復(fù)方鋁酸鉍顆粒對IL-1β致乙酸胃潰瘍復(fù)發(fā)模型抑制作用的研究

陳婉珍 張芷嫣 王輝 朱方石

·論著·

復(fù)方鋁酸鉍顆粒對IL-1β致乙酸胃潰瘍復(fù)發(fā)模型抑制作用的研究

陳婉珍 張芷嫣 王輝 朱方石

目的 探討復(fù)方鋁酸鉍顆粒(得必泰)對IL-1β致乙酸胃潰瘍復(fù)發(fā)模型的抑制作用。方法 采用雷貝拉唑干預(yù)乙酸致大鼠胃潰瘍的潰瘍愈合模型，將大鼠隨機分為空白組、模型組、雷貝拉唑組及得必泰組。予0.9%氯化鈉溶液、雷貝拉唑及得必泰+雷貝拉唑混懸液灌胃干預(yù)潰瘍愈合大鼠7周后，再予大鼠腹腔注射IL-1β誘導(dǎo)潰瘍復(fù)發(fā)形成。檢測各組大鼠血清學(xué)及病理學(xué)指標(biāo)。結(jié)果 與模型組比較，雷貝拉唑組及得必泰組潰瘍復(fù)發(fā)率及潰瘍指數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與模型組比較，雷貝拉唑組PGE2、EGF含量升高，GAS明顯下降(P<0.05或P<0.01)；得必泰組PGE2、EGF升高和GAS下降均差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。得必泰組具有一定的優(yōu)勢傾向；雷貝拉唑組及得必泰組大鼠未復(fù)發(fā)典型潰瘍的胃黏膜形態(tài)及病理組織學(xué)形態(tài)均較模型組好。結(jié)論 得必泰聯(lián)合雷貝拉唑?qū)L-1β致乙酸胃潰瘍復(fù)發(fā)具有抑制作用。

復(fù)方鋁酸鉍顆粒；IL-1β；胃潰瘍；復(fù)發(fā)；得必泰

胃潰瘍(gastric ulcer，GU)是一種常見的消化道疾病，主要與胃及十二指腸黏膜的正常防御-修復(fù)系統(tǒng)和損傷因素失衡相關(guān)[1]。隨著質(zhì)子泵抑制劑、胃黏膜保護(hù)劑等的廣泛應(yīng)用，其治愈率超過90%。然而由于H.pylori感染、長期服用NSAIDs及阿司匹林等導(dǎo)致愈合潰瘍?nèi)菀讖?fù)發(fā)，據(jù)不全統(tǒng)計，潰瘍治療后1年復(fù)發(fā)率可達(dá)50%以上[2]。因此，有效預(yù)防潰瘍復(fù)發(fā)亦成為臨床常見問題之一。復(fù)方鋁酸鉍顆粒(得必泰)是臨床常用鉍劑之一，主要用于消化性潰瘍、慢性胃炎、十二指腸球炎等疾病的治療。臨床小樣本觀察發(fā)現(xiàn)，長期使用復(fù)方鋁酸鉍顆粒一定程度上能抑制或減少胃潰瘍的復(fù)發(fā)。本文擬通過對IL-1β致大鼠愈合潰瘍的再誘發(fā)的研究，評價得必泰在抗?jié)儚?fù)發(fā)中的作用。總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF級雄性SD大鼠25只，體重(200±20)g，由南通大學(xué)動物中心提供，許可證號：SCXK(蘇)2014-0001。

1.2 主要藥物及試劑 雷貝拉唑腸溶膠囊20 mg×7粒(江蘇濟川制藥有限公司)；復(fù)方鋁酸鉍顆粒(得必泰)1.3 g×18袋(遼寧奧達(dá)制藥有限公司)；GAS、EGF、PGE2 ELISA試劑盒購置于南京建成生物工程研究所；蘇木素-伊紅(HE)染液購置于武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 主要儀器 RV10旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國IKA集團)；三用恒溫水箱(美國Cole-Parmer公司)；CKX 31倒置生物顯微鏡(日本Olympus公司)；Axio Observer A1 倒置熒光顯微鏡(德國ZEISS公司)；圖像分析系統(tǒng)(德國LEICA公司)；全波長酶標(biāo)儀(美國Thermo)。

