氣相色譜法測定桂枝茯苓膠囊中丹皮酚的含量

薛利東+杜麗

摘 要：建立氣相色譜法測定桂枝茯苓膠囊中丹皮酚的含量。方法：以正十五烷為內(nèi)標(biāo)物，HP-1甲基硅氧烷彈性石英毛細(xì)管柱（30m×0.25mm，0.25μm），柱溫：120℃，載氣流速：每分鐘2.5mL；分流進(jìn)樣，分流比為20∶1，進(jìn)樣量2μL；定量方法：內(nèi)標(biāo)峰面積法。丹皮酚在0.05～3.2mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.99996）。丹皮酚平均回收率分別為99.1%。結(jié)論：本法簡便、準(zhǔn)確，可用于丹皮酚的含量測定。

關(guān)鍵詞：桂枝茯苓膠囊；含量；測定

桂枝茯苓膠囊具有活血、化瘀、消癥等功效。桂枝茯苓膠囊主要用于女性乳腺囊性增生病屬瘀血阻絡(luò)證，癥見乳房疼痛、乳房腫塊、胸脅脹悶；婦人瘀血阻絡(luò)所致癥塊、經(jīng)閉、痛經(jīng)、產(chǎn)后惡露不盡；前列腺增生屬瘀阻膀胱證，癥見小便不爽、尿細(xì)如線、或點(diǎn)滴而下、小腹脹痛者等。現(xiàn)代藥理研究表明桂枝茯苓膠囊具有調(diào)節(jié)血流變、抗炎、子宮平滑肌的雙向調(diào)節(jié)作用、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤等作用。牡丹皮具有清熱，涼血，和血，消瘀等功效。《日華子本草》記載："除邪氣，悅色，通關(guān)腠血脈，排膿，通月經(jīng)，消撲損瘀血，續(xù)筋骨，除風(fēng)痹，落胎下胞，產(chǎn)后一切冷熱血?dú)狻?牡丹皮具有保肝護(hù)腎、降血糖、抗菌消炎、保護(hù)心血管、神經(jīng)保護(hù)、抗心律失常、抗過敏、增強(qiáng)免疫力等多種藥理作用[1-2]。丹皮酚具有鎮(zhèn)靜、催眠、抗菌、抗炎、抗氧化、降血壓等作用。本文采用氣相色譜法對桂枝茯苓膠囊中的丹皮酚進(jìn)行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：GC-4100系列氣相色譜儀（北京東西分析儀器有限公司）；AE 224 觸摸式彩屏電子分析天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）；GA-2000A低噪音空氣泵（GA-2000A低噪音空氣泵）；氮?dú)獍l(fā)生器（蘇州艾唯爾氣體設(shè)備有限公司）；北分三譜DK-6900A型自動頂空進(jìn)樣器（北京北分三譜儀器有限責(zé)任公司）；GCH-300型氫氣發(fā)生器（北京北分華譜分析儀器技術(shù)有限公司）；Medium-S超純水機(jī)（標(biāo)準(zhǔn)版）（上海和泰儀器有限公司）；AP-01P無油隔膜真空泵（杭州格圖科技有限公司）；H.S11-1電熱恒溫水浴鍋（上海昨非實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司）；R-210瑞士BUCHI旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（廣州尚準(zhǔn)儀器有限公司） ；LM-C300超聲波清洗器（武漢朗瑪瑞特儀器有限公司）。

1.2 色譜柱：HP-1甲基硅氧烷彈性石英毛細(xì)管柱（30m×0.25mm，0.25μm）。

1.3 對照品：丹皮酚對照品（中國藥品生物制品檢定所）。

1.4 試劑：水為純化水，三氯甲烷（上海安譜科學(xué)儀器有限公司）、正十五烷（上海安譜科學(xué)儀器有限公司）。

1.5 試藥：桂枝茯苓膠囊。

2 測定方法確定

2.1 色譜條件

以正十五烷為內(nèi)標(biāo)物，HP-1甲基硅氧烷彈性石英毛細(xì)管柱（30m×0.25mm，0.25μm），柱溫：120℃，載氣流速：每分鐘2.5mL；分流進(jìn)樣，分流比為20∶1；定量方法：內(nèi)標(biāo)峰面積法，進(jìn)樣量： 2μL。

2.2 對照品的制備

2.2.1 內(nèi)標(biāo)溶液的配制

取正十五烷，加三氯甲烷溶解并定容至刻度，搖勻，制成0.3mg·mL-1的溶液。

2.2.2 對照品溶液的制備

精密稱取丹皮酚對照品2.0mg至于10毫升棕色容量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液5mL，震蕩溶解，加三氯甲烷定容，搖勻。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取桂枝茯苓膠囊，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷50ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液40ml，水浴蒸干續(xù)濾液，用三氯甲烷溶解并轉(zhuǎn)移至5毫升容量內(nèi)，用三氯甲烷定容，搖勻，取2毫升至5毫升容量瓶內(nèi)，加2毫升內(nèi)標(biāo)溶液，加三氯甲烷定容，搖勻，即得。

2.4 專屬性試驗(yàn)

依照處方取桂枝、茯苓、桃仁、白芍，按樣品制備工藝制成陰性對照樣品，按供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結(jié)果在丹皮酚出峰處陰性液無色譜峰，表明本方法專屬性良好。

2.5 對照品的線性考察

按對照品溶液的制備方法分別配制0.05mg·mL-1、0.1mg·mL-1、0.2mg·mL-1、0.4mg·mL-1、0.8mg·mL-1、1.6mg·mL-1、3.2mg·mL-1的對照品溶液。取上述溶液，分別精密上述溶液吸取1μL，注人氣相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以丹皮酚與內(nèi)標(biāo)峰面積比值（Y）為縱坐標(biāo)，濃度（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。結(jié)果表明，丹皮酚在0.05～3.2mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的丹皮酚樣品6份，按測定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.88%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取對照品適量，加入到樣品中，加入量分別相當(dāng)于樣品含量的 80%、100%、120%。取模擬片照“含量測定”項(xiàng)下方法試驗(yàn)，計(jì)算回收率為 99.1%，RSD為0.93%。

2.8 樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批丹皮酚樣品，按2.3項(xiàng)下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置棕色容量瓶室溫下放置，分別于0、1、2、4h進(jìn)樣4次，計(jì)算丹皮酚峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比的RSD為0.9% （n=4）。結(jié)果表明溶液在4h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定丹皮酚三批樣品中丹皮酚的含量，結(jié)果三批樣品的含量分別為2.02、2.05、2.13mg·片-1。

3 討論

丹皮酚為白色或微黃色有光澤的針狀結(jié)晶，易溶于乙醇和甲醇中，溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳中，不溶于冷水，能隨水蒸汽揮發(fā)。目前研究丹皮酚測定方法的報(bào)道較多，如光度分析法、高效液相色譜法等，各種方法各有特點(diǎn)[3-5]。本實(shí)驗(yàn)表明此方法分離效果好、方法簡便、快捷、準(zhǔn)確，、專屬性好，可用于桂枝茯苓膠囊中丹皮酚的含量測定。

參考文獻(xiàn)

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