病率占肛腸疾病的3%左右，肛瘺自愈率極低，因此絕大部分患者均需進行手術(shù)治療。由于肛瘺特殊的生理位置，肛瘺手術(shù)后創(chuàng)面無法縫合，術(shù)后創(chuàng)面恢復(fù)困難，促進創(chuàng)面愈合是當(dāng)前術(shù)后治療的重點之一。研究表明，肛瘺術(shù)后創(chuàng)面修復(fù)包括局部炎癥反應(yīng)、細胞增殖分化、肉芽組織形成和組織重建等3個階段，愈合過程中生長因子具有明顯的調(diào)控和促愈作用［6，7］。其中VEGF是一種作用于內(nèi)皮細胞的促血管生長因子，其具有廣泛的生理作用，其他生長因子的促血管生成作用都需要通過VEGF而實現(xiàn)，研究其和受體的表達對創(chuàng)面愈合機制具有重要的作用［8］。

成纖維細胞生長因子是一種對來源于中、外胚層的細胞包括上皮細胞、真皮細胞、成纖維細胞、血管內(nèi)皮細胞等具有促進修復(fù)、再生的作用的生長因子，其能促進毛細血管再生，改善局部血液循環(huán)，加速創(chuàng)面的愈合，因而在肛瘺術(shù)后創(chuàng)面愈合中具有很好的療效。目前臨床上應(yīng)用的主要是重組牛堿性成纖維細胞生長因子，能緩解疼痛、促進組織生長并加速創(chuàng)面愈合，且其應(yīng)用安全性良好。Kubota等［6］收集9例肛瘺，觀察膿腫切開后使用生長因子噴劑對創(chuàng)面愈合的效果，結(jié)果顯示反應(yīng)良好。治療開始后平均7.3±1.9天瘺管周圍局部腫脹消退。1例治療7個月后出現(xiàn)輕度復(fù)發(fā)，治療后1個月出現(xiàn)新發(fā)病灶，繼續(xù)使用生長因子噴劑后痊愈，近1年的隨訪檢查正常。其余患者在平均隨訪14.1±3.2月無復(fù)發(fā)。

在本研究中，我科對肛瘺掛線術(shù)患者使用貝復(fù)新凝膠（重組牛堿性成纖維細胞生長因子凝膠）進行治療，以傳統(tǒng)方法作為對照，治療后7 d和14 d觀察創(chuàng)面毛細血管數(shù)量和VEGF、VEGFR?2表達水平，結(jié)果表明觀察組7 d、14 d的創(chuàng)面毛細血管數(shù)量均明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，說明貝復(fù)新凝膠能顯著促進肛瘺術(shù)后創(chuàng)面新血管恢復(fù)。而觀察組7 d、14 d的VEGF表達水平均明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；觀察組7 d、14 d的VEGFR?2表達水平均明顯高于對照組（P＜0.05）。相關(guān)性分析表明，創(chuàng)面毛細血管數(shù)量與VEGF表達呈顯著正相關(guān)（P＜0.05），創(chuàng)面毛細血管數(shù)量與VEGFR?2表達呈顯著正相關(guān)（P＜0.05）。說明貝復(fù)新凝膠能提高肛瘺術(shù)后創(chuàng)面VEGF和VEG?FR?2表達水平，VEGF和VEGFR?2表達與創(chuàng)面新血管恢復(fù)具有顯著的相關(guān)性，進而促進創(chuàng)面的愈合。

綜上所述，貝復(fù)新凝膠能促進肛瘺術(shù)后創(chuàng)面新血管恢復(fù)，提高創(chuàng)面VEGF和VEGFR?2表達水平，VEGF和VEGFR?2表達與創(chuàng)面新血管恢復(fù)具有顯著相關(guān)性，進而促進創(chuàng)面的愈合。

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Effects of the recombinant bovine basic fibroblast growth factor gel on anal fistula wound，angiogenesis，and expression of VEGF and VEGFR?2

XIE Jialiang，NIE Honghai，ZHU Weizhou.Department of Surgery，Qingyuan TCM Hospital，Qingyuan，Guangdong，China.

ObjectiveTo investigate the effects of shellfish Fuxin gel（recombinant bovine basic fibroblast growth factor gel）on anal fistula wound，angiogenesis and vascular endothelial growth factor（VEGF）and its receptor（VEGFR?2）expression.MethodsSixty cases of post?operation of anal fistula thread?drawing from Jan 2013 to Dec 2016 were selected and divided into observation group（n=30），treated with Bei Fuxin Gel，and control group（n=30），treated with Vaseline gauze.The number of capillaries and the expression level of VEGF and VEGFR?2 were detected in 7 days and 14 days after treatment.ResultsThe number of capillaries，expression level of VEGF and VEGFR?2 of the observation group are much higher，with statistically significance（all P values＜0.05）respectively.Related analysis showed that wound capillary number and VEGF expression was significantly positive correlated（r=0.714，P＜0.05），wound capillary number and VEGFR?2 expression was significantly positive correlation（r=0.652，P＜0.05）.ConclusionBei Fuxin Gel can promote angiogenesis on the wound after anal fistula surgery，accelerate the expression of VEGF and VEGFR?2.There was a significant positive correlation between the number of capillaries and VEGF，VEGFR?2 expression.

anal fistula；recombinant bovine basic fibroblast growth factor gel；blood vessels；vascular endothelial growth factor；receptor

R657.1+6

A

10.3969/j.issn.1009?976X.2017.02.008

2016?12?25）

511500廣東清遠清遠市中醫(yī)院科

謝家良，Email：13680018001@139.com