1.4 造模方法

1.4.1 建立大鼠GU模型:采用改良的Okabe乙酸致胃潰瘍方法[3]，將20只SD大鼠予10%水合氯醛0.3 ml/100 g麻醉后，碘伏皮膚消毒，于劍突下1～2 cm 剪開皮膚、逐層分離，打開腹腔輕拉出胃，于竇體交界處貼敷沾有98%冰乙酸的5 film濾紙2次，每次30 s，0.9%氯化鈉溶液沖洗干凈后局部噴灑青霉素G后縫合腹腔，再予青霉素G 40萬U肌內(nèi)注射預(yù)防感染，術(shù)后24 h正常喂養(yǎng)。術(shù)后第2天隨機處死2只大鼠，確認(rèn)乙酸胃潰瘍模型建立。

1.4.2 雷貝拉唑干預(yù)使?jié)冇?根據(jù)《藥理實驗方法學(xué)》人與動物間體表面積折算的等效劑量換法[4]計算大鼠用藥劑量，予大鼠1.8 mg/kg雷貝拉唑混懸液2 m/dl灌胃6周(經(jīng)預(yù)實驗，予雷貝拉唑干預(yù)胃潰瘍大鼠，每周處死3只大鼠，觀察其胃黏膜形態(tài)，至6周時潰瘍完全愈合)。6周后隨機處死2只大鼠確認(rèn)潰瘍愈合。

1.4.3 分組及抗?jié)儚?fù)發(fā)給藥:隨機分為4組，每組5只，并計算大鼠用藥劑量如下：①空白組：正常飼養(yǎng)，予普通顆粒狀飼料及大鼠清潔用水；②模型組：正常飼養(yǎng)，另予0.9%氯化鈉溶液2 ml/d灌胃；③雷貝拉唑組：正常飼養(yǎng)，另予1.8 mg·kg-1·d-1雷貝拉唑混懸液2 ml/d灌胃×7周；④得必泰組：正常飼養(yǎng)，另予0.23 g·kg-1·d-1得必泰混懸液+1.8 mg·kg-1·d-1雷貝拉唑2 ml/d灌胃×7周。

1.4.4 IL-1β致乙酸GU復(fù)發(fā)模型:參考文獻(xiàn)造模方法[5]：除正常組外，模型組和各藥物干預(yù)組7周后予大鼠腹腔注射1 μg/kg的IL-1β，48 h后誘導(dǎo)潰瘍復(fù)發(fā)形成。

1.5 標(biāo)本的采集及制備

1.5.1 血清學(xué)標(biāo)本:腹主動脈采血3 ml/只，以3 000 r/min離心10 min，分離上層血清，置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5.2 病理學(xué)標(biāo)本:采血后將大鼠用頸椎脫臼法處死，剖腹取出全胃，沿胃大彎側(cè)剪開，0.9%氯化鈉溶液沖洗干凈后，觀察胃大體形態(tài)，用游標(biāo)卡尺(精確到0.01 mm)測量潰瘍大小，留取部分潰瘍及潰邊標(biāo)本約1 cm×1 cm大小用4%多聚甲醛固定備用。

1.6 檢測指標(biāo)及方法

1.6.1 大鼠一般情況及胃標(biāo)本大體形態(tài):觀察大鼠毛色、體重、大便、進(jìn)食量、飲水量、精神狀態(tài)及活動度等；觀察胃黏膜的色澤、皺襞形態(tài)及潰瘍形成等。

1.6.2 潰瘍指數(shù)及潰瘍抑制率[6]:潰瘍指數(shù)(UI)=潰瘍最長徑×最寬徑；潰瘍抑制率=(模型組UI-給藥組UI)/模型組UI×100%。

1.6.3 血清PGE2、EGF、GAS檢測:采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清前列腺素E2(PGE2)、表皮生長因子(EGF)及胃泌素(GAS)含量，嚴(yán)格按照試劑盒操作步驟操作。

1.6.4 病理學(xué)方法:取出4%多聚甲醛固定的胃組織標(biāo)本，不同濃度乙醇梯度脫水后，二甲苯透明，石蠟浸泡后常規(guī)石蠟包埋，經(jīng)切片、攤片及烤片后，將制備的5 μm切片37℃溫箱12 h后，二甲苯脫蠟，不同濃度乙醇梯度進(jìn)行去二甲苯處理，蘇木素-伊紅(HE)染液染色后，中性樹脂封片，光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠胃黏膜組織的病理學(xué)變化。

2 結(jié)果

2.1 大鼠的一般情況 乙酸致胃潰瘍術(shù)后第1天，死亡1只大鼠，考慮感染可能性大。空白組大鼠毛色光澤，體型肥胖，活動靈敏。模型組大鼠自造模起2周后毛色發(fā)黃無光澤、稀疏易脫落，并隨造模時間推移大鼠逐漸喜聚集，活動減少，并出現(xiàn)大便稀軟現(xiàn)象，進(jìn)食量及飲水量亦較正常組減少。雷貝拉唑干預(yù)6周(潰瘍愈合)后，大鼠毛色、精神狀態(tài)、體重和活動情況逐漸恢復(fù)至基本正常。分組藥物干預(yù)，雷貝拉唑組與得必泰組大鼠較模型組大鼠毛色光澤，活動靈敏，進(jìn)食量及體重增加。

