HPLC法測定羌黃祛痹顆粒中異歐前胡素的含量

陳美玲　劉琴　吳翠　張娟　姚青　徐桂紅

摘要：目的 建立羌黃祛痹顆粒中異歐前胡素含量測定的方法。方法 采用超聲處理，高效液相色譜法，C18柱，以乙腈-水（60∶40）為流動相，檢測波長為315 nm。結(jié)果 異歐前胡素在1.19～9.51 μg/ml范圍內(nèi)，呈良好線性（r=0.99995），加樣回收率平均為97.00%，重復(fù)性RSD%為0.70%。結(jié)論 采用超聲處理HPLC法測定羌黃祛痹顆粒中異歐前胡素方法可行。

關(guān)鍵詞：羌黃祛痹顆粒；異歐前胡素；高效液相色譜法

Determination of the Content of HPLC in the Granules of Qiang Huang Huang Jie Tong Granules by HPLC

CHEN Mei-ling，LIU Qin，WU Cui，ZHANG Juan，YAO Qing，XU Gui-hong

（Jiangsu Kangyuan Pharmaceutical Co.，Ltd.，Lianyungang 222047，Jiangsu，China）

Abstract：Objective To establish a method for the determination of the content of different components in the granules of Qiang Huang Huang Jie Tong.Methods Ultrasonic treatment，HPLC，C18 column，acetonitrile water（60：40）as mobile phase，detection wavelength of 315 nm.Results Isoimperatorin in 1.19～9.51 μg/ml range in a good linear（r=0.99995），the average recovery rate was 97.00%，the repeatability RSD% is 0.70%.Conclusion By ultrasonic treatment HPLC method for the determination of the Yellow Qubi granule isoimperatorin method is feasible.

Key words：Qianghuang Qushu Granule；Isoimperatorin；High performance liquid chromatography

羌黃祛痹顆粒由片姜黃、羌活、當(dāng)歸、赤芍、海桐皮、白術(shù)、甘草等七味藥材組成，具有祛風(fēng)除濕，散寒化瘀，通絡(luò)止痛的作用。適用于肩痹（肩周炎）屬風(fēng)寒濕痹證者，癥見肩部疼痛，肩不能舉，肩部怕冷，得暖痛減等癥，舌質(zhì)淡，苔白，脈弦或弦細(xì)。異歐前胡素是方中羌活藥材中有效成分之一，具有抗炎、抗菌和鎮(zhèn)痛等活性[1-2]，許多制劑把異歐前胡素作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)之一，所以本文采用高效液相法羌黃祛痹顆粒中異歐前胡素的含量進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

1.1儀器 高效液相色譜儀（Agilent 1100），Kromasil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），KQ-250DV超聲波清洗儀。

1.2試藥 羌黃祛痹顆粒由江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司提供，異歐前胡素對照品為中國食品藥品檢定研究院所提供（批號：110827-201611），乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法學(xué)考察[3]與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（60∶40）[4]；柱溫：30℃；檢測波長：315 nm；流速：1.0 ml/min。

2.2對照品溶液的制備 精密稱取異歐前胡素對照品適量，加入乙醇制成每1 ml含2 μg的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備[3] 取裝量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入乙醇25 ml，超聲處理（250 W，40 kHz）30 min，放冷，稱重，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3 方法學(xué)試驗(yàn)

3.1加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品（異歐前胡素含量：0.594 mg/g）約0.1 g，精密稱定，平行稱取9份，3份一組，置錐形瓶中，各組分別精密加入異歐前胡素對照品溶液（每1 ml含異歐前胡素0.0594 mg）各1.5 ml、1.0 ml和0.5 ml，加入乙醇25 ml，超聲處理（250 W，40 kHz）30 min，放冷，稱重，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，即得。分別精密吸取10 μl，注入液相色譜儀，測定，計(jì)算異歐前胡素的平均回收率為97.00%，RSD為0.60%，該方法回收率良好。

3.2重復(fù)性試驗(yàn) 取同一樣品，按制備供試品溶液方法制備，平行制備6份，測定其結(jié)果分別為0.590 mg/g、0.590 mg/g、0.598 mg/g、0.588 mg/g、0.595 mg/g、0.590 mg/g，計(jì)算6個測定結(jié)果的RSD為0.70%，表明該方法重復(fù)性良好。

3.3精密度試驗(yàn) 精密吸取異歐前胡素對照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算其峰面積RSD為0.40%，結(jié)果表明了儀器精密度良好。

3.4專屬性驗(yàn)證 陰性溶液的制備：取按處方及制備工藝制成不含羌活的陰性供試品。再按供試品溶液制備方法制成陰性供試品溶液，精密吸取對照品溶液、陰性供試品溶液、供試品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果表明，陰性供試品溶液對異歐前胡素測定無干擾。

圖1 色譜圖

3.5線性關(guān)系考察 精密稱取異歐前胡素對照品適量，制得一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)品儲備液（濃度為59.44 μg/ml）。取儲備液0.5 ml，1 ml，2 ml，3 ml，4 ml分別加甲醇定容至25 ml，得濃度為1.19 μg/ml、2.38 μg/ml、4.76 μg/ml、7.13 μg/ml、9.51 μg/ml的溶液，分別進(jìn)樣10 μl，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)（X），異歐前胡素峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，異歐前胡素在1.19～9.51 μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，線性回歸方程為y =30.233x+0.7099，r=0.99995。

3.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別在0 h、1 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h進(jìn)樣，記錄峰面積。RSD為0.4%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

4 討論

4.1通過參考文獻(xiàn)及采用二極管陣列檢測器對照品溶液的進(jìn)行全波長掃描，對檢測波長進(jìn)行了選擇，實(shí)驗(yàn)表明，異歐前胡素在315 nm處吸收峰靈敏度高，其他色譜峰均不干擾測定，故選擇315 nm作為檢測波長[5]。

4.2提取方法的考察 采用不同提取溶劑（甲醇、乙醇、乙酸乙酯）、不同的提取方法（回流、超聲）和不同提取時間（15 min、30 min、60 min）等因素對提取結(jié)果的影響。最終確定提取方案為：乙醇超聲處理30 min。本法簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，適用其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

參考文獻(xiàn)：

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[4]曹恒濤，趙江紅.HPLC 法測定天麻頭痛片中歐前胡素和異歐前胡素的含量[J].中國民族民間醫(yī)藥，2015（12）：5-6.

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編輯/楊倩