2.2 大鼠潰瘍復(fù)發(fā)率、UI、潰瘍抑制率 模型組5只大鼠均可見潰瘍復(fù)發(fā)，雷貝拉唑組3只大鼠潰瘍復(fù)發(fā)，得必泰組為2只大鼠潰瘍復(fù)發(fā)。藥物干預(yù)組與模型組潰瘍復(fù)發(fā)率及潰瘍指數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；2組治療組組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，得必泰組UI及潰瘍抑制率的數(shù)值呈略優(yōu)趨勢。見表1。

表1 3組大鼠復(fù)發(fā)數(shù)、復(fù)發(fā)率(%)、UI及潰瘍抑制率 n=5

注: 與模型組比較，*P<0.01

2.3 肉眼觀大鼠胃黏膜形態(tài) 空白組大鼠胃黏膜完整，皺襞集中，無充血、水腫或糜爛。模型組大鼠胃黏膜潰瘍灶明顯，潰瘍中心蒼白，潰瘍凹陷較深，周圍黏膜充血水腫明顯。4組未復(fù)發(fā)典型潰瘍的大鼠胃黏膜情況：雷貝拉唑組黏膜完整，可見潰瘍瘢痕，無明顯黏膜皺襞集中。得必泰組大鼠胃黏膜可見潰瘍瘢痕，周圍黏膜充血水腫，黏膜皺襞集中明顯。見圖1。

圖1 4組大鼠胃黏膜形態(tài)

2.4 大鼠的病理組織學(xué)形態(tài) 正常組大鼠胃黏膜上皮完整，腺體排列規(guī)整，未見明顯炎性細(xì)胞浸潤。模型組大鼠胃黏膜上皮缺損，再生黏膜薄，炎性細(xì)胞浸潤多，囊狀擴張的腺體數(shù)目多。各組未復(fù)發(fā)典型潰瘍的大鼠胃黏膜病理切片：雷貝拉唑組大鼠胃黏膜上皮較完整，再生黏膜厚，炎性細(xì)胞浸潤少，囊狀擴張的腺體數(shù)目較少。得必泰組大鼠胃黏膜上皮較完整，再生黏膜較厚，炎性細(xì)胞浸潤較少，囊狀擴張的腺體的數(shù)目少。見圖2。

圖2 4組大鼠病理組織切片(HE×400)

2.5 大鼠血清PEG2、EGF、GAS的含量 與正常組比較，模型組大鼠中PGE2、EGF的含量均呈不同程度下降、GAS升高，其中PGE2、EGF差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，表明潰瘍復(fù)發(fā)過程中PGE2、EGF含量明顯下降。雷貝拉唑干預(yù)后，PGE2、EGF含量升高，GAS含量明顯下降(P<0.05或P<0.01)。得必泰組PGE2、EGF和GAS與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。但治療組組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。得必泰組調(diào)節(jié)異常的數(shù)值差異有一定的優(yōu)勢傾向。見表2。

組別PGE2EGFGAS正常組 1021.65±194.87859.57±68.22740.50±95.36#模型組 646.73±191.26*662.6±43.42*902.27±83.69*雷貝拉唑組983.20±101.20△803.22±30.47△694.94±57.56☆得必泰組 1156.38±41.36#821.30±56.77△755.01±28.00△

注: 與正常組比較，*P<0.05，#P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，☆P<0.01

3 討論

胃潰瘍[1]是指在各種致病因素作用下黏膜發(fā)生炎性及壞死性病變，其病變可深達(dá)黏膜肌層，是臨床較為常見的消化系統(tǒng)疾病之一。目前臨床用藥主要包括抑制胃酸分泌藥物、保護(hù)胃黏膜藥物及抗H.pylori藥物等[7]，其臨床治療有效率較高，但是有效控制潰瘍復(fù)發(fā)是當(dāng)前面臨的難題之一。除積極控制發(fā)病危險因素、干預(yù)生活方式外[8]，預(yù)防性藥物治療仍是臨床關(guān)注重點。

復(fù)方鋁酸鉍顆粒(得必泰)是一種復(fù)方制劑，主要成分為鋁酸鉍、重質(zhì)碳酸鎂、碳酸氫鈉及弗朗鼠李皮、小茴香、甘草等中藥提取物。研究顯示，得必泰具有增強胃、十二指腸黏膜屏障，促進(jìn)黏膜再生，提高潰瘍愈合率的作用[9]。前列腺素E2(PGE2)是一種重要的胃黏膜保護(hù)因素，可促進(jìn)胃黏膜屏障修復(fù)，改善胃黏膜血供[10]。消化性潰瘍患者其血清PGE2含量降低，潰瘍愈合后其含量增加[11]。表皮生長因子(EGF)是對組織細(xì)胞有強烈的促分裂作用的一種蛋白，具有抑制胃酸的分泌，促進(jìn)損傷黏膜的修復(fù)等作用[12]。胃泌素(GAS)可以反映胃黏膜炎癥狀況，在GU的發(fā)生發(fā)展過程中，血清GAS水平升高，隨著潰瘍的愈合，其水平可下降至正常[13]。

本實驗研究結(jié)果提示，對于胃潰瘍愈合者，預(yù)防性給予PPI(雷貝拉唑)一定程度上能抑制潰瘍復(fù)發(fā)，聯(lián)合應(yīng)用鉍劑，如得必泰，可提高潰瘍愈合質(zhì)量，降低潰瘍復(fù)發(fā)率及潰瘍指數(shù)，提高潰瘍抑制率，其效果優(yōu)于單純使用雷貝拉唑。雷貝拉唑組及得必泰組未復(fù)發(fā)典型潰瘍的大鼠胃黏膜形態(tài)及病理組織學(xué)形態(tài)均較模型組好。雷貝拉唑聯(lián)合得必泰其調(diào)節(jié)血清中PGE2、EGF及GAS的作用較單純使用雷貝拉唑效果亦增強。說明臨床預(yù)防消化性潰瘍復(fù)發(fā)，在使用PPI的同時聯(lián)合應(yīng)用得必泰，在抑制其復(fù)發(fā)方面可能顯示出最佳效果。

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Study of the inhibitory effects of compound bismuth aluminate granules on IL-1β induced relapse models of acetic acid gastric ulcer in rats

CHENWanzhen,ZHANGZhiyan,WANGHui,etal.

TheThirdClinicalMedicalCollegeofNanjingTCMUniversity,Nanjing210028,China

Objective To investigate the inhibitory effects of compound bismuth aluminate granules (Debitai) on IL-1β induced relapse models of acetic acid gastric ulcer in rats.Methods The rats were randomly divided into blank group,model group,rabeprazole group and Debitai group.The rats models with acetic acid induced gastric ulcer were interfered by rabeprazole,and the healing rats were given 0.9% sodium chloride solution,rabeprazole,Debitai+rabeprazole suspension by gavagee for 7 weeks,then IL-1β was injected intraperitoneally to induce relapse models of gastric ulcer.The serum indexes and pathological indexes were detected in all the groups.Results There were significant differences in relapse rates and gastric ulcer indexes between model group and rabeprazole group,Debitai group (P<0.01).Ascomparedwiththoseinmodelgroup,theserumlevelsofPGE2andEGFinrabeprazolegroupandDebitaigroupweresignificantlyincreased(P<0.05orP<0.01),however,the serum levels of GAS were significantly decreased (P<0.05orP<0.01).TheserumlevelsofPGE2andEGFinDebitaigroupweresignificantlyincreased,buttheserumlevelsofGASweresignificantlydecaresed(P<0.05orP<0.01).ThegastricmucousmembranemorphousandhistopathologicalmorphousinrabeprazolegroupandDebitaigroupweresuperiortothoseinmodelgroup.Conclusion The Debitai combined with rabeprazole has inhibitory effects on the relapse of IL-1β induced acetic acid gastric ulcer in rats.

compound bismuth aluminate granules; IL-1β; gastric ulcer;relapse

10.3969/j.issn.1002-7386.2017.08.007

項目來源：中國中醫(yī)科學(xué)院江蘇分院橫向課題(編號：H1401)；江蘇省科技創(chuàng)新與成果轉(zhuǎn)化專項課題(編號：BM 2009203)

210028 南京市，南京中醫(yī)藥大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院(陳婉珍、張芷嫣、王輝)；江蘇省中醫(yī)藥研究院中西醫(yī)結(jié)合臨床研究室(朱方石)

朱方石，210028 南京市，江蘇省中醫(yī)藥研究院中西醫(yī)結(jié)合臨床研究室；

E-mail：zhufangshi@126.com

R

A

1002-7386(2017)08-1148-04

2016-09-